Técnicas de Diagnóstico Biomédico

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Curso	BIOMEDICINA INTEGRADA
Teste	QUESTIONÁRIO UNIDADE I
Pergunta 1
0,5 em 0,5 pontos
Correta	O perfil proteico dos microrganismos patogênicos, presentes em uma amostra biológica, pode ser determinado pela técnica de Maldi-Tof. Uma das principais vantagens dessa técnica é a rapidez e a exatidão dos resultados.
A respeito da técnica de Maldi-Tof, avalie as afirmativas a seguir e assinale a alternativa correta: 
I- Nesses ensaios, a amostra biológica infectada é posicionada, diretamente, no equipamento, para a identificação simultânea de todas as espécies de microrganismos;
II- O Maldi-Tof substitui a análise genômica dos microrganismos patogênicos;
III- Além da obtenção da “impressão digital” de microrganismos patogênicos, o Maldi-Tof também possibilita a avaliação da susceptibilidade destes a diferentes classes de antimicrobianos.
 É correto, apenas, o que se afirma em:
Resposta: Correta. E III.
Respostas:	
a. I.
b. I e II.
c. II.
d. II e III.
e. III.
Comentário:Afirmativa I. Os ensaios de Maldi-Tof não permitem a identificação de várias espécies de microrganismos ao mesmo tempo. Além disso, a amostra biológica não é adicionada, diretamente, ao equipamento, mas, sim, cultivada em um meio sólido para o isolamento de uma única colônia de bactérias, que é submetida ao equipamento;Afirmativa II. O Maldi-Tof é um método de caracterização fenotípica de microrganismos. Seu uso não prescinde a realização da genotipagem, pois a análise de proteínas, ao contrário do estudo do genoma, também depende das condições ambientais às quais a cultura de microrganismos foi submetida;Afirmativa III. Um exemplo é a determinação do espectro de massas de antibióticos betalactâmicos que entraram em contato com as bactérias; a detecção de biomarcadores de resistência aos antimicrobianos; e a determinação do perfil proteico de bactérias resistentes à antibioticoterapia.
Pergunta 2
0,5 em 0,5 pontos
Correta	O Maldi-Tof possibilita o diagnóstico clínico das infecções bacterianas e fúngicas, em questão de horas. Isso acontece porque cada uma das etapas dessa técnica é realizada de maneira rápida e sem interrupções.
A respeito das etapas do Maldi-Tof, assinale a alternativa incorreta:
Resposta Correta: d. Quanto maior a relação massa/carga, mais rápida é a migração do fragmento proteico pelo tubo de voo.
Respostas:	
a. Quando atingida por feixes de laser, a matriz polimérica libera os prótons, que ionizam as proteínas das bactérias isoladas da amostra biológica.
b. O laser é responsável por induzir a dessorção das proteínas bacterianas.
c. O tubo de voo é um tubo metálico mantido à vácuo, através do qual as proteínas dessorvidas migram em direção a um campo elétrico.
d. Quanto maior a relação massa/carga, mais rápida é a migração do fragmento proteico pelo tubo de voo.
e. Quanto maior a intensidade do pico presente no espectro de massas, mais abundante é o analito.
Comentário: a alternativa “d” está incorreta, pois, quanto maior a relação massa/carga, mais lenta é a migração da proteína através do tubo de voo.
Pergunta 3
0,5 em 0,5 pontos
Correta	O laboratório modular de hematologia é uma plataforma totalmente automatizada que integra as etapas pré-analítica, analítica e pós-analítica da análise do sangue. A maioria das plataformas é composta por um contador hematológico, um citômetro de fluxo, um espectrofotômetro, um preparador e um analisador de lâminas.
Assinale a alternativa que indica, corretamente, o equipamento responsável pela caracterização e pela contagem diferencial dos leucócitos, a partir da incidência de um feixe de laser:
Resposta Correta b. Citômetro de fluxo.
Respostas:	
a. Contador hematológico.
b. Citômetro de fluxo.
c. Espectrofotômetro.
d. Preparador de lâminas.
e. Analisador de lâminas.
Comentário: na citometria de fluxo, um feixe de laser é direcionado à amostra, que se encontra em fluxo laminar em um meio líquido condutor de eletricidade. Cada partícula suspensa, nesse meio – no caso, cada célula sanguínea presente na amostra – dispersa a luz de uma maneira diferente, ao ser atingida pelo laser. A luz dispersa é captada por detectores, posicionados na linha do laser e perpendicular a este, o que permite a avaliação de parâmetros físicos e químicos das células contidas na amostra, que incluem o tamanho e a presença de granulosidades.
Pergunta 4
0,5 em 0,5 pontos
Correta	
Na sepse, condição caracterizada pela presença de bactérias e/ou de seus produtos tóxicos no sangue, observa-se um aumento na contagem de determinado tipo celular. A detecção do aumento da produção dessas células é um parâmetro, precocemente, observado na sepse e, portanto, importante para o diagnóstico dessa condição.
Com relação ao texto anterior, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
 
I- Na sepse, a contagem de granulócitos imaturos no sangue está aumentada, o que indica um desvio à esquerda na produção dessas células.
PORQUE
II- O número de basófilos, principais responsáveis pelo combate às infecções bacterianas, está aumentado nessa condição.
Resposta Selecionada:	
Corretac. 
A afirmativa I é verdadeira e a II é falsa.
Respostas:	
a. 
As afirmativas I e II são verdadeiras, e a II é uma justificativa válida da I.
b. 
As afirmativas I e II são verdadeiras, mas a II não é uma justificativa válida da I.
Corretac. 
A afirmativa I é verdadeira e a II é falsa.
d. 
A afirmativa I é falsa e a II é verdadeira.
e. 
As afirmativas I e II são falsas.
Comentário da resposta:	
Resposta: C
Comentário: a afirmativa II está incorreta, pois as principais células aumentadas na sepse são os neutrófilos e não os basófilos.
Pergunta 5
0,5 em 0,5 pontos
Correta	
Técnicas de Biologia Molecular vêm sendo, cada vez mais, utilizadas no diagnóstico das hemoglobinopatias. Alterações nos genes das globinas estão relacionadas com diferentes condições, que incluem as talassemias, a anemia falciforme e outras formas de hemoglobina cristalina que podem levar à hemólise.
Com relação às técnicas de Biologia Molecular, aplicadas ao diagnóstico das hemoglobinopatias, avalie as afirmativas a seguir:
 
I- A reação em cadeia da polimerase (PCR) permite a amplificação dos genes das globinas presentes no núcleo das hemácias;
II- A técnica de RFLP utiliza as enzimas de restrição para a identificação de mutações nos genes das globinas;
III- Os ensaios moleculares são mais rápidos do que os ensaios convencionais, baseados na eletroforese da hemoglobina e em ensaios cromatográficos, porém, são menos sensíveis e específicos do que estes.
 
É correto o que se afirma em:
Resposta Selecionada:	
Corretac. 
II, apenas.
Respostas:	
a. 
I, apenas.
b. 
I e II, apenas.
Corretac. 
II, apenas.
d. 
II e III, apenas.
e. 
III, apenas.
Comentário da resposta:	
Resposta: C
Comentário:
Afirmativa I. As hemácias não possuem núcleo e, portanto, não têm material genético. O DNA molde para os ensaios de PCR vêm de outros tipos celulares presentes no sangue, mais, especificamente, dos leucócitos;
Afirmativa II. O tamanho dos fragmentos, gerados após a digestão do gene mutado com enzimas de restrição, é diferente do observado na ausência de mutações;
Afirmativa III. Os ensaios moleculares apresentam alta sensibilidade e alta especificidade.
Pergunta 6
0,5 em 0,5 pontos
Correta	Os microarranjos de DNA permitem avaliar a presença de mutações no DNA genômico e/ou o perfil transcricional de um tecido. A respeito dessa técnica, avalie as afirmativas a seguir:
 
I- O perfil transcricional de um tecido pode ser avaliado a partir da amplificação, por PCR, do seu DNA genômico;
II- Para comparar o perfil de expressão de duas amostras diferentes (tecido saudável e tecido tumoral, por exemplo) deve-se adicionar o cDNA de ambas as amostras na mesma placa;
III- As sondas de DNA presentes na placa contêm, em uma das extremidades, fluoróforos.
 
É correto, apenas, o que se afirma em:
Resposta Selecionada:	
Corretac. II.
Respostas:	
a. I.
b. I e II.
Corretac. II.
d. II e III.
e. III.
Comentário da resposta:	Resposta: C
Comentário:
Afirmativa I. O perfil transcricional deum tecido pode ser avaliado a partir da produção de DNA complementar às sequências de RNA mensageiro das células;
Afirmativa II. Adicionar o cDNA de duas amostras, contendo os fluoróforos de cores específicas (vermelho nos cDNAs do tecido tumoral e verde nos cDNAs do tecido saudável, por exemplo), permite comparar quais genes são expressos em cada amostra, de acordo com a cor da fluorescência gerada em cada ponto (spot) da placa;
Afirmativa III. Os fluoróforos são adicionados aos cDNAs das amostras, e não às sondas de DNA. Cada amostra recebe um fluoróforo de uma cor específica.
Pergunta 7
0,5 em 0,5 pontos
Correta	
Um pesquisador deseja avaliar com quais genes o receptor de glicocorticoides (GR) interage quando um anti-inflamatório esteroidal é adicionado a uma cultura de células. Para isso, a técnica mais adequada é:
Resposta Selecionada:	
Corretae. 
chIP-on-chip, no qual os genes complexados ao GR são purificados, adicionados a um fluoróforos e adicionados a uma placa contendo diferentes sondas de DNA.
Respostas:	
a. 
Microarranjo de DNA utilizando os produtos de PCR dos genes alvo.
b. 
Microarranjo de DNA utilizando os cDNAs das células que compõem a amostra.
c. 
Microarranjos de proteínas, cujas sondas correspondem aos genes regulados pelo GR.
d. 
Microarranjos de proteínas, cujas sondas correspondem aos antígenos, especificamente, reconhecidos pelos anticorpos anti-GR.
Corretae. 
chIP-on-chip, no qual os genes complexados ao GR são purificados, adicionados a um fluoróforos e adicionados a uma placa contendo diferentes sondas de DNA.
Comentário da resposta:	
Resposta: E
Comentário: nos estudos de chIP-on-chip, o DNA genômico, contendo as proteínas associadas, é isolado, processado e submetido a uma placa com anticorpos que reconhecem, especificamente, a proteína que se deseja estudar, o que possibilita o isolamento da sequência de DNA associada a ela.
A sequência de DNA que se associa à proteína de interesse é, então, amplificada e adicionada de um fluoróforo. Em seguida, ela é submetida a uma placa de microarranjos com diferentes fragmentos de DNA. A presença de fluorescência indica a localização, na placa, dos fragmentos complementares ao DNA alvo.
Pergunta 8
0,5 em 0,5 pontos
Correta	Um pesquisador deseja comparar os perfis transcricionais de um tecido tumoral e de um tecido saudável. Para isso, o cDNA do tecido tumoral recebeu fluoróforo vermelho e o cDNA do tecido saudável, fluoróforo verde. Após a adição dos cDNAs à microplaca, os genes expressos, em ambos os tecidos, são indicados pelos pontos (spots) que adquirem fluorescência:
Resposta Selecionada:	
Corretad. Amarela.
Respostas:	
a. Vermelha.
b. Verde.
c. Azul.
Corretad. Amarela.
e. Preta.
Comentário da resposta:	Resposta: D
Comentário: as sequências presentes em ambas as amostras são observadas em tons de amarelo, que correspondem à visualização dos fluoróforos verde (tecido saudável) e vermelho (tecido tumoral) em conjunto.
Pergunta 9
0,5 em 0,5 pontos
Correta	
A tecnologia de Non-Homologous End Joining (NHEJ) é uma variação do sistema Crispr-Cas9 aplicada à edição do DNA de células eucarióticas. Com o uso dessa tecnologia:
Resposta Selecionada:	
Corretaa. 
A sequência nucleotídica mutada é retirada do genoma da célula-alvo e não é substituída pela sequência corrigida.
Respostas:	
Corretaa. 
A sequência nucleotídica mutada é retirada do genoma da célula-alvo e não é substituída pela sequência corrigida.
b. 
A sequência nucleotídica mutada é retirada do genoma e, então, substituída pela sequência gênica corrigida.
c. 
O DNA do bacteriófago é clivado e, assim, não consegue se integrar ao genoma do hospedeiro.
d. 
O RNA mensageiro que codifica o gene defeituoso é neutralizado pelas nucleases Cas1 e Cas2.
e. 
O RNA mensageiro que codifica o gene defeituoso é neutralizado pela nuclease Cas9.
Comentário da resposta:	
Resposta: A
Comentário: no NHEJ, nenhuma sequência de DNA (oligonucleotídeo) é administrada após a excisão do DNA pela Cas9. Nesse caso, ocorre a inserção ou a deleção de nucleotídeos de maneira aleatória, o que resulta na alteração da função do gene, inclusive, no nocaute (silenciamento) deste.
Pergunta 10
0,5 em 0,5 pontos
Correta	
A edição do DNA pelo sistema Crispr-Cas9 torna possível a modificação do genoma de células eucarióticas de maneira permanente. A respeito dos aspectos éticos envolvidos na utilização dessa técnica, avalie as asserções a seguir e assinale a alternativa correta:
 
I- Uma das primeiras aplicações práticas da técnica, no Brasil, tem sido a edição das características fenotípicas do embrião, de acordo com a preferência dos pais.
PORQUE
II- A Lei de Biossegurança permite a prática de engenharia genética em embriões humanos durante a gestação.
Resposta Selecionada:	
Corretae. 
As asserções I e II são falsas.
Respostas:	
a. 
As asserções I e II são verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
b. 
As asserções I e II são verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
c. 
A asserção I é verdadeira e a II é falsa.
d. 
A asserção I é falsa e a II é verdadeira.
Corretae. 
As asserções I e II são falsas.
Comentário da resposta:	
Resposta: E
Comentário: de acordo com a Lei de Biossegurança, a edição do DNA de embriões humanos, no Brasil, permanece proibida. Ela só pode ser realizada para fins de pesquisa, em células retiradas de embriões inviáveis ou em processo de descarte.