Antígenos e Anticorpos - Imunologia Clínica

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Antígen� � Anticorp�:
antígen�, anticorp�,
afinidad� � avid�
Anticorpos:
. Podem reconhecer quase todos os
tipos de moléculas biológicas, incluindo
intermediários metabólicos, açúcares,
lipídios, hormônios, ácidos nucleicos, e
proteínas
. São específicos para os determinantes
antigênicos ou epítopos
. Os linfócitos B são ativados pelas presença
do antígeno e se diferenciam em plasmócitos
secretores de anticorpos (imunoglobulinas)
Estrutura básica dos anticorpos:
● Vermelho: Regiões variáveis
(sítios de ligação ao antígeno)
● Azul: Região constante
(função efetiva)
● Amarelo: Cadeia leve
● Verde: Cadeia pesada
Processo de troca de classe e maturação ocorrem no linfonodo:
. Ativação e migração de linfócitos T e B
. Interação de células T e B
. Diferenciação de células B com secreção de Ig e mudança de isotipo
. Reação do centro germinativo com maturação de afinidade, plasmócitos de vida longa, mudança de
isotipo e célula B de memória
Encontro dos anticorpos no soro:
Epitopo:
. O epitopo ou, determinante antigênico, é o
nome dado ao sítio do antígeno que é
reconhecido pelo anticorpo
Principais funções dos anticorpos:
→ Neutralização: microrganismos e toxinas
→ Opsonização: citotoxidade celular dependente
de anticorpo (ADCC) e ativação do
complemento
. Para o desencadeamento dessas funções é
necessário que os anticorpos estejam ligados
a alguma superfície (exceto neutralização) e
estejam em dupla pelo menos (exceto a IgM)
Ligação antígeno-anticorpo:
. A ligação entre antígeno-anticorpo envolve
ligações não-covalentes reversíveis, como:
→ Forças eletrostáticas
→ Ligações de hidrogênio
→ Forças de Wan der Waals
→ Interações hidrofóbicas
Desenvolvimento de células B:
. O rearranjo gênico das Ig gera cerca de
100.000.000 especificidades antigênicas
diferentes
. As cadeias leves e as cadeias pesadas são
codificadas por famílias multigênicas e
situadas em diferentes cromossomos
. No DNA de linhagem germinativa cada uma
dessas famílias multigênicas contém diversas
sequências codificantes chamadas de
segmentos de genes separadas por regiões
não codificantes
. Durante a maturação das células B, estes
genes são rearranjados e unidos para formar
os genes das imunoglobulinas funcionais
→ Cadeia Leve: V, J e C
→ Cadeia Pesada: V, J, D e C
→ L: líder (guia a cadeia até o retículo
endoplasmático)
Maturação da avidez ao longo da resposta
imune:
. A maturação da afinidade ocorre
devido ao grande número de mutações
somáticas que ocorrem nos linfócitos B
com a expansão seletiva de clones que
produzem anticorpos de alta afinidade
Afinidade:
. A força de ligação entre uma única
combinação de anticorpos-epítopo antigênico
é chamada de afinidade
. A afinidade é representada pela constante de
dissociação (Kd), que é inversamente
proporcional à afinidade
. Um Kd pequeno significa uma forte interação
Avidez:
. A avidez é a medida da estabilidade geral
dos imunocomplexos e depende da afinidade,
da valência do anticorpo e do arranjo
geométrico
. A IgM possui 10 sítios idênticos de interação
com o antígeno, podem se ligar a
determinantes idênticos repetitivos e mesmo
com baixa afinidade, produzem uma interação
de alta avidez
Antígenos:
. É qualquer substância que pode ser
especificamente ligado por uma molécula de
anticorpo ou receptor de célula T (esta
característica é chamada de antigenicidade)
. A maioria dos antígenos são complexos
contendo muitos epítopos diferentes
. Um antígeno também pode ser imunogênico
Haptenos:
. São antígenos, possuem antigenicidade,
mas não possuem imunogenicidade
→ Para ser imunogênico precisa ser
associado a uma molécula carreadora!
. São moléculas pequenas, com peso
molecular menor que 4kDa
Especificidade do sistema imune para pequenas
variações nas estruturas dos haptenos:
Determinantes antigênicos:
→ Lineares: são formados por aminoácidos
adjacentes ligados covalentemente
→ Conformacionais: são formados por
aminoácidos que são aproximados durante o
enovelamento da proteína
→ A: determinante conformacional / desnaturação / determinante perdido por desnaturação
→ B: determinante linear / Ig se liga ao determinante apenas na proteína desnaturada / a Ig se liga ao
determinante, tanto na proteína nativa quanto na desnaturada
→ C: determinante neoantigênico (criado por proteólise) / determinante próximo ao local de proteólise
Propriedades do Imunogeno que contribuem para sua Imunogenicidade:
. Natureza química (proteínas)
. Características filogenéticas
. Tamanho e complexidade
. Estrutura espacial
. Acessibilidade
. Estabilidade
Composição e heterogeneidade química:
Reação Cruzada:
. A produção de um anticorpo induzido por uma preparação antigênica pode ocorrer contra um
epítopo presente em diferentes antígenos. Embora os antígenos sejam diferentes, são
estruturalmente relacionados
. Este tipo de interação é conhecido como reação cruzada
. O antígeno que leva a síntese do anticorpo é chamado de antígeno homólogo
. O antígeno que possui o mesmo epítopo é chamado de heterólogo
. Os anticorpos produzidos possuem uma maior afinidade pelo antígeno que levou a sua síntese, ou
seja, o antígeno homólogo, por possuírem mais complementariedade
Anticorpos Monoclonais (mAbs):
. São anticorpos produzidos por um único clone de um linfócito B, sendo, portanto, idênticos em
relação às suas propriedades físico-químicas e biológicas
. Diferentes tipos de mAbs podem ser gerados em laboratórios para reconhecerem e se ligarem ao
respectivo antígeno de interesse
. Os anticorpos monoclonais produzidos em laboratório são gerados a partir de linfócitos B isolados
de camundongos cujos sistemas imunológicos foram estimulados pelo antígeno de interesse
Técnica de Milstein e Kohler:
. Imunização dos camundongos com o antígeno de interesse
. Fusão e seleção dos hibridomas
. Cultivo dos hibridoma
. Purificação dos monoclonais
Conceitos Básicos de Imunodiagnósticos:
. Nas últimas décadas, o progresso tecnológico na área da biologia tem permitido o desenvolvimento
de métodos capazes de detectar o complexo antígeno-anticorpo (Ag-Ac) com elevada eficiência e
confiabilidade
. O termo imunodiagnóstico vem sendo utilizado para designar o diagnóstico laboratorial por meio de
técnicas imunológicas que revelam a presença do anticorpo, do antígeno e de hipersensibilidade
. Os principais tipos de construções de imunoensaios são:
● Imunoprecipitação
● Aglutinação
● Fixação do complemento
● Neutralização
● Imunoconjugados
→ Imunofluorescência / citometria de fluxo
→ Radioimunoensaio
→ Imunoenzimáticos
→ Imunofluorimétricos
→ Quimioluminescência
→ Imunocromatográficos