Exercício sobre Cromatografia de Camada Delgada

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAÍBA 
 CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE 
 DEPARTAMENTO DE FARMÁCIA 
COMPONENTE CURRICULAR: Fitoquímica – 
 
ALUNO: Daiana Mendes Felix 
 
Avaliação da I unidade 
 
1 - A cromatografia em camada delgada (CCD) é uma técnica simples, barata e muito importante 
para a separação rápida e análise qualitativa de pequenas quantidades de material. Ela é usada 
para determinar a pureza do composto, identificar componentes de uma mistura, comparando-os 
com padrões, e também para acompanhar o percurso de uma reação. 
Conhecendo essa técnica, um estudante de Farmácia acompanhou o curso de sua reação aplicando 
uma alíquota da mistura reacional em uma cromatoplaca de sílica sem indicador de fluorescência. 
Após eluição com hexano:éter etílico e revelação sob luz ultravioleta (254 nm), a cromatoplaca 
apresentou o seguinte aspecto: (1,5) 
 
Após observar a cromatoplaca, o estudante chegou a várias conclusões, que estão apresentadas 
nas alternativas a seguir. Qual delas está INCORRETA? Justifique. 
a) O componente A é mais polar que o componente B. 
b) O componente B apresenta Rf (“índice de retenção”) maior que o componente A. 
c) Com o aumento da polaridade do eluente, ocorre uma diminuição nos Rfs. 
Justificativa: No caso em questão que se trata de uma CCD de fase normal, a fase 
estacionária é polar e a fase móvel é apolar. Com isso pode-se dizer que quanto mais alta a 
substância estiver na placa, mais apolar ela é. Isso partindo do príncipio que o fator de 
retenção (Rf) é definido como a razão entre a distância percorrida pela mancha do 
componente e a distância percorrida pelo eluente, a substância mais apolar, apresentará 
maior afinidade com a polaridade dos solventes. 
d) Outras manchas poderiam ter aparecido na cromatoplaca, se esta tivesse sido exposta a outros 
reveladores, como, por exemplo, em vapores de Iodo. 
 
 
2- O estudo bioprospectivo da resina de uma espécie da família Asteraceae levou ao isolamento 
e a identificação de três diterpenos. (2,0) 
 
a) Qual destes compostos têm o maior Rf em valor numérico? Explique 
 
 
É necessário frisar que a substância mais apolar, apresentará maior afinidade com a 
polaridade dos solventes, sendo assim, ficará retida por mais tempo, apresentando maior 
fator de retenção. A substância menos apolar ascenderá mais rapidamente. Neste caso, a 
ordem dos respectivos compostos se dá dessa forma: 
1. Primeiro composto: Fator de retenção consideravelmente maior, tendo em vista que 
sua polaridade é alta, se sobressaindo pelas demais. Visualizando esse composto na 
imagem seria a última mancha. 
2. Segundo composto: A polaridade deste composto é menor, porém, ainda 
considerável, o aparentemente apresenta dois grupamentos. Visualizando esse 
composto na imagem, o mesmo provavelmente apresenta mais de uma mancha, ou 
seja, de acordo com a imagem, a primeira mancha na ordem. 
3. Terceiro composto: A polaridade não se distingue tanto dos outros, o qual apresenta 
certa similaridade aos dois que apresentaram Rf mais próximos. Visualizando esse 
composto na imagem seria a segunda mancha. 
Dessa forma, pode-se concluir que esses compostos não estão absolutamente puros. A 
primeira mancha foi observada por ter mais de um componente na mistura, e a segunda e 
a terceira uma melhor pureza. 
 
 
 
3 - Durante a caracterização de compostos fenólicos presentes no pó da erva mate, um pesquisador 
obteve um cromatograma com sete compostos identificados (Tabela 2). O mesmo realizou as 
análises com Alíquotas (10 μL/amostra), as quais foram injetadas em cromatógrafo líquido 
(Shimadzu LC- 10), equipado com coluna de fase reversa (Shim-pack C18, 4,6 mm x 250 mm, 
5μm), termo-estabilizada a 40°C, detector UV-visível (Shimadzu SPD 10A, λ = 280 nm) e sistema 
com processador de dados. Como fase móvel, uma solução de água:ácido acético:η-butanol 
(350:1:10, v/v/v) foi utilizada com fluxo de 0,8 mL/min (VIEIRA et al., 2009). Diante da análise 
do método utilizado e correlacionando com os dados da tabela 2, indique quais os compostos com 
maior e menor polaridade (de acordo com o tempo de retenção)? E justifique o uso da coluna de 
fase reversa para tal análise (1,5). 
 
 
 
De acordo com a figura abaixo correlacione cada mancha com 
a devida estrutura. Estes compostos estão totalmente puros? 
Justifique 
 
Resposta: Em caso do uso de coluna em fase reversa quando correlacionado e se diz 
respeito a polaridade, tendo em vista que sua fase estacionária é apolar e a fase móvel 
é polar, proporcionando, e assim, facilitando o arraste das substâncias analisadas. 
Como se trata de diversos ácidos, eles são polares, caso fosse usado uma coluna de fase 
normal, os ácidos não seriam arrastados pela fase móvel, e ficariam retidos na fase 
estacionária. A ordem do mais polar para o menos polar é: Ácido gálico → Ácido 
clorogênico → Ácido p-cumárico → Ácido siringico → Ácido caféico (3,4 
dihidroxiciâmico, ácido ferúlico e ácido 4,5 dicafeoilquinico. 
 
 
4 - Sobre a cromatografia gasosa, marque a opção verdadeira. Justifique as alternativas 
incorretas. (2,0) 
( V ) A cromatografia gasosa é utilizada na separação de substâncias volatilizáveis, uma vez que 
se usam temperaturas convenientes no local de injeção da amostra e na coluna, possibilitando a 
vaporização dessas substâncias 
( F ) A fase estacionária na cromatografia gasosa é um gás. E os gases mais usados são: nitrogênio, 
hélio, hidrogênio e argônio 
Justificativa: Na cromatografia gasosa a fase estacionária pode ser tanto sólida, líquida ou 
quiral. Sendo a fase móvel um gás de arraste 
( F ) Não são utilizados gases inertes como gás de arraste, pois existe interação entre a fase móvel 
e o analito 
Justificativa: A fase móvel é caracterizada por ser um gás inerte para que ele não ocorra 
reação com a amostra, nem com a fase estacionária ou superfícies do instrumento. 
( F ) Uma das desvantagens da cromatografia gasosa é que ela é menos sensível do que outras 
técnicas cromatográficas, como a cromatografia líquida de alta eficiência, por utilizar como “fase 
móvel” um gás. 
Justificativa: A desvantagem está relacionada no fato de requerer um preparo da amostra 
mais dificultado. 
( F ) Conforme aumenta a temperatura no local de injeção da amostra e da coluna, ocorre a 
vaporização das substâncias que, de acordo com suas propriedades e as da fase estacionária, são 
retidas por tempos determinados e chegam à saída da coluna em tempos iguais. 
Justificativa: No momento da saída da coluna as substâncias saem em em momentos de 
tempos diferenciados. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
5 - Um composto de fórmula molecular C4H8O apresentou o seguinte espectro quando analisado 
por espectrometria na região do infravermelho. (1,5) 
 
 
 
 
Quais grupos funcionais você consegue identificar? Qual a estrutura consistente com estes dados? 
Descreva as bandas. 
 
 
➔ -2965 cm-1: Observou-se uma banda de estiramento sugestiva de ligação C-H de 
carbono sp3; 
➔ 2879 cm-1: Observou-se uma banda de média intensidade sugestiva de ligação C-H 
de grupo funcional aldeído; 
➔ 2821 e 2721 cm: Visualizou-se bandas de estiramento características de ligação C-H 
de carbono sp2; 
➔ 1727 cm-1: Visualizou-se uma banda intensa característica de ligação C=O de grupo 
funcional aldeído; 
➔ 1461 cm-1: Observou-se uma banda de deformação característica de grupamento 
metilênico CH2. 
 
 
6 – A acetona e o 2-propeno-1-ol são isômeros. Como você poderia distingui-los por 
espectroscopia de IV? Desenhe as estruturas e justifique (1,5). 
 
 
➔ 2-propeno-1-ol - CH2 = CH2 - CH2 - OH 
➔ Acetona - CH3 - (C = O) - CH3 
 
 
No caso da acetona, não é possível visualizar a banda da ligação de O-H(larga) em 
aproximadamente 3.000 a 3.400 cm-1. Além disso, tambémnão é visualizado o pico da 
ligação C-O em 1.300 e 1.000 cm-1. Dessa forma, para a acetona só é possível observar a 
banda de absorção intensa na região entre 1.630 e 1.850 cm-1 (Carbonila). 
Já para seu isômero, o 2-propeno-1-ol, vai ser possível observar a banda de ligação O-H 
(larga), em aproximadamente 3.000 a 3.400 cm-1. Também é possível visualizar uma ligação 
do tipo C - O entre 1.300 e 1.000 cm-1. E por fim, não estará presente a banda da carbonila, 
que não faz parte de sua forma molecular.