P05- ELETROFORESE DE PROTEINAS EM GEL DE POLIACRILAMIDA - SDS (SDS-PAGE)

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Protocolos – Sandro R. Valentini 
ELETROFORESE DE PROTEÍNAS EM GEL DE 
POLIACRILAMIDA - SDS (SDS-PAGE) 
- Misturar as amostras protéicas com tampão de amostra q.s.p. 1X (loading buffer-
2X). Ferver as amostras 96oC por 5 minutos. 
- Montar as placas – Mini protean III- Bio Rad. 
- Preparar o gel de resolução (tabela 18.3 – Maniatis). 
- Aplicar o gel de resolução no aparato até o nível desejado (no mínimo 0,5 cm 
abaixo do pente). Aplicar água Milli-Q para nivelar o gel. 
- Após polimerização, retirar a água e secar com papel de filtro. 
- Aplicar o gel de empacotamento (tabela 18.4 – Maniatis) e inserir o pente. 
- Montar o aparato de eletroforese contendo o tampão de corrida. 
- Realizar eletroforese (100 V a 200 V). 
- A seguir, o gel pode ser submetido ao ensaio de western blot ou corado com 
coomassie blue por 30 minutos a temperatura ambiente seguido de tratamento 
com o descorante. 
- Após coloração por coomassie blue, acondicionar o gel no "bastidor" entre duas 
folhas de papel celofane umidecidas em água. Manter a temperatura ambiente 
até secagem do gel. 
 
SOLUÇÕES: 
 
• Tampão de Amostra 2X (Loading buffer-2X) 
Tris/HCl pH 6,8 100mM 
SDS 4,0% 
Azul de bromofenol 0,2% 
Glicerol 20,0% 
Antes do uso, adicionar dithiotreitol q.s.p. 200mM (estoque: 1 M armazenado a –20 oC) 
 
• Tampão de corrida 10X 
Tris 250mM 
glicina pH 8,3 2,5M 
SDS 1% 
 
• Corante coomassie blue (1L) • Descorante (1L) 
Coomassie blue 2,5g Metanol 450mL 
Metanol 450mL Ácido acético glacial 100mL 
Ácido acético glacial 100mL Água Milli-Q 450mL 
Água Milli-Q 450mL 
 
Protocolos – Sandro R. Valentini