PROVA I DE BIOLOGIA MOLECULAR

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O sequenciamento de DNA permite a identificação de qual nucleotídeo ocupa cada posição na fita
de uma molécula ou fragmento de DNA. As primeiras técnicas que permitiram sequenciar o DNA
começaram a ser desenvolvidas na década de 70, com o método desenvolvido por Sanger. Sobre
o método de Sanger, assinale a alternativa CORRETA:
 a) A técnica de Sanger, utiliza terminadores de sequência em réplicas de DNA de uma fita
molde diferenciada.
 b) Os didesoxinucleotídeos são similares aos primers ou iniciadores, já que iniciam a reação
em diferentes terminações 3'.
 c) Os didesoxinucleotídeos são ineficazes para a técnicas de Sanger, sendo utilizados somente
os primers e diversas fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, com a mesma extremidade
5'.
 d) São utilizados iniciadores (primers), fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, ou seja, com
a mesma extremidade 5' e diferentes terminações 3', devido à inserção dos
didesoxinucleotídeos, que são nucleotídeos terminadores de cadeia (ddNTP: ddATP, ddTTP,
ddCTP e ddGTP).
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2. A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) se refere à replicação in vitro de um
fragmento de DNA. Sobre o PCR, assinale a alternativa CORRETA:
 a) O processo de replicação in vitro, depende do uso de primers (oligonucleotídeos sintéticos),
com sequências de 18 a 22 nucleotídeos, que seja complementar ao gene de interesse.
 b) A enzima DNA polimerase humana é uma das principais responsáveis pelo sucesso da
técnica in vitro.
 c) A ligação dos primers à fita de DNA é denominado como desnaturação.
 d) O processo do PCR não necessita da utilização de nucleotídeos.
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3. O mais recente avanço no campo de sequenciamento de DNA foi o desenvolvimento de
plataformas portáteis capazes de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos
equipamentos. Um exemplo dessas plataformas é a MinION. Sobre a plataforma MinION,
avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para que seja realizado o sequenciamento por meio da plataforma MinION, as amostras a
serem sequenciadas são ligadas a enzimas de processamento. Essas enzimas induzem o
fragmento de DNA a passar pelo nano poro, onde as variações da corrente elétrica são
detectadas.
PORQUE
II- Sendo conhecidas as variações características de cada nucleotídeo, a sequência de
nucleotídeos é formada rapidamente.
Assinale a alternativa CORRETA:
 a) As asserções I e II são proposições falsas.
 b) As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
 c) As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
 d) A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
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4. Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de
um organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias
de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica. De acordo com as
técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças
verdadeiras e F para as falsas:
( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de
Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese.
( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo
adicionado à nova fita.
( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes
de sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de
sequenciamento de DNA.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
 a) V - F - V.
 b) V - F - F.
 c) V - V - F.
 d) F - F - V.
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5. A escolha do gel para a técnica de eletroforese deve-se dar através do tamanho da molécula a
ser isolada e do objetivo do isolamento. Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida
para a técnica de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir:
I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base
nitrogenada de diferença.
II- A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um
agrupamento de moléculas de tamanho semelhantes.
III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar,
enquanto fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose.
Assinale a alternativa CORRETA:
 a) As sentenças I, II e III estão corretas.
 b) Somente a sentença I está correta.
 c) Somente a sentença III está correta.
 d) Somente a sentença II está correta.
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6. O advento das técnicas de biologia molecular possibilitou o estudo genético de diversos
organismos, incluindo os seres humanos. Esses estudos têm trazido ganhos significativos no
entendimento de doenças, síndromes e mecanismos de ação de substâncias. De acordo com a
importância das técnicas de clonagem do DNA e construção de bibliotecas genômicas,
classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) As enzimas de restrição são utilizadas na construção de bibliotecas de DNA, com o
objetivo de fragmentar o DNA genômico, já que podem ser conhecidas como tesouras
moleculares.
( ) Os vetores são essenciais na técnica de clonagem e são utilizados tanto na construção de
bibliotecas de DNA, quanto de cDNA, uma vez que carregam os fragmentos de DNA ou o
cDNA extraído.
( ) As bibliotecas de cDNA são construídas a partir da extração do DNA de células ou tecidos,
que posteriormente é submetido à clonagem do DNA.
( ) O mRNA é convertido em cDNA pela transcrição reversa, para então serem introduzidos
em vetores e submetidos ao processo de clonagem para originar as bibliotecas de cDNA.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
 a) V - V - F - V.
 b) V - F - V - V.
 c) V - F - F - V.
 d) F - F - V - F.
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7. A clonagem de DNA se refere à produção, dentro de uma célula, de diversas cópias de uma
sequência específica de um fragmento de DNA. Sobre o exposto, avalie as asserções a seguir
e a relação proposta entre elas:
I- A clonagem de DNA depende da utilização de um vetor, do fragmento de DNA e,
posteriormente, de um organismo hospedeiro.
PORQUE
II- O fragmento de DNA de interesse, será inserido em uma molécula de DNA genômico com
capacidade de autorreplicação (DNA do vetor), originando o DNA recombinante. Essa inserção
se dá através de enzimas de restrição e enzimas de ligação.
Assinale a alternativa CORRETA:
 a) A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
 b) As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
 c) As asserções I e II são proposições falsas.
 d) As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
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8. Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de
bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas,assinale a alternativa CORRETA:
 a) As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que
posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa.
 b) As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de
restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA.
 c) A biblioteca de cDNA contém éxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de
DNA, incluindo o não codificante.
 d) Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo
extremamente específico para identificar o conteúdo expresso em uma célula ou tecido.
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9. As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo
com essas enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar o DNA em regiões específicas,
permitindo a manipulação do DNA.
( ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e
purificada a partir de colônias dessas bactérias.
( ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões
de clivagem aleatórias de 4 a 8 nucleotídeos.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
 a) F - V - F.
 b) V - F - F.
 c) F - F - V.
 d) V - V - F.
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10.O gráfico a seguir ilustra uma curva de amplificação da PCR em tempo real. De acordo com a
interpretação do gráfico, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct.
( ) A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a
quantidade de material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse.
( ) A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade
intermediária de amostra, quando comparadas às amostras A e C.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
 a) F - F - V.
 b) V - F - V.
 c) V - V - F.
 d) V - F - F.
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