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Curso de Farmácia Disciplina de Microbiologia Clínica Professora: Camila A. Biberg Maribondo Nome: Paulino Gauna Gomes RA: 201702464891 INTRODUÇÃO: O antibiograma é um teste laboratorial realizado para detectar com mais precisão a bactéria a ser eliminada, dizendo em melhores palavras e mais simples, é um exame que irá verificar por meios de técnicas especificas a bactéria que está hospedada no paciente e causando sintomas específicos. O teste laboratorial de suma importância para auxiliar o médico a ter uma melhor direção para saber qual o medicamento correto a prescrever para o paciente, pois, com este exame ele saberá se a bactéria pesquisada está sensível ou resistente aos antimicrobianos testados no antibiograma. Com este teste, o médico tem menos chances a erros de prescrição, de não prescrever um medicamento em que a bactéria já seja resistente a este, e obtendo assim um tratamento eficiente e rápido. OBJETIVO EXPERIMENTAL: E um exame que tem como objetivo determinar o perfil de sensibilidade e resistência de bactérias e fungos aos antibióticos através do resultado deste exame, o médico pode indicar qual antibiótico o paciente deve usar. MATERIAIS POR BANCADA: • 1 culturas bacterianas crescidas por 18 horas. 1 placas com meio de cultura Muller-Hinton. Embalagem com discos de antibióticos 1 swab e 1 pinça esterilizada. • 1 bicos de Bunsen. • 1 Alça de platina. (alça de Drigalski) • 1 Estantes para tubos de ensaio. • frascos de solução fisiológica. • tubos de ensaio com tampa de rosca. MÉTODOS: • No laboratório cada aluno escolheu-se 1 colônia de bactérias a mais homogênea e a mais afastada segundo informação passada pela a professora ascendeu-se o bico de Bunsen e próximo a chama retirou-se com a alça de platina (alça de Drigalski), 1 colônia das placas com a bactéria crescida (as placas com as bactérias já se encontrava-se prontas), incubou a colônia no tubo com soro fisiológico 0,9% e comparou-se a turbidez com a escala de MacFarland turbidez 0 ,5. Referências: Google imagens- práticas de microbiologia PROCEDIMENTO: O médico irá solicitar a coleta do material biológico como sangue, urina, saliva, catarro, fezes ou células do órgão contaminado por microrganismos. A seguir, estas amostras são encaminhadas para um laboratório de microbiologia para que seja analisado e cultivado em meio de cultura que favorece o crescimento bacteriano ou fúngico. Após crescimento, o microrganismo é isolado e submetido a teste de identificação para que se possa chegar à conclusão do microrganismo responsável pela infecção. Após isolamento, é também realizado o antibiograma para que se saiba o perfil de sensibilidade e resistência do microrganismo identificado, que pode ser feito de duas maneiras: Antibiograma por difusão em ágar: neste procedimento são colocados pequenos discos de papel que contêm diferentes antibióticos em uma placa com meio de cultura apropriado para crescimento do agente infeccioso. Após 1 a 2 dias na estufa, é possível observar se ouve ou não crescimento a volta do disco. Na ausência de crescimento, diz-se que o microrganismo é sensível àquele antibiótico, sendo considerado o mais indicado para o tratamento da infecção; Antibiograma baseado em diluição: neste procedimento existe um recipiente com várias diluições de antibiótico com doses diferentes, onde são colocados os microrganismos que serão analisados, e é determinada a Concentração Mínima Inibitória (CMI) do antibiótico. O recipiente em que não foi observado crescimento microbiano corresponde à dose do antibiótico que deve ser utilizada no tratamento, já que impediu o desenvolvimento do microrganismo. O meio utilizado para esta prova foi o Mueller-Hinton por possuir propriedades que permitem o crescimento da maioria dos micro-organismos não permitindo que seu perfil nutricional interfira na sensibilidade ou resistência das bactérias aos antibióticos. Foi realizado em laboratório o caldo da bactéria Staphilococcus aureus, esperando o tempo determinado de crescimento da bactéria na placa de Mueller-Hinton, aproximadamente 48h. Ajustar a suspensão bacteriana à escala 0,5 de MacFarland, que corresponde a 1,5 x 108 unidades formadoras de colônias (UFC)/mL; Molhou-se um swab, retirou-se o excesso e espalhou-se as colônias homogeneamente, em toda superfície sobre a placa contendo o meio de cultura Agar Mueller Hinton. Passou-se a pinça na chama do bico de Bunsen rapidamente, e com ela retirou-se os discos de antibióticos e colocou- se 6 discos um de cada grupo separadamente sob a superfície do meio de cultura, anoutou-se os antibióticos e suas características. Após a colocação dos discos (Kirby-Bauer), pressionar levemente com um auxílio de uma pinça a superfície de cada disco; uma vez colocado o disco, não remover do lugar, pois a difusão da droga é imediata; Feita a semeadura no swab, foi testado em uma sequência de 6 tipos de antibióticos na bactéria Staphilococcus aureus. Exemplos de Discos utilizados para o antibiograma: 1- Norfloxacino – NOR 10 2- Vancomicina – VAN 30 3- Tetraciclina – TET 30 4- Ciprofloxacin – CIP 5 5- Gentamicina – GEN 10 6- Cefoxitina – CFO 30 Deixar a placa semeada secar por 5 minutos à temperatura ambiente; Incubar as placas invertidas no máximo 15 minutos após a colocação dos discos; por 16 a 18 horas a +/- 37°C; Aguardando tempo necessário para determinada reação entre bactérias e antibióticos. INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS: Verificar a sensibilidade da espécie de bactéria Staphilococcus aureus a diferentes tipos de antibióticos com base no teste de antibiograma. Seguindo a interpretação do antibiograma observasse a medição dos halos de cada placa distribuída. Procedendo registro dos resultados. Sob consulta do BrCAST, obtemos o resultado das bactérias sendo elas: A categoria sensível (S) implica que a infecção causada pela cepa bacteriana isolada pode ser adequadamente tratada com a dosagem do antimicrobiano recomendada para o tipo de infecção e o agente infeccioso. A categoria intermediária (I) inclui isolados cujos MICs são próximos aos do sangue e tecidos. Ela permite a aplicabilidade do antimicrobiano em infecções em sítios onde as drogas são fisiologicamente concentradas ou quando doses maiores podem ser utilizadas. A categoria resistente (R) inclui isolados que não são inibidos pelas concentrações usuais do antimicrobiano na dosagem padrão e/ou falha quando um específico mecanismo de resistência é expressado. A orientação fornecida por este teste ao clínico permite que este avalie a maior ou menor eficácia de determinada droga contra um agente infeccioso, o que é de grande valia, visto que diferentes espécies bacterianas, ou diferentes cepas de uma mesma espécie, podem mostrar diferentes níveis de sensibilidade a uma mesma droga. O resultado do antibiograma pode demorar até cerca de 3 a 5 dias e é obtido através da análise do efeito dos antibióticos no crescimento dos microrganismos. O antibiótico que inibir o crescimento microbiano é o indicado para tratar a infecção, mas caso seja verificado crescimento, indica que o microrganismo em questão não é sensível aquele antibiótico, ou seja, resistente. 1- Norfloxacino – NOR 10: 32mm: o resultado do antibiograma halo maior que 22mm considerando uma bactéria sensível; 2- Vancomicina – VAN 30: O método de disco-difusão não é confiável e não distingue isolados selvagens daqueles com resistência não mediada pelo gene vanA. Não podendo ser utilizado. 3- Tetraciclina – TET 30: 32mm: o resultado do antibiograma halo maior que 22mm considerando uma bactéria sensível; 4- Ciprofloxacin – CIP 5: 32mm: o resultado do antibiograma halo maior que 25mm considerando uma bactéria sensível; 5- Gentamicina – GEN 10: 27mm: o resultado do antibiograma halo maior que 22mmconsiderando uma bactéria sensível; 6- Cefoxitina – CFO 30: 14mm: o resultado do antibiograma halo maior que 8mm considerando uma bactéria resistente; Observando-se o resultados dos exames reconhece-se os antibióticos corretos a prescrever: Ciprofloxacin; Tetraciclina; Gentamicina e Norfloxacino; juntamente com sua posologia recomendada. Visando evitar o uso indiscriminado de antibióticos que contribui para superbactérias. Prescrição inadequada e automedicação são alguns dos fatores que fortalecem as bactérias.
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