3 APLICAÇÃO DA IMUNOLOGIA CLÍNICA E O LABORATÓRIO DE ANÁLISES CLÍNICAS

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Importância dos Testes Sorológicos na Patologia Clínica
Grande desenvolvimento dos testes sorológicos
Diagnóstico de certeza
Demonstração do patógeno
Identificação dos seus produtos nos tecidos ou fluidos do hospedeiro
Problemas relacionados (encontrados) 
Nem sempre é possível é possível realizar a detecção de antígenos ou
anticorpos.
Pode ser pela ausência do agente causador da doença.
Pela falta de sensibilidade dos métodos empregados = direto ou indireto.
Pelo longo período das análises.
Métodos imunológicos
São amplamente empregados na triagem de doadores de sangue, no
diagnóstico de infecções e na soroepidemiologia. 
Suprem as falhas dos métodos parasitológicos (maior sensibilidade) ou
microbiológicos (tempo). 
Pesquisam antígenos, anticorpos ou imunocomplexos. 
Podem ser rápidos, simples execução, possibilidade de automação, baixo custo
operacional (dependendo da técnica)
Aplicação dos Testes Sorológicos e Interpretação dos resultados
Auxilia os clínicos, patologistas no entendimento, esclarecimento da doença (ou
quadro da doença).
Auxilia ao orientar o tratamento, prognóstico e avalição do paciente.
Auxilia no diagnóstico correto do paciente.
Pode ser associado à investigações clínicas e epidemiológicas.?
Importância da Pesquisa de Anticorpos no Diagnóstico Individual
(a) Elucidar processos patológicos com sintomas e sinais clínicos confundíveis –
pesquisa de anticorpos específicos com testes padronizados
Ex: toxoplasmose x mononucleose; toxoplasmose x rubéola
(b) Diferenciar a fase da doença – detecção das diferentes classes de anticorpos,
acompanhamento do surgimento das imunoglobulinas
Ex: doenças congênitas (toxoxplasmose, sífilis) 
(c) Diagnosticar doença congênita
IgM – não atravessa a placenta x IgG – atravessa a placenta
IgM – fase aguda da doença – pesquisa no sangue do cordão umbilical
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Acompanhamento do recém-nascido
(d) Selecionar doadores de sangue
Triagem sorológico para a prevenção da doença transfusional – Chagas, HIV, HTLV I e
II, Sífilis, hepatites B e C
Selecionar doadores e receptores de órgãos para transplantes
(e) Pesquisa de anticorpos altamente específicos – antígenos do complexo principal
de histocompatibilidade (CPH)
Tipagem dos antígenos de CPH
(f) Avaliar o prognóstico da doença 
Pesquisa de anticorpos contra determinados componentes antigênicos – marcadores
imunológicos para a avaliação do prognóstico de uma doença
Ex: na hepatite B – pesquisa de antígeno HBeAg = componente de infectividade e a
contagiosidade do vírus
Importância da Pesquisa de Anticorpos em Inquéritos Soroepidemiológicos
(a) Estabelecer prevalência da doença
Pesquisa de anticorpos IgG x prevalência da doença
(b) Verificar a erradicação da doença
Investigação da presença da doença - erradicação da doença
Ausência de anticorpos em crianças nascidas em local suspeito – erradicação
(c) Verificar a reintrodução de novos casos em áreas consolidadas
Presença de anticorpos IgM ou o aumento de anticorpos IgG – reintrodução do
patógeno
Monitoramento sorológico
Importância dos Testes Sorológicos na Pesquisa de Antígenos
(a) Como critério de cura
Ausência do patógeno ou de seus produtos após processo infeccioso
(b) Definição da etiologia da doença
Encontro do patógeno no hospedeiro define o processo infeccioso
Emprego da Reação da Cadeia da Polimerase e métodos imunológicos
(c) Na seleção de doadores de sangue
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Selecionar doadores de sangue pela pesquisa do agente etiológico
Ex: hepatite B – pesquisa do HBsAg
(d) Em inquéritos epidemiológicos
Restrita
Mapeamento das regiões
Variações
Apesar do desenvolvimento dos testes imunológicos e moleculares ainda assim
existem limitações que envolvem:
Resposta imune do hospedeiro: o resultado obtido no teste pode ser falso
positivo (reações cruzadas) ou falso negativo.
Todos os fatores devem ser analisados para definir o quadro patológico mais
próximo possível do estado clínico do paciente.
Validação dos Imunoensaios
A validação dos imunoensaios é feita com base nos parâmetros de sensibilidade,
especificidade, repetitividade, reprodutibilidade e estabilidade.
Problemas no imunoensaio = nova amostra = problema desaparece.
Os imunoensaios são objeto de padronização e normatização.
Controle de Qualidade – pré analítico.
Preparo e Instruções ao Paciente 
Fatores inerentes ao paciente 
Idade.
Sexo.
Etnia.
Gravidez.
Período de Ciclo Menstrual.
Uso de medicamentos (anticoncepcional, vitaminas, etc).
Amostras:
Coleta 
É o primeiro passo para TODAS as análises efetuadas no Laboratório Clínico. 
Todas as etapas seguintes dependem da coleta do material.
É importante que o procedimento apropriado - (indicado) seja seguido = para
obtenção de resultados exatos.
Utilizar material completamente limpo para evitar falsos resultados.
Principais anticoagulantes e seus usos:
EDTA (ácido etilenodiamino tetra-acético): é o anticoagulante mais usado para
hematologia porque não provoca deformação nas células. Atua como agente
quelante do cálcio, impedindo que ocorra o processo de coagulação.
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Comercialmente estão disponíveis os sais de sódio e de potássio, em soluções
aquosas prontas para uso. 
Heparina (HEP): é um anticoagulante natural, sendo o mais recomendado para
análises bioquímicas, pois não interfere com os reagentes usados na maioria
dos testes. Atua interferindo na conversão de protrombina em trombina. Pode
ser usado para contagem eritrocítica, mas não é recomendado para análises
leucocitárias, pois pode causar agregação dos leucócitos, alterando a sua
morfologia e dificultando a contagem. Como desvantagem assinala-se seu custo
mais elevado que os outros anticoagulantes.
Citrato de sódio: Pouco recomendado, pois causa a deformação morfológica das
células sangüíneas e interfere com vários testes bioquímicos. Atuam quelando o
cálcio, formando um complexo com o mesmo e impedindo o processo de
coagulação.
Fluoreto de sódio (NaF): similar ao citrato, sendo recomendado especificamente
para a dosagem de glicose, pois inibe o processo de glicólise que ocorre nas
hemácias, mantendo os níveis in vitro deste metabólito por mais tempo. 
Oxalatos de cálcio, de potássio ou de amônia: interferem com o hematócrito e
alteram a distribuição eletrolítica, razão pela qual não são recomendados para
testes de minerais. Atuam por interferência com o cálcio.
Tubo seco: sem anticoagulante, obtenção do soro.
Pergunta: qual a diferença entre soro e plasma? Como são obtidos?
Amostra de urina - primeiro jato, urina 24horas, urocultura.
Amostra fezes - parasitológico com sonservante, sem conservante.
Tempo de realização da coleta 
Hormônios
Alguns exames hormonais são realizados após estímulo – curvas de
estímulo/supressão
Outros marcadores
Cardíacos (após infarto), proteínas de fase aguda – tempo decorrido entre o
evento e a coleta.
Ensaios de monitoramento.
De drogas: seguir protocolos padronizados (tempo, cotela).
Imunologia.
Importante conhecer a janela imunológica.
O conhecimento do analista pode ajudar a determinar o período adequado
de coleta.
Obtenção de soro ou plasma
É necessário certo tempo para formação do coágulo e retração ideal.
 Não é aconselhável refrigerar a amostra.
 Após centrifugação, obtêm o soro ou plasma.
Armazenamento e Transporte
Imunoensaios
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Pesquisa de anticorpos – soro pode ser congelado a -20°C, ou -80°C.
Alíquotas com pequenos volumes.
Temperatura da geladeira e umidade interna.
Tubos mantidos tampados.
Verificar o tipo de exame e recomendações especiais.
Transporte
Transporte de material biológico é regulado por legislação local e internacional.
A regra é garantir a integridade da amostra e evitar contaminação dos
manipuladores e do ambiente.
Contêineres e caixas resistentes.
Medidas de biossegurança.
Erros em Laboratórios.
Cerca de 70 % erros => fase pré analítica preparo inadequado, cuidados na
identificação, transporte inadequado, interferentes.
Cerca de 20 % erros => fase pós analítica erros de transcrição de resultados.
Apenas 10 % erros => fase analítica Reagentes impróprios, equipamentos
descalibrados, má prática.
Laboratório Clínico
Suporte laboratorial para o clínico / melhor entendimento do paciente e da
patologia.
Objetivo: melhoria na qualidade de vida e da saúde das pessoas:
Diagnóstico das patologias.
Acompanhamento da evolução / prognóstico.
Controle de doenças crônicas.
Avaliação do tratamento após o diagnóstico.
Serviços realizados no laboratório:
Pré-analíticos.
Intra-analíticos.
Pós-analíticos.
A) Preparo das amostras (fase pré-analítica),
B) Realização dos testes e exames (fase analítica),
C) Análise dos resultados obtidos nos testes e exames, a liberação destes
resultados e a preparação dos laudos (fase pós-analítica). 
Importância da Qualidade
Confiabilidade nos resultados.
Reconhecimento.
Rastreabilidade (resultados armazenados, documentação, estudo).
Organização dos trabalhos.
Organização dos dados obtidos.
Evitar duplicidade de estudos em diferentes países.
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Responsabilidade e abrangência:
Responsabilidade técnica em todos os Setores do Laboratório
Clínico: Hematologia, Bioquímica, Microbiologia, Micologia, Biologia Molecular,
Parasitologia, Urinálise, Hormonologia, Toxicologia e Análises Toxicológicas, Sistema
da Qualidade, Liberação de Laudos e Coleta. Participação na equipe de Anatomia
Patológica, sob responsabilidade Médica, com especialização em Citopatologia. 
 
 
Exercício 1:
A coleta de material de exame é de extrema importância para o diagnóstico da amostra analisada. No que se refere às técnicas
de coleta de amostras para exame laboratorial,
 
A)
Para obtenção de soro a coleta é feita em tubo seco sem anticoagulante.
 
B)
Para determinações bioquímicas como exemplo colesterol e glicemia não é necessário jejum.
 
C)
Anticorpos não podem ser pesquisados no plasma, portanto é obrigatória a obtenção de soro para a pesquisa.
 
D)
O sangue total é a amostra de escolha da imunologia.
 
E)
Antígenos e anticorpos são facilmente detectados nas amostras de soro.
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Exercício 2:
Um teste imunológico pode ser empregado para
I. Diferenciar a fase da doença (pesquisa de IgM fase aguda e IgG memória imunológica);
II. Auxiliar na triagem de doadores de sangue e excluir o risco transfusional;
III. Elucidar doenças com sinais e sintomas parecidos ou semelhantes.
É correto apenas o que se afirma em
 
A)
I.
 
B)
II.
 
C)
III.
 
D)
I e II.
 
E)
I e III.
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Exercício 3:
Os laboratórios de análises clínicas realizam diferentes testes com o objetivo de auxiliar o clínico no esclarecimento da condição
de seu paciente. Para tanto, é fundamental a implantação e manutenção da qualidade no laboratório clínico. De acordo com as
características e função das análises, é correto afirmar:
 
A)
Na fase Pré-Analítica são aplicados os testes específicos.
 
B)
Na fase Analítica são indicadas as orientações para o paciente.
 
C)
A liberação dos resultados (laudo) é a fase de maior erro nos laboratórios.
 
D)
Nas análises laboratoriais o cuidado com reagentes, treinamento de funcionários caracteriza a fase Analítica.
 
E)
A orientação do paciente para o preparo para a realização de seu(s) exame(s) deve ser realizada pelo médico.
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Exercício 4:
As análises de laboratório visam a obtenção de resultados compatíveis com a metodologia adotada. No entanto, todo trabalho
experimental é suscetível de interferência por diversos fatores, muitos dos quais fogem ao controle. É, portanto, essencial a
existência de um sistema de controle de qualidade de forma a garantir a confiabilidade dos resultados emitidos. Analise as
sentenças abaixo e indique a correta.
 
A)
Erros Pré-analíticos ocorrem devido às análises incorretas realizadas pelo laboratorista.
 
B)
O preparo do paciente – horas de jejum, controle de dieta, são exemplos de controle analítico para a realização dos testes
sorológicos.
 
C)
O treinamento dos técnicos, o uso de reagentes na validade e o emprego de programas de qualidade auxiliam na manutenção
da qualidade dos exames realizados em laboratórios.
 
D)
Para a realização da maioria dos exames bioquímicos e hematológicos não é necessário fazer jejum.
 
E)
Erros analíticos podem ser evitados pelo uso de equipamentos (automação) nos laboratórios de análises clínicas.
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Exercício 5:
Em relação às propriedades dos testes diagnósticos NÃO é correto afirmar que:
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A)
Sensibilidade mede a proporção entre o número de exames positivos corretos e o número de exames positivos.
 
B)
Quanto maior for a sensibilidade de um teste diagnóstico, menor será a probabilidade de ocorrência de um resultado falso
negativo;
 
C)
Quanto maior for o Valor Preditivo Positivo, maior será a probabilidade de um indivíduo positivo a um determinado teste
diagnóstico ser portador da doença em questão.
 
D)
Quanto menor for a especificidade de um teste diagnóstico, maior será a probabilidade de ocorrência de um resultado falso
positivo.
 
E)
Sensibilidade e especificidade de um teste são conhecidas como propriedades estáveis, pois não se alteram com o a prevalência
da doença.
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Exercício 6:
O Laboratório de análises clínicas utilizam métodos de imunodiagnóstico com alta
(1), o que deve determinar (2):
 
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A)
(1) especificidade (2) maior número de resultados falso-positivos.
 
B)
(1) especificidade (2) menor número de resultados falso-positivo.
 
C)
(1) sensibilidade e especificidade (2) maior número de resultados falso-negativos.
 
D)
(1) sensibilidade (2) menor número de repetições para a análise.
 
E)
(1) especificidade (2) aumento de resultados falso positivo e falso-positivo.
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Exercício 7:
Ao realizar uma reação de enzimaimunoensaio (ELISA) competitivo para a detecção
de anticorpos contra um determinado antígeno, qual amostra biológica deve ser
utilizada? E de que maneira deve ser obtida? 
 
A)
Soro, tubo com heparina. 
 
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B)
Sangue total, tubo com EDTA. 
 
C)
Soro, tubo com fluoreto de sódio. 
 
D)
Soro, tubo seco. 
 
E)
Plasma, tubo seco.
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