Partes do Microscópio, Preparo de Esfregaço e Coloração Simples.

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COLÉGIO AGRÍCOLA DOM AGOSTINHO IKAS 
Partes do Microscópio, Preparo de Esfregaço e Coloração Simples.
Relatório referente à disciplina de microbiologia básica.
Na turma de alimentos-manhã.
Alunas: Alyne Carolayne; Daniele Teles; Genésia; Leticia Ingrid e Polyane Cabral.
Orientação: Aurenice Pontes Loio Vaz
CODAI / UFRPE
2019
Partes do Microscópio, Preparo de Esfregaço e Coloração Simples.
INTRODUÇÃO
Os microrganismos são seres universais e estão por toda parte, podemos os identificar na nossa saliva ou até mesmo no fermento biológico, o microscópio óptico é o mais utilizado em laboratórios de microbiologia seu princípio se baseia no aumento de imagem por um jogo de lentes, associado a uma forte iluminação. Na aula pratica realizada no dia 17 de abril de 2019, a qual foi orientada pela professora Aurenice Vaz juntamente com a sua monitora, consistiu em nos mostrar a função e as partes do microscópio, o preparo do esfregaço e a importância da coloração simples.
OBJETIVO
Aprender a preparar esfregaço (de leveduras).
Realizar a técnica de coloração simples.
Aprender os fundamentos dos métodos de coloração e importância dos microscópios.
Comparar a estrutura das leveduras com a mucosa bucal.
Permitir a observação da morfologia e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes.
MATERIAL	
2.1 Equipamentos:
Microscópio
Lamparina
2.2 Reagentes e Materiais:
Lâmina estéril
Lamínula 
Água destilada
Alça de Níquel
Amostra: Mucosa Bucal e Caldo de Leveduras 
Corante (Azul de Metileno)
Óleo de imersão
PROCEDIMENTO 
Preparar esfregaços a partir de culturas de leveduras.
 Corar os esfregaços pelo método de coloração simples.
Observar ao microscópio óptico, sob imersão e identificar a morfologia destes microrganismos. 
MÉTODOS
4.1 Preparar a lâmina para o esfregaço
Pegar uma lâmina limpa no recipiente, secar e flambar rapidamente na chama da lamparina.
Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço.
Flambar a alça de níquel.
Coletar a cultura e esfregar o material com movimentos de rotação da alça, para se obter um esfregaço de forma oval e bem fino.
Deixar secar cortando a lamina na chama rapidamente, para fixar o esfregaço.
Esterilizar a alça de níquel.
4.2 Coloração simples
Cobrir toda a lâmina com o corante azul de metileno e aguardar um minuto.
Lavar rapidamente em água destilada ou escorrer o corante (sem esfregar).
Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina e observar com a ocular e objetiva de 10x.
4.3 Preparar a lâmina com mucosa bucal
A espátula de madeira (descartável) coletar mucosa bucal, através da descamação. 
Colocar o que foi coletado em uma lamina.
Por cima da lamina colocar a lamínula. 
RESULTADOS
Leveduras observadas na Ocular 10x +Objetiva 10x.
Saliva observada na Ocular 10x + Objetiva 4x.
Possíveis células epiteliais encontradas na saliva.
Ocular 10x + Objetiva 10x.
Nada identificado na saliva e com desfoque usando a Ocular de 10x + Objetiva 4x.
Microscópio usado nos procedimentos.
Caldo de leveduras usado no esfregaço.
Esterilização da alça de níquel.
Laminas com identificação que foram analisadas. 
DISCUSSÃO
Observamos as células analisando a estrutura celular com mais nitidez com a ajuda do aumento alcançado com as lentes objetivas.
Mucosa bucal
Ao tentar observar as células da saliva, não conseguimos obter resultados microscópicos por ser um material transparente, só após colocamos o azul de metileno conseguimos observar algumas células inicialmente não identificadas por estarem desfocadas, continuamos com a lente Ocular de 10x e a Objetiva 4x e com alguns ajustes no micrômetro achamos possíveis células epiteliais, só conseguimos obter certeza das células identificadas ao usar a Ocular de 10x com a Objetiva de 10x.
Leveduras
	A levedura unicelular encontrada no fermento biológico que foi usado no experimento é a Saccharomyces cerevisae, muito utilizada na fabricação de bebidas alcoólicas e na produção de pães, bolos, etc. Ela tem sua morfologia de forma oval e facilmente identificamos sua colônia por causa da coloração utilizada, não foi possível identificar sua membrana nuclear individualizada e nem as outras organelas por que o microscópio ótico só consegue uma ampliação de 1.000x a qual não foi suficiente. 
Microscópio 
Suas Funções.
1- Lente ocular: Encaixada na extremidade superior do tubo. Sua função é aumentar a imagem formada pela objetiva. O aumento fornecido pela ocular esta, geralmente, gravado nela própria.
2- Tubo ou canhão: Nos microscópios que possuem uma só ocular (monoculares), o tubo é um cilindro metálico reto ou oblíquo. Nos microscópios que possuem duas oculares (binoculares) o tubo pode ser inclinado, com ajuste para os diferentes espaços entre os olhos de cada observador.
3- Revólver ou tambor: Nele estão inseridas as lentes objetivas que podem ser movimentadas quando o tambor é girado, este movimento deve ocorrer sempre no sentido da objetiva de menor para a de maior aumento.
4- Lentes Objetivas: Um conjunto de lentes ópticas usada em conjunto com um corpo de câmera e um mecanismo para reproduzir imagens em um filme fotográfico ou em outra mídia capaz de armazenar uma imagem quimicamente ou eletronicamente (4x, 10x, 40x, 100x).
5- Braço ou coluna: Suporte pesado que sustenta os tubos, a mesa, o porta-condensador e os parafusos micro e macrométrico.
6- Platina ou mesa: Pode se móvel ou giratória no plano horizontal, onde a lâmina com o material a ser observado é colocada sobre a platina que apresenta uma abertura no seu centro permitindo a passagem dos raios luminosos, coletados pelo espelho, este são convergidos pelo condensador e pelo diafragma, passando pelo material que está na lâmina, pela lente objetiva do tubo da ocular até atingir a retina do globo ocular do observador.
7- Condensador e diafragma: Localizado abaixo da platina cuja função principal é o fornecimento de uma grande quantidade de luz, ao utilizar as objetivas de pequeno aumento, o diafragma deve ser fechado para eliminar os raios laterais. Em maiores ampliações, abre-se proporcionalmente o diafragma.
8- Lâmpada ou espelho: Peça encaixada por baixo do condensado. O espelho, quando presente, possui duas faces: uma plana e outra côncava, a face plana é usada nas grandes ampliações e na observação com sistema de imersão, colhe e projeta os raios paralelos e divergentes, já a face côncava colhe e projeta os raios convergentes sendo usada nas pequenas ampliações.
9- Pé ou base: Local de apoio do ponto de fixação do microscópio.
10- Parafuso macrométrico: A movimentação deste parafuso permite uma focalização grosseira do material. Possui um percurso vertical com cerca de 7 cm.
11- Parafuso micrométrico: A movimentação desde parafuso permite uma focalização mais limitada e mais fina, pois o tubo desloca no máximo dois milésimos de milímetro.
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12- Charriot: Peça opcional localizada na mesa e que seve para movimentação lateral da lâmina em observação, sendo possível analisá-la de forma totalitária.
CONCLUSÃO
Por fim, esta aula prática nos proporcionou uma visão melhor sobre o microscópio que foi exposto a todos os alunos, e explicado detalhadamente toda a sua estrutura junto com o seu manuseamento, desde a iluminação até a focalização do aparelho, de forma que todos consigam manusear um microscópio daqui para frente. 
Além disso, também foi aprendida a técnica de coloração simples um dos mais importantes métodos utilizados nos laboratórios de microbiologia que nos permite a visualização da morfologia e do tamanho das amostras analisadas. Como foi possível ver no experimento com a saliva que as amostras incolores e com as lamina transparentes não temos resultados e após a coloração ascélulas foram identificadas facilmente.
Proveitosamente conseguimos conferir duas células diferentes, as possíveis epiteliais que foram descamadas do revestimento interno da boca, onde não conseguimos observar-lá com muita nitidez, porém o corante azul de metileno mostrou-se de grande ajuda para destaque mesmo não conseguimos identificar as membranas e o núcleo. E a levedura Saccharomyces cerevisae que não forma hifas, logo analisamos apenas o tamanho, forma e arranjo das células.
REFERÊNCIAS (BIBLIOGRAFIA CONSULTADA)
Matéria cientifica estudada dentro laboratório de microbiologia.
Sites 
https://www.ebah.com.br/content/ABAAAg-X8AD/pratica-01