Prévia do material em texto
05/12/2023, 18:06 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/ 1/6 Exercício por Temas avalie sua aprendizagem Em algumas situações, a obtenção de DNA a partir de RNA transcrito é importante, como, por exemplo, na construção de bibliotecas. Considerando os conceitos relacionados a essa estratégia e a �gura acima, que mostra uma das possíveis estratégias para síntese de DNA a partir de RNA, assinale a opção correta. BIOLOGIA MOLECULAR E FARMACOGENÉTICA Lupa DGT1143_201912024365_TEMAS Aluno: MARY SUZY GOMES DE OLIVEIRA Matr.: 201912024365 Disc.: BIOLOGIA MOLECULAR 2023.3 FLEX (G) / EX Prezado (a) Aluno(a), Você fará agora seu EXERCÍCIO! Lembre-se que este exercício é opcional, mas não valerá ponto para sua avaliação. O mesmo será composto de questões de múltipla escolha. Após responde cada questão, você terá acesso ao gabarito comentado e/ou à explicação da mesma. Aproveite para se familiarizar com este modelo de questões que será usado na sua AV e AVS. AMPLIFICAÇÃO IN VITRO DE DNA 1. A reação mostrada na etapa 4 ilustra a atividade da enzima DNA polimerase. A reação mostrada na etapa 3 ilustra a atividade da enzima transcriptase reversa. A reação mostrada na etapa demonstra a desnaturação da �ta de mRNA. Na etapa 4, para que ocorra a reação, é su�ciente a adição dos nucleosídios representados por A, U, C, G. O DNA obtido pelo método ilustrado é denominado tDNA. Data Resp.: 12/09/2023 19:13:51 javascript:voltar(); javascript:voltar(); javascript:voltar(); javascript:voltar(); javascript:diminui(); javascript:diminui(); javascript:aumenta(); javascript:aumenta(); 05/12/2023, 18:06 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/ 2/6 No âmbito da replicação do DNA in vitro, a enzima polimerase assume um papel de extrema importância e centralidade. Qual é a principal função desempenhada pela enzima polimerase durante a replicação do DNA em ambiente controlado? No diagnóstico clínico-molecular, a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real pode ser utilizada para a avaliação da carga viral ou bacteriana, para a determinação da resistência a antibióticos e, até mesmo, para o prognóstico de tumores malignos. A �gura abaixo apresenta ciclos de ampli�cação de amostras por PCR em tempo real, sendo (A) uma ampli�cação de um determinado segmento gênico que identi�ca um determinado marcador tumoral em células neoplásicas e (B) uma ampli�cação do mesmo segmento gênico em células não neoplásicas. A partir das informações apresentadas, conclui-se que: Explicação: A resposta correta é: A reação mostrada na etapa 4 ilustra a atividade da enzima DNA polimerase. 2. Adicionar os primeiros nucleotídeos à �ta sintetizada. Neutralizar a carga elétrica das bases nitrogenadas. Realizar a complementação das bases nitrogenadas. Abrir a �ta dupla de DNA em �tas simples. Quebrar as pontes de hidrogênio entre as bases. Data Resp.: 04/10/2023 19:42:32 Explicação: A enzima polimerase é responsável por ler cada base nitrogenada da �ta molde (simples) e adicionar a base nitrogenada complementar na �ta que está sendo sintetizada, formando a nova �ta de DNA. Essa complementação das bases nitrogenadas (A com T e C com G) é fundamental para a replicação precisa da informação genética. 3. O aumento da �uorescência indica que a ampli�cação da sequência-alvo está ocorrendo, pois a cada ciclo, durante a desnaturação da dupla �ta, ocorre liberação da �uorescência. o Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do limiar de detecção da reação threshold, com a linha da ampli�cação gênica de cada amostra. A análise comparativa das duas amostras deve ser realizada a partir da estabilização da ampli�cação, que ocorre na fase platô, sendo alcançada no ciclo 28 para a amostra A, e no 05/12/2023, 18:06 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/ 3/6 Ao se analisar a evolução das estratégias para determinação de identidade genética, que se tornaram um procedimento sensível e informativo, pode-se notar três fases: uma inicial, após a descrição de um marcador voltado ao polimor�smo genético em 1980, que deu origem às impressões digitais de DNA, com a aplicação de técnicas de polimor�smo de tamanho dos fragmentos de restrição - restriction fragment length polymorphism (RFLP) -; uma segunda fase de incorporação de novas técnicas, no �nal da década de 80 do século XX, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), que permitiu um signi�cativo aumento na sensibilidade dos métodos e a consequente identi�cação de indivíduos com amostras colhidas de fragmentos de unhas, goma de mascar etc.; e uma terceira etapa, mais recente, cuja ênfase foi a padronização metodológica e estatística e a geração de bancos de dados. Considerando as aplicações da PCR, assinale a opção correta. Dentro do complexo processo de replicação do DNA em uma célula, duas enzimas assumem funções de extrema importância: as helicases e a primase. Qual é o papel desempenhado pelas helicases e pela primase na replicação do DNA em uma célula? ciclo 40, para a amostra B. O maior Ct (26) é observado no início da fase exponencial de ampli�cação em células não neoplásicas ( B ), e indica maior expressão comparativamente às células neoplásicas ( B ), que apresentam Ct = 17, não sendo esta sequência-alvo um bom marcador tumoral. A linha paralela ao eixo referente ao número de ciclos, na altura em que se inicia a fase exponencial da ampli�cação gênica, denominado threshold, representa falsos sinais positivos por contaminação das amostras por DNA genômico. Data Resp.: 04/10/2023 19:49:26 Explicação: A resposta correta é: o Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do limiar de detecção da reação threshold, com a linha da ampli�cação gênica de cada amostra. 4. Ao se planejar um experimento para identi�cação de indivíduos, deve-se ter o cuidado de escolher sondas para qPCR em regiões que não contenham mutações. Uma das limitações da PCR é a impossibilidade de se ampli�car diferentes sequências simultaneamente. O uso correto da PCR requer cuidados para evitar a desnaturação do DNA na etapa em que as �tas são separadas. A RT-qPCR permite a ampli�cação por meio da adição de aminoácidos a novas �tas de polímero sintetizadas. Ampli�cação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short tandem repeats) facilita a identi�cação de indivíduos. Data Resp.: 12/09/2023 19:22:27 Explicação: A resposta correta é: Ampli�cação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short tandem repeats) facilita a identi�cação de indivíduos. 5. Ler as sequências de bases nitrogenadas do DNA. Fechar a �ta dupla de DNA após a replicação. Adicionar nucleotídeos complementares à �ta de DNA. Abrir a �ta dupla de DNA e iniciar a síntese. Realizar a complementação das bases nitrogenadas. Data Resp.: 04/10/2023 19:41:48 05/12/2023, 18:06 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/ 4/6 SNPs são empregados amplamente para a identi�cação humana e possuem diferenças relevantes. A análise dos SNPs também pode estar associada aos fenótipos individuais, havendo uma possibilidade futura de identi�cação de traços físicos como, por exemplo, a cor da íris. Os SNPs são: A Biotecnologia trabalha predominantemente manipulando material genético de seres vivos; para a maioria dos organismos, o material genético é a molécula de DNA. Acerca da estrutura da molécula de DNA, assinale a opção correta. A importância primordial da sensibilidade da PCR transcende diversos cenários biomoleculares, incluindo diagnósticos clínicos, pesquisas genéticas e análises de patógenos. Nesse contexto, qual é exatamente o conceito subjacente à sensibilidade da PCR? Explicação: As helicases são enzimas responsáveis por abrir a �ta dupla de DNA, separando as duas �tas complementares, para permitir que a replicação ocorra. A primase é uma enzima que adiciona os primeiros nucleotídeos na �ta molde, criando um pequeno segmento de RNA chamado de primer, que serve como ponto de partida para a açãoda DNA polimerase durante a replicação. Portanto, as helicases e a primase desempenham papéis essenciais na preparação e início do processo de replicação do DNA. 6. Sequências presentes somente no DNA mitocondrial Polimor�smos de nucleotídeo único; uma variação na sequência de DNA Elementos repetitivos do genoma nuclear Heterozigotos Homozigotos Data Resp.: 12/09/2023 19:26:31 Explicação: A resposta correta é: Polimor�smos de nucleotídeo único; uma variação na sequência de DNA. 7. As duas �tas que compõem a molécula de DNA são ligadas por pontes de hidrogênio entre suas bases nitrogenadas. Há complementaridade entre as bases nitrogenadas adenina e timina e entre guanina e uracila. O DNA é composto por quatro tipos de bases nitrogenadas: adenina, citosina, timina e uracila. O açúcar contido na molécula de DNA é a ribose. Em uma cadeia de DNA, os nucleotídeos se ligam aos açúcares e fosfatos por pontes de hidrogênio. Data Resp.: 12/09/2023 19:21:55 Explicação: A resposta correta é: As duas �tas que compõem a molécula de DNA são ligadas por pontes de hidrogênio entre suas bases nitrogenadas. 8. Sensibilidade da PCR representa a habilidade da enzima Taq polimerase em se ligar ao DNA-alvo. Sensibilidade da PCR é a quantidade máxima de DNA que pode ser ampli�cada em uma reação. Sensibilidade da PCR é a capacidade de detectar o sinal do DNA-alvo em amostras contendo-o na realidade. 05/12/2023, 18:06 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/ 5/6 A curva padrão desempenha um papel essencial na quanti�cação absoluta de um DNA alvo em uma amostra. Qual é a �nalidade da curva padrão em quanti�cação absoluta de DNA alvo? A principal função do PCR multiplex é permitir a detecção simultânea de múltiplos alvos de DNA em uma única reação. Qual é a principal função da técnica de PCR multiplex no diagnóstico de doenças genéticas? Sensibilidade da PCR é a velocidade com que os produtos de ampli�cação são gerados. Sensibilidade da PCR refere-se à capacidade de ampli�car DNA em altas temperaturas, o que facilita a detecção. Data Resp.: 04/10/2023 19:45:27 Explicação: A sensibilidade da PCR se refere à capacidade de identi�car e ampli�car com precisão sequências de DNA-alvo presentes em baixas concentrações nas amostras. É importante para a detecção con�ável de alvos moleculares mesmo quando estão presentes em quantidades mínimas. 9. Determinar a temperatura ótima de ampli�cação do DNA alvo. Avaliar a presença de contaminantes na amostra. Identi�car a sequência especí�ca do DNA alvo. Estabelecer a linearidade e e�ciência da ampli�cação para cálculos precisos. Calibrar a concentração de reagentes na reação de ampli�cação. Data Resp.: 13/09/2023 16:15:48 Explicação: A curva padrão é essencial para a quanti�cação absoluta de DNA alvo, permitindo relacionar o ciclo de limiar (Ct) de uma amostra desconhecida com a quantidade de DNA presente nela. Através da linearidade da curva e da e�ciência de ampli�cação, podemos calcular com precisão a concentração de DNA nas amostras, garantindo resultados con�áveis. 10. Ampli�car regiões próximas de repetições de DNA. Identi�car a presença de infecções virais. Avaliar a expressão gênica em diferentes tecidos. Detectar pequenas mutações em alelos distintos. Determinar a estrutura tridimensional de proteínas. Data Resp.: 04/10/2023 19:52:21 Explicação: A técnica de PCR multiplex é utilizada para detectar pequenas mutações em alelos distintos em uma mesma reação. Isso é especialmente útil para reconhecer mutações que poderiam levar ao desenvolvimento de doenças genéticas, como no caso de alelos mutantes associados a doenças hereditárias. Não Respondida Não Gravada Gravada Exercício por Temas inciado em 12/09/2023 19:11:52. 05/12/2023, 18:06 Estácio: Alunos https://simulado.estacio.br/alunos/ 6/6