Coloração de Gram e Microbiologia

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Faculdade Educar da Ibiapaba – FAEDI 
 
Professora; Jéssica Morais 
Curso; Técnico de Enfermagem 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Laiza Saraiva 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MICROBIOLOGIA, PARASITOLOGIA E IMUNOLOGIA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Ipu/Ce - 2021 
 
Coloração de Gram 
 
Introdução 
 
Em 1884, Hans Cristian Joaquim Gram observou que ao tratar bactérias com 
diferentes corantes, elas adquiriam cores distintas. Isso permitiu classificá-las 
em dois grupos: as que se coravam de roxas, então denominadas de Gram-
positivas, e as que se coravam de rosa ou vermelhas, chamadas de Gram-
negativas. Essa classificação se refere às diferenças da composição da parede 
celular. As bactérias Gram-negativas possuem uma fina camada de 
peptideoglicano e uma membrana externa composta por bicamada lipídica, a 
qual se solubiliza na presença do álcool-acetona (agente diferenciador), 
perdendo a coloração do cristal violeta (corante primário), adquirindo a coloração 
rosa ou vermelho do corante secundário, safranina ou fucsina. Já as bactérias 
Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e grandes 
quantidades de ácido teicóico, adquirem a coloração violeta ou roxa pela 
capacidade em reter o corante primário na presença do agente diferenciador, 
conforme descrito na figura 1. 
 
Na técnica de Gram, um esfregaço é fixado na lâmina pelo calor e coberto com um 
corante primário, geralmente o cristal violeta. Após um minuto, o esfregaço é lavado e 
em seguida cobre-se a lâmina com lugol, que age como mordente (fixador), fixando o 
cristal violeta. Nessa etapa tanto as bactérias Gram-negativas como as Gram-positivas 
permanecem com a coloração violeta. Em seguida, a lâmina é lavada com uma solução 
de álcool-acetona a 95%. Esta solução age como descolorante, retira o cristal violeta 
das bactérias Gram-negativas e deixando-as incolores. Após essa etapa o excesso do 
álcool é retirado e em seguida as bactérias são submetidas ao corante secundário, 
podendo ser a fucsina ou safranina a 0,1 a 0,2%. A lâmina é lavada, seca com papel-
filtro e observada ao microscópio óptico, aplicar uma gota de óleo de imersão e observar 
na objetiva de imersão 
 
 
Objetivos 
 
• Compreender e aprender sobre a técnica de Gram; 
• Visualizar as diferentes morfologias entre as bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas. 
 
Materiais 
 
• Alça de platina (bacteriológica); 
• Álcool-acetona (descorante); 
• Bico de Bunsen; 
• Cristal-violeta (corante); 
• Cultura de bactérias Gram-positivas e/ou cultura de bactérias Gram-negativas; 
• Fucsina ou Safranina (corante); 
• Lâminas para microscopia; 
• Lamínulas; 
• Lugol a 1% (mordente); 
• Microscópio óptico; 
• Óleo de imersão; 
• Papel absorvente. 
 
Metodologia 
 
• Confecção do esfregaço (colocar uma gota de salina sobre a lâmina, tocar com 
alça bacteriológica a colônia isolada e espalhar na salina com movimentos ovais. 
Fixar com calor, passando a lâmina sobre chama de bico de Bunsen de 2 a 3 
vezes até completa secagem do esfregaço); 
• Cobrir com cristal violeta por 1 minuto. 
• Lavar com água corrente; 
• Cobrir com Lugol 1% por 1 minuto; 
• Lavar com água corrente; 
• Aplicar o agente diferenciador álcool-acetona 95% por 10 a 20 segundos; 
• Lavar com água corrente; 
• Cobrir com Fucsina ou Safranina (0,1 a 0,2%) por 30 segundos; 
• Lavar com água corrente e secar com papel-filtro; 
• Observar ao microscópio óptico com objetiva de imersão (100X). 
 
 
Schitossoma sp 
 
 
A esquistossomose, também conhecida como barriga-d’água, é transmitida 
pelo verme da família Schistosoma, que se espalha na água por causa de 
caramujos. Ao entrar no corpo, o parasita se instala nos vasos sanguíneos do 
intestino, do sistema urinário e do fígado e passa a se reproduzir dentro do 
organismo. 
 
Conforme esses vermes põem seus ovos, a barriga do hospedeiro incha – é 
um dos sintomas diferenciais da infecção. A evolução é lenta e, mesmo depois 
de tratado, o problema pode demorar semanas ou até anos para ir embora. 
 
 
A esquistossomose é perigosa, porque provoca complicações graves nos 
órgãos que atinge principalmente dependendo da reação do sistema 
imunológico e da quantidade de ovos botada pelos vermes. Há ainda 
manifestações que podem surgir em outros locais do corpo (como no baço e na 
próstata) e alterações sistêmicas, a exemplo da anemia. 
 
 
Classificação científica 
❖ Reino:Animalia 
❖ Filo: Platyhelminthes 
❖ Classe: Trematoda 
❖ Subclasse: Digenea 
❖ Ordem: Strigeiformes 
❖ Família: Schistosomatidae 
❖ Género: Schistosoma 
 
 
 
 
 
 
 
Proglote 
 
substantivo feminino Cada uma das divisões ou dos segmentos das tênias, 
solitárias, vermes que parasitam o intestino humano. 
 
Rhizopus Nigticans 
 
Rhizopus stolonifer, o bolor-preto-do-pão, é um bolor filamentoso da família Mucoraceae, com 
ampla distribuição. Frequentemente encontrado em superfícies de pão, obtém alimento e 
nutrientes do pão e causa danos à superfície sobre a qual vive. Wikipédia 
 
❖ Nome científico: Rhizopus stolonifer 
❖ Classificação superior: Rhizopus 
❖ Classificação: Espécie 
❖ Filo: Zygomycota 
❖ Reino: Fungi 
❖ Espécie: R. stolonifer 
❖ Ordem: Mucorales 
 
 
Penicillium 
 
O Penicillium é um gênero de fungos, o comum bolor do pão, que cresce em 
matéria orgânica especialmente no solo e outros ambientes úmidos e escuros. 
Por contágio, contaminam frutas e sementes e chegam a invadir habitações, 
sendo responsáveis pelos bolores que se instalam em alimentos para consumo 
humano. 
 
❖ Nome científico: Penicillium 
❖ Classificação superior: Trichocomaceae 
❖ Reino: Fungi 
❖ Filo: Ascomycota 
❖ Classe: Eurotiomycetes 
❖ Ordem: Eurotiales 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Miracídio 
 
O miracídio é a denominação dada ao estágio larval de vida livre dos 
vermes,se desenvolve a partir de ovos eliminados com as fezes do 
doente (ser humano contaminado pelo verme). Quando atingem a água, 
os ovos liberam os miracídios que nadam por meio de cílios e encontram 
um caramujo que lhe serve como seu primeiro hospedeiro (hospedeiro 
intermediário). É no interior desse molusco que o miracídio se 
desenvolve até a fase de cercária, que é capaz de penetrar na pele de 
seres humanos e neles se alojar, causando a 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
GRAM NEGATIVO GRAM POSITIVO 
 
 
 
Bactérias Gram-positivas são aquelas cujas paredes celulares não perdem a 
cor azul-arroxeada quando submetidas a um processo de descoloração depois 
de terem sido coloridas pela violeta de genciana. As que assumem um tom 
róseo-avermelhado quando submetidas ao mesmo processo são ditas Gram-
negativas 
 
 
 
 
 
 
 
Aspergilus 
 
Aspergillus é um gênero de fungos que apresenta coloração branca ou 
amarelada com formação de pedúnculos e uma ponta colorida. São 
importantes agentes decompositores de alimentos. 
 
❖ ● Nome científico: Aspergillus 
❖ ● Classificação superior: Trichocomaceae 
❖ ● Género: Aspergillus; Micheli, 1729 
❖ ● Filo: Ascomycota 
❖ ● Classe: Eurotiomycetes 
❖ ● Ordem: Eurotiales