Prova de coombs

Prévia do material em texto

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ
LABORATÓRIO DE HEMATOLOGIA CLÍNICA PARA FARMÁCIA
PROFESSOR: Dr. Éverton José Ferreira de Araújo
AULA PRÁTICA – PROVA DE COOMBS
Ensaios de hemaglutinação para identificação de anticorpos contra antígenos
eritrocitários, capazes de sensibilizar as hemácias, mas não de aglutiná-las.
I. Coombs Direto ou Teste da Antiglobulina Direta (TAD)
AMOSTRA: Sangue total em EDTA
PROCEDIMENTO: 
1º) Em um tubo identificado adicionar 50 µL de suspensão de hemácias a 5% da
amostra do paciente;
2º) Lavar as hemácias 3 vezes com solução salina isotônica, secando bem as bordas
do tubo na ultima lavagem retirando todo o sobrenadante;
3º) Acrescentar 2 gotas do soro de Coombs (Antiglobulina Humana) e homogenenizar;
4º) Centrifugar a preparação a 1000 rpm por 1 minuto.
5º) Após centrifugação ressuspender agitando suavemente o tubo observando a
presença de aglutinação.
OBS: Nos casos de resultados negativos, adiciona-se ao tubo de reação 2 gotas de
solução de hemácias controle (IgG Controcel®) para verificar aglutinação. Sua positividade
requer eluição ácida dos anticorpos presentes e análise por painel de hemácias fenotipadas.
II. Coombs Indireto ou Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI)
AMOSTRA: Sangue total em EDTA. PREPARO: Obter suspensão de hemácias e
centrifugar para obter plasma.
PROCEDIMENTO: 
1º) Em um tubo identificado adicionar 50 µL de suspensão de hemácias a 5% da
amostra do paciente e adicionar 100 µL do plasma do paciente.
2º) Adicionar 2 gotas de albumina bovina 22% e homogeneizar bem;
3º) Incubar o tubo em banho-maria durante 30 minutos a 37ºC;
4º) Centrifugar a preparação a 1000 rpm por 1 minuto realizando 3 lavagens com
salina, secando bem as bordas do tubo na última lavagem para retirar todo o sobrenadante;
5º) Adicionar 2 gotas do soro de Coombs (Antiglobulina Humana), homogenenizar bem
e proceder mais uma centrifugação a 1000 rpm por 1 minuto;
6º) Após centrifugação ressuspender agitando suavemente o tubo observando a
presença de aglutinação.
OBS: Realiza-se controle positivo e negativo do teste preparando-se dois tubos com
suspensão de hemácias O+ 5%. No primeiro adiciona-se 1 gota do soro anti-Rh (ou anti-D) e
no segundo 1 gota de solução salina isotônica. Seguir executando o mesmo procedimento da
PAI a partir da adição da albumina bovina 22%.
Elaborado por:
Éverton José Ferreira de Araújo
(CRF-PI 809)
Em: 20/06/2015
Revisado por:
Pablo Ricardo Barbosa Ferreira
(CRF-PI 913)
Em: 23/06/2015
Aprovado por:
Éverton José Ferreira de Araújo
(CRF-PI 809)
Em: 26/06/2015