Coloracao de gram

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Ana	Luiza	Azevedo	de	Paula	–	Odontologia		
Processo	saúde	e	doença	1		
															Odontologia		
				COLORAÇÃO	DE	GRAM		
	
					Bactérias	Gram+	e	Gram	-	
	
O	método	 	 de	 coloração	 de	Gram	permite	
que	as	bactérias	 retenham	a	cor	com	base	
nas	diferenças	nas	propriedades	químicas	e	
físicas	da	parede	celular.	O	nome	Gram	 foi	
dado	 a	 esse	 processo	 	 em	homenagem	ao	
patologista	 dinamarquês	 Hans	 Christian	
Joachim	Gram	que	realizou	a	descoberta	em	
1884	 e	 até	 hoje	 continua	 sendo	 a	 técnica		
mais	 utilizada	 nos	 laboratórios	 de	 análises	
clínicas	 e	 microbiologia.	 Através	 da	
coloração	é	possível	identificar	e	diferenciar	
os	 dois	 principais	 grupos	 de	 bactérias	 :	
Gram-positivas	ou	Gram-negativas.	
Em	 síntese,	 as	 bactérias	 gram-positivas	
retém	 o	 corante	 púrpura	 e	 o	 iodo,	 eles	
penetram	 na	 parede	 celular	 (que,	 possui	
uma	camada	espessa	de	peptídeoglicano)	e	
o	álcool	não	consegue	remover	o	corante	da	
mesma.	 Por	 esse	 motivo,	 não	 sofrem	
modificação	ao	serem	contracoradas	com	a	
fucsina	ou	safranina.	
Já	nas	bactérias	gram-negativas,	a	 lavagem	
com	 o	 álcool	 consegue	 romper	 a	 camada	
externa	(LPS)	que	esse	grupo	possui	e	com	
isso,	remove	o	corante	púrpura	das	células	
(a	camada	de	peptídeoglicano	das	gram	–	é	
delgada,	 o	 que	 facilita	 a	 ação	 do	 agente	
descolorante).	 Assim,	 as	 gram-negativas	 se	
tornam	 incolores	 e	 depois	 são	
contracoradas	com	o	a	fucsina	ou	safranina,	
adquirindo	a	cor	rosa.	
	
	
ü Bactérias	Gram	positivas		
	
As	 bactérias	 gram-positivas	 têm	 a	 sua	
parede	 celular	 composta	 por	 uma	 camada	
espessa	de	peptídeoglicano,	ácidos	teicoicos	
e	 fosfato.	Não	 são	 resistentes	a	penicilinas	
ou	 cefalosporinas	 (antibióticos	 que	 atuam	
na	 lise	 da	 parede	 celular)	 ao	 contrário	 das	
gram-negativas,	 que	 por	 possuírem	 a	
camada	 externa,	 impedem	 a	 penetração	
desses	antibióticos.	
	
ü Bactérias	Gram	Negativas		
As	bactérias	gram-negativas,	possuem	uma	
fina	 camada	de	peptídeoglicano	no	espaço	
periplasmático	e	uma	membrana	externa	–	
bicamada	 lipídica	 que	 contém	
lipopolissacarídeos/endotoxina	 (LPS),	
lipoproteínas	e	porinas.	
As	bactérias	 gram-negativas	 são	de	grande	
importância	clínica,	pois	estão	associadas	a	
uma	 série	 de	 patologias	 muito	 comuns	
como:	 infecções	 intestinais	 e	 urinárias,	
meningite	e	ISTs.		
	
	
Ana	Luiza	Azevedo	de	Paula	–	Odontologia		
	Metodologia	da	Coloração	GRAM	
	
Primeiramente,	é	necessário	fazer	o	preparo	
da	lâmina	para	ser	feito	o	esfregaço.		
	
ü Preparo	do	esfregaço		
	
Pegar	uma	lâmina	limpa	no	recipiente,	secar	
e	flambar	rapidamente	na	chama	do	bico	de	
Bunsen.	
	
	
Identificar	o	lado	da	lâmina	onde	será	feito	o	
esfregaço.	
	
	
Flambar	 a	 alça	 bacteriológica	 e	 deixá-la	
esfriar	 e	 colocar	 na	 lâmina	 uma	 gota	 de	
solução	salina	fisiológica.	
	
Flambar	 a	 agulha	 bacteriológica,	 deixar	
esfriar	próximo	a	chama,	abrir	a	placa	com	a	
cultura	teste	e	tocar	a	colônia	escolhida	para	
retirada	da	amostra.	
	
Esfregar	 o	 material	 com	 movimentos	 de	
rotação	da	alça	bacteriológica,	para	se	obter	
um	 esfregaço	 de	 forma	 oval,	 bem	 fino	 e	
uniforme.	
	
Deixar	secar	nas	proximidades	da	chama.	
	
Fixar	 o	 esfregaço	 passando	 a	 lâmina	 (lado	
oposto	ao	esfregaço)	5	vezes	na	chama	do	
bico	de	Bunsen	(rapidamente).	
	
Ana	Luiza	Azevedo	de	Paula	–	Odontologia		
Após	 o	 esfregaço	 estar	 pronto,	 	cubra	 a		
lâmina	 com	 o	 corante	 violeta-de-metila	 e	
logo	 após	 deixe	 por	 aproximadamente	 60	
segundos.	
Escorra	 o	 corante	 e	 lave	 em	 um	 filete	 de	
água	 corrente;	 Cubra	 a	 lâmina	 com	 lugol	
diluído	 (1/20)	 e	 deixe	 agir	 por	
aproximadamente	1	minuto.	
Escorra	o	lugol	e	lave	em	um	filete	de	água	
corrente.	
Adicione	 álcool	 etílico	 (99,5º	 GL)	 sobre	 a	
lâmina;	 descorando-a,	 até	 que	 não	
desprenda	mais	corante.	
Lave	em	um	filete	de	água	corrente.	
Cubra	 a	 lâmina	 com	 safranina	 e	 deixe	 agir	
por	aproximadamente	30	segundos	
Lave	em	um	 filete	de	água	corrente.	Deixe	
secar	ao	ar	livre,	ou	seque	suavemente	com	
o	auxílio	de	um	papel	de	filtro	limpo.	
Visualize	no	microscópio.	Logo	após	leia	em	
objetiva	de	imersão	(100	X).	
Ana	Luiza	Azevedo	de	Paula	–	Odontologia