Coloração de Gram

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Luís Felipe Queiroz de Souza – Medicina UFBA – Turma 5
	Coloração de Gram				
 Luís Felipe Queiroz de Souza – Medicina UFBA – Turma 5
· Descoberta em 1884 pelo dinamarquês Hans Christian Gram, a técnica de coloração de Gram auxilia no diagnóstico de doenças bacterianas, é uma técnica que permite distinguir os dois principais grupos das bactérias – Gram positivas e negativas - através da microscopia óptica. É o método mais importante e mais utilizado atualmente na bacteriologia e sua finalidade é a classificação de microrganismos com base em suas características tintoriais, tamanho, forma e arranjo celular.
· A coloração de Gram envolve uma série de procedimentos antes de chegar à etapa final de leitura da lâmina preparada, primeiro é feito um esfregaço e em seguida uma secagem buscando a fixação na chama. Nesta, o corante Cristal Violeta adsorve-se nas células, forma um complexo com o iodo (o Lugol) e após a etapa diferencial, com álcool-acetona, as células são contra coradas com Fucsina de Gram.
· Em relação às características tintoriais, as bactérias Gram-positivas coram-se de roxo, pois não permitem a entrada do agente diferenciador (álcool + acetona) e as bactérias Gram-negativas coram-se de rosa, pois permitem a entrada do agente diferenciador e conseguem se corar com o corante fucsina.
Em resumo:
1. É feito o preparo da lâmina fazendo o esfregaço e colocando para secar e fixar na chama
2. É aplicado o coral violeta (por 2 minutos)
3. Lavar com água destilada
4. Fixar com Lugol (por 1 minuto)
5. Lavar com água destilada
6. Descorar com álcool absoluto (por 10 segundos)
7. Lavar com água destilada
8. Contra corar com fucsina (por 1 minuto)
9. Lavar, secar (de forma suave, sem muita força) e observar o resultado/a coloração.
Parede Celular das Bactérias Gram Positivas e Negativas
Gram Positivas: Essas bactérias apresentam uma parede mais espessa, com uma grande quantidade de camadas de peptideoglicano (ficando menos suscetível ao rompimento mecânico), ligada a algumas células de forma cruzada dando ainda mais resistência e rigidez à parede. Algumas dessas bactérias apresentam também uma camada de ácido teicóico na camada externa da parede celular. Esse ácido pode assumir um papel no crescimento celular, impedindo a ruptura extensa da parede e a possível lise celular, além de fornecer uma boa parte da especificidade antigênica da parede (contribuindo na formação de anticorpos específicos). Alguns exemplos de bactérias Gram positivas, são: Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Clostridium, Enterococcus.
 
Gram Negativas: Essas bactérias possuem uma ou poucas camadas de peptideoglicano, além de uma membrana externa formada por lipopolissacarídeos, lipopoliproteínas e fosfolipídeos. Essa camada externa assume algumas funções na bactéria, como uma barreira de proteção contra detergentes, metais pesados, alguns corantes e antibióticos (como a penicilina) e em enzimas digestórias como a lisozima. Elas não possuem ácido teicóico na formação da parede celular, se tornando assim, mais suscetíveis a rompimentos mecânicos. Alguns exemplos de bactérias Gram Negativas, são: Helicobacter, Chlamydia, Salmonella e Pseudomonas