Tutotial uso do Empower 3 HPLC

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©2017 Waters Corporation 1 COMPANY CONFIDENTIAL 
Tutorial para uso do Empower 3 
 
Sistema H-Class, ARC 
Marina Ansolin 
Marina_ansolin@waters.com 
(019) 99686-4028 
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Criando um projeto 
Na aba inicial do Empower clicar em Configure the System 
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Criando um Projeto 
A seguinte página irá abrir. 
Então clicar no ícone (no canto da tela: New Project) 
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Criando um projeto 
Se já exisitir algum projeto você 
pode criar um novo projeto dentro 
deste projeto principal na raiz, já se 
vc quiser criar um projeto novo e 
que não esteja linkado em nenhum 
outro projeto você deve clivar em 
cima de projeto e então em next 
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Criando um projeto 
Espaço da pasta: este valor pode ser alterado para um 
tamanho maior, ex 250 MB 
Habilitar ou não o Audit Trail 
Habilitar ou não o modo de 
integração Audit Trail. 
Selecionar as opçõs desejadas e clicar em next 
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Criando um projeto 
Selecionar as Licenças de empower 
que você pretende utilizar neste projeto 
e clicar em next. 
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Criando um projeto 
Selecionar na aba do controle de 
acesso que tipo de usuário poderá 
trabalhar utilizando este projeto e 
então clicar em next. 
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Criando um projeto 
Se for necessário copiar 
algum filtro, customs filed, 
método ou preferências de 
outro projeto já criado, 
deve-se selecionar a 
opção desejada e clicar em 
cima do projeto que você 
pretende copiar e então 
clicar em next. 
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Criando um projeto 
Por fim, adicionar um 
nome ao projeto e 
clicar em Finish. 
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Projeto criado com sucesso!!!! 
Agora vamos criar o Intrumet method e 
processar os resutados!! 
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� Na aba inicial do Empower clicar em Run samples 
Iniciando a análise dos dados 
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Irá abrir a seguinte aba: 
Edit instrument Method Informações sobre o 
detector 
Informações sobre 
a bomba 
Temperatura da 
coluna e do 
injetor 
Informações sobre a 
coluna, no caso de estar 
sendo utilizado column 
manager Tempo do sample set 
Consumo de 
solvente 
Console 
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Conhecnedo o Console e Realizando as purgas do sistema ... 
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Console_Informações gerais 
Informações da Bomba 
Informações do injetor 
Informações da coluna 
(forno de 30 cm ou 
forno para 1 coluna 
150 mm CH-A) 
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Plots: informações de todos os módulos do sistema 
 
Maintence Counters: informações como volume bombeado pela bomba, número 
de horas da lâmpada do detector, etc... 
 
Logs: Informações de erro do sistema, giagnóstico, corrida .... 
 
 
 
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Cada uma das opções 
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Para purgar o sistema 
� System Control Start up system 
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Startup system 
Prime solvents: 
 SM = sample manager: 
 
Wash solvent: 90 segundos 
 
Purge solvent: 30 ciclos se for 
mudança de solventes, se for o 
mesmo solvente pode ser de 10 – 15 
ciclos. 
Verificar se há presença de bolhas na 
seringa. 
Purge Solvent (tubulação com identificação na cor laranja) 
Solução responsável por carregar a amostra no loop É recomendado utilizar uma solução 
aquosa com baixa concentração de orgânico (5 ou 10% de Acetonitrila ou Metanol). Esta 
solução também pode ser utilizada para realizar a diluição no vial (auto-dilution). 
 
 Wash Solvent (tubulação com identificação na cor branco) 
Utilizado para lavar a parte externa da agulha e parte da porta de injeção. A parte interna é 
lavada pela fase móvel durante a análise. Você pode usar até 100% de acetonitrila ou metanol, 
mas avalie se isto pode trazer algum problema de precipitação da amostra. Caso sim, utiliza 
um porcentagem de água 10-50% . 
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Startup system 
Prime solvents: 
 QSM = Bomba quaternária 
 
Purga dos canais 
 
Purga do seal wash 
 
Determinar tempo suficiente para que 
a solução antiga seja substituída pela 
nova fase móvel. 
5 min é uma sugestão de tempo. 
Seal Wash (tubulação com identificação na cor marrom) 
Responsável por limpar o selo e o pistão da bomba de eluentes que podem precipitar. 
Tampões inorgânicos são eluentes perigosos, pois podem formar cristais e assim 
arranhar o pistão e o selo. 
Utilizar uma solução de 90:10 (H2O/ ACN ou Met ou Iso, v/v) no seal Wash 
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Startup system 
� Você já pode configurar o sistema para após realizar as purgas, passar fase 
móvel no sistema 
Equilibrate method: 
 
CM: column manager: setar a 
temperatura da coluna para ir 
estabilizando 
Selecionar a posição que a 
coluna está no column manager: 
Column 1 
Column 2 
Column 3 
Column 4 
Bypass (não passa na coluna) 
Waste (vai para o descarte) 
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Startup system 
� Você já pode configurar o sistema para após realizar as purgas, passar fase 
móvel no sistema 
Equilibrate method: 
 
PDA: detector arranjo de 
diodos: Ligar a lâmpada 
 
Lâmpada on 
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Startup system 
� Você já pode configurar o sistema para após realizar as purgas, passar fase 
móvel no sistema 
Equilibrate method: 
 
SM: Sample manager 
Setar temperatura da coluna: se 
estiver trabalhando com forno 
para coluna de 30 cm 
Setar temperatura do 
amostrados automático: 
4°C a 40 °C 
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Startup system 
� Você já pode configurar o sistema para após realizar as purgas, passar fase 
móvel no sistema 
Equilibrate method: 
 
QSM: Bomba quaternária: Setar o 
fluxo e composição de fase móvel 
que deverá passar na coluna após 
a finalização da purga. 
 
Se você não quiser iniciar 
passagem de fluxo na coluna após 
a finalização da purga, você deve 
colocar a informação de fluxo = 0 
mL/min 
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Startup system 
� Após configurar a purga e inícialização do sistema, clicar em Start 
Iniciar o processo de purga. 
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Criando instrument method e method set 
Clicar em Edit 
ou 
Na aba Run samples clicar : 
emEdit Instrument method 
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Instrument method 
Detector PDA 
 
Parâmetros do detector: 
Taxa de aquisição; 
Filtro de tempo; 
 
2D ou 3D ou ambos 
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Definição: 
� Filter time constant: é um parâmetro utilizado para filtrar o ruído da alta 
frequência. Deve ser usado com cuidado, pois se for utilizado uma constate de 
tempo muito alta, ela irá suavizar os picos. O Filter noise time podde ser definido 
como 1 ÷ Taxa de aquisição 
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Definição 
� Taxa de aquisição: Idealmente precisa-se de 15 a 20 pontos por pico 
 Precisa-se de 15 a 20 pontos para definir o ápice de pico onde o tempo de 
retenção é registrado 
 
Time 
� Linha preta é o mesmo pico cromatográfico 
– Linha vermelha são os pontos por pico 
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Instrument method 
Posição da coluna no 
column manager 
Temperatura 
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Instrument method 
 
Temperatura da coluna: quando trabalha-se com o 
forno para colunas de 300 mm e forno CH-A (forno 
para somenteuma coluna de 150 mm) 
Temperatura da amostrador: 4 °C a 40 °C 
Alarm Band: 
Faixa de variação permitida pelo 
método. Quando passar da faixa 
permitida, para mais ou para menos, 
as análises são interrompidas 
 
Nome dos solventes que serão 
utilizadados com Wash e purge 
Tempo de lavagem externa da agulha: variável de 
acordo com a característica da amostra. Pode ser 
lavada antes e depois da injeção, somente antes ou 
somente depois, por um tempo a ser definido. 
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Instrument method 
 
Nome dos solventes 
Máximo e mínimo de 
pressão do sistema 
Intervalo de limpeza do seal wash = se a fase móvel for 
composta por muito sal este intervalo pde ser de 1 min, para 
evitar danos ao pistão 
Etapas do gradiente 
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Instrument method 
� Finalizadas as informações do método: 
Clicar em File Save as 
Nomear e salvar 
 
na sequência 
Clicar em File novamente 
Save with method set 
Nomear e salvar 
 
Com isso já salvamos o instrument e o 
method set. 
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Rodando as amostras 
� Na aba do Run samples: 
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Processando os resultados 
� Na aba inicial do Empower, clicar em Browse Project 
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Irá abrir a seguinte página: 
 
Sample Set: Samples set injetadas 
 
Injections: Injeções realizadas 
 
Channels: Todos os canais adquiridos em todas as injeções do 
projeto 
 
Methods: Métodos utilizados no projeto, intrument method, 
methos set e processig method. 
Results: Todos os resultados processados 
 
Results set: Todos os resultados processados de uma semple 
set. 
 
Curves: Curvas de calibração criadas dentro do projeto 
 
 
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Para processar os resultados: 
Abre o cromatograma para processamento (Reviewer) 
Compara cromatogramas (Compare) 
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Processando os resultados 
Selecionar a amostra para criar o método de processamento e clicar em 
Review 
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Na tela Review: agora vamos criar o método de 
processamento 
� Se o dado foi adquirido no modo 3D, vai ser necessários extrair um canal antes 
de iniciar o método de processamento. 
 
Para isso, devemos adicionar o comprimento de onda de trabalho na seguinte 
lacuna e clicar no ícone extract chromatogram 
 
Extract Chromatogram 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Processing method wizard 
Clicar no ícone Processing Method wizard 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Na tela processing metho wizard deve-se clicar em: 
 Create a new processing method e em seguida em OK 
Na aba New processing Method 
escolher a tipo de processamento 
desejado na opção Processing 
Type 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Selecionar o tamanho da largura do pico: Você pode passar o cursor 
sobre o pico com o botão direito do mouse apertado e arrastar por toda 
base do pico que você for selecionar e a largura do pico se ajustará 
automaticamente a janela selecionada. 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
O mesmo deve ser feito para seleção da região de threshold. 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Selecione com o mouse o intervalo de tempo que você pretende 
realizar a integração. 
 
Com o botão direito do mouse apertado você deve selecionar uma 
janela e todos os picos que não estão dentro dela não serão 
considerados. 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Minimum Area – Área Mínima 
Minimum Height – Altura Mínima 
 
o Clique dentro do pico desejado, o pico ficará vermelho ou você pode adicionar um valor de mínimo 
de área ou mínimo de altura altura que você vai trabalhar e tudo que for inferior ao valor setado 
não será integrado. 
 
o Você pode adicionar um valor e testar para verificar se está apropriado. 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Calibration – Calibração 
 
Selecionar o método a ser 
quantificado. 
Área ou Altura. 
 
 
Selecionar a especificação 
do componente. 
Quantidade ou 
Concentração 
 
 
 
Selecionar o tipo de curva a 
ser usada. 
Linear ou outras opções 
 
 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Se a escolha for Sim (Yes), os nomes dos 
componentes serão copiados do campo de 
canais, será necessário somente selecioná-
los. 
Se a escolha for Não (No), os nomes dos 
componentes não serão exibidos no campo 
de canais, será necessário escrevê-los. 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Número de 
picos 
encontrados Nome do pico. 
Você pode digitar o nome 
de cada pico nas céluas 
Tempo de retenção dos 
picos encontrados 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Clicar em Next 
Selecionar o tipo de 
calibração: Externa ou 
Interna 
 
Externa: External 
Standard Clalibration 
 
Interna: Com um padrão 
interno – Single Internal 
Standard 
 
Com mais de um padrão 
interno – Multiple 
Internal Standards 
A calibração externa é usada quando se injeta padrões para calibração. 
 
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Criando o método de processamento dos resultados 
Se você estiver processando os seus resultados extraídos do canal 
3 D, esta janela vai aparecer, caso contrário não, quando trabalha-se 
com detector PDA. 
Se você vai realizar teste de 
pureza de picos. 
Se você tem uma biblioteca 
de espectros de PDA, no 
caso de estar utilizando um 
detector PDA. 
Clicar em Next 
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Criando o método de processamento dos resultados 
� Se você clicar sim na opção para avaliar a pureza de pico, vai abrir a aba PDA 
Spectral Contrast e nela você deve selecionar uma região de noise para 
determinação da pureza dos picos 
Clicar em Next 
©2017 Waters Corporation 51 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando o método de processamento dos resultados 
Clicar em Next 
©2017 Waters Corporation 52 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando o método de processamento dos resultados 
� Se você possuir a licensa Suitability, você deve habilita-la e para que ela realize os cálculos 
você deve acidionar o volume do sistema na lacuna , 
selecionar qual farmacopéia você pretende seguir. 
Clicar em Next 
©2017 Waters Corporation 53 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando o método de processamento dos resultados 
� Ainda se você tiver a licensa Suitability você pode determinar relação sinal ruído 
atraveés desta janela. 
Selecionar as opções 
desejadas para cálculo 
da relação signal to 
noise. 
Clicar em Next 
©2017 Waters Corporation 54 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando o método de processamento dos resultados 
Nomear o método de processamento. 
Clicar em Finish 
©2017 Waters Corporation 55 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando o método de processamento dos resultados 
Salvando como método set 
� Devemos salvar também como método set. 
©2017 Waters Corporation 56 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando o método de processamento dos resultados 
Salvando como método set 
Nomear o método set 
Clicar em Save 
©2017 Waters Corporation 57 COMPANY CONFIDENTIAL 
Para visualizar o method set 
Na aba review clicar no ícone 
method set 
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Visualizando o Method set criado 
Comprimento de onda extraído 
para processamento dos dados 
e o método de processamento 
criado. 
Lembrando que: Só é necessário salvar como métod set se o processamento 
for realizado no canal 3 D, caso contrário não precisa pois o canal já foi extraído 
no momento da aquisição. 
©2017 Waters Corporation 59 COMPANY CONFIDENTIAL 
Processando os resultados 
� Na tela principal do projeto: Selecionar as amostra que vai processar e clicar em 
Reviewer 
©2017 Waters Corporation 60 COMPANY CONFIDENTIAL 
Analisando os resultados 
Na janela Review, clicar em Open, Method set, selecionar o method set 
criado e clicar em Open 
©2017 Waters Corporation 61 COMPANY CONFIDENTIAL 
Extraído o cromatograma para processar depois 
� Se você estiver trabalhando com o canal 3D, você precisa extraír o comprimento 
de onda de trabalhao 
Digitar o comprimento 
de onda de trabalho e 
clicar em Extract 
chromatogram 
©2017 Waters Corporation 62 COMPANY CONFIDENTIAL 
Processando os resultados 
� Com o método aberto e o canal extraído agora é só integrar e calibrar cada um 
dos cromatogramas para avaliar os resultados. 
©2017 Waters Corporation 63 COMPANY CONFIDENTIAL 
Quando clica-se em 
integrate é feita a 
integração de todos 
os picos de acordo 
com o método de 
processamento 
aberto na etapa 
anterior. 
©2017 Waters Corporation 64 COMPANY CONFIDENTIAL 
 
Quando clica-se em 
calibrate é feita a 
nomeação de todos 
os picos de acordo 
com o método de 
processamento 
aberto na etapa 
anterior. 
Calibrate 
©2017 Waters Corporation 65 COMPANY CONFIDENTIAL 
 
 É possível ver os 
cromatogramas selecionados, 
se for 3 D, você vei ver na aba 
3 D e se for 2 D, você verá na 
aba 2 D. 
 Na aba Peaks você 
vai ver todos os picos 
integrados em cada um dos 
cromatogramas selecionados. 
©2017 Waters Corporation 66 COMPANY CONFIDENTIAL 
Salvando os resultados 
� Integrado todos os cromatogramas você pode salva-los para gerar o relatório. 
 
� Para salvar você pode ir no ícone Salve all results 
 
 
 
 
� Para abrir o resultado salvo, na Aba inicial do projeto, clicar na aba results e se 
você fez o procedimento certo, vai estar salvo. 
©2017 Waters Corporation 67 COMPANY CONFIDENTIAL 
Para processar toda a sample set ao mesmo tempo. 
� Na aba inicial do projeto 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
� Selecionar a sample set que você deseja processar na aba sample set.. 
©2017 Waters Corporation 68 COMPANY CONFIDENTIAL 
Para processar toda a sample set ao mesmo tempo. 
� Clicar com o botão direito do mouse em cima da sample set que deseja 
processar. 
Selecionar o método de 
processamento e clicar em ok 
©2017 Waters Corporation 69 COMPANY CONFIDENTIAL 
Para processar toda a sample set ao mesmo tempo. 
� Os resultados serão proecessados e você poderá visualizar na aba Results set 
da aba principal do projeto. 
Você pode clicar em Review, e ver todos os resultados integrados. 
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Curva de Calibração 
©2017 Waters Corporation 71 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando uma curva de calibração: 
� Para gerar a curva de calibração a deve-se primeiramente adicionar as 
concentrações de cada ponto. Para isso precisa-se adicionar os amounts. 
 
 
 
 
1. Clicar no sample set que foram rodadas as amostras e em seguida clicar em 
alter sample 
©2017 Waters Corporation 72 COMPANY CONFIDENTIAL 
Na coluna sample type deve-se adicionar stadard para todos os padrões ou 
amostrs que serão utilizadas para gerar a curva de calibração. 
Criando uma curva de calibração: 
Feito isso abrirá a seguinte janela com todas as injeções realizadas na 
sample set selecionada: 
©2017 Waters Corporation 73 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando uma curva de calibração: 
� Feito isso deve-se Salvar e clivar em Amount 
©2017 Waters Corporation 74 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando uma curva de calibração: 
� Abrirá a seguinte janela: 
 
©2017 Waters Corporation 75 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando uma curva de calibração: 
� Se você já fez um processing method, você pode extrair os nomes dos picos do 
processing que você já fez e salvou, neste caso você deve clicar em 
 
 
(Na linha superior) 
 
� O primeiro ícone vai puxar as informações do method set e o outro do process 
method, aí você escolhe do que você criou e abre o método que você salvou, ele 
vai puxar os mesmo nomes, lembre-se que se você for digitar, precisa ser 
exatamente o mesmo nome, qualquer letrinha ou caracter diferente já vai 
dar erro e ele não vai conseguir puxar os valores, por isso é melhor extrair 
do process method que aí não tem erro. 
 
 
 
©2017 Waters Corporation 76 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando uma curva de calibração: 
� Feito isso você clica em Componets, e em All samples 
 
Agora pode adicionar as 
concentrações de cada 
ponto da curva. 
©2017 Waters Corporation 77 COMPANY CONFIDENTIAL 
Criando uma curva de calibração: 
� Feito isso é só clicar em Ok e processar os dados novamente que a curva de 
calbração vai aparecer. 
 
� Para visualizar a curva de calibração quando você estiver processando os 
resultados, deve clicar em 
©2017 Waters Corporation 78 COMPANY CONFIDENTIAL 
Montando o Relatório 
©2017 Waters Corporation 79 COMPANY CONFIDENTIAL 
� Com os resultados processados salvos agora podemos gerar o report. 
� Selecione o cromatograma e clique no ícone Preview/Publisher 
 
Gerando o Report 
©2017 Waters Corporation 80 COMPANY CONFIDENTIAL 
Gerando o report 
Você pode selecionar a opção: Use a report method that was generate to be 
appropriate for the selected data = ele vai montar um report que mais se encaixa nos 
seus dados 
Ou 
Se já existir um modelo de repor que você queria utilizar selecione a opção: Use te 
following report method. 
 
©2017 Waters Corporation 81 COMPANY CONFIDENTIAL 
� Você pode usar o report proposto ou clicar em Close e editar o seu report 
Gerando o report 
©2017 Waters Corporation 82 COMPANY CONFIDENTIAL 
 Quando você clicar em Close vai abrir esta infinidade de opções para você editar 
o seu report, e neste é caso é só você escolher qual opção é a mais apropriada 
para você. 
Gerando o report 
©2017 Waters Corporation 83 COMPANY CONFIDENTIAL 
� Para adicionar algumas das opções para o relatório você deve clicar em cima da 
opção e arrastar para o report. 
 
� Se você quiser editar alguma tabela ou cromatograma, você deve clicar com o 
botão direito do mouse em cima da tabela ou cromatograma editar de acordo 
com a sua necessidade. 
Gerando o report 
Fazendo isso você pode editar legendas, escala, 
enfim, o que você precisar, tanto para tabelas 
qunto para cromatogramas 
©2017 Waters Corporation 84 COMPANY CONFIDENTIAL 
� Agora com o Report completo vamos salvar! 
 
Gerando o Report 
Salva report em 
.PDF 
Salva modelo de report: que 
você pode usar para gerar os 
próximos resultados 
©2017 Waters Corporation 85 COMPANY CONFIDENTIAL 
Pronto!! Agora é só praticar e explorar o software para descobrir 
mais opções e otimizar o seu trabalho. 
©2017 Waters Corporation 86 COMPANY CONFIDENTIAL 
Marina Ansolin 
Especilaista em Suporte técnico da Waters 
(19) 99686 4028