Exercício - Espectrofotometria pH ácido-sal

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Larissa de Oliveira Augusto 
DRE 118032923 
Bioquímica – QAT 2022.1 
Espectrofotometria 
 
1) 2,0 mL de uma solução de azul de bromofenol - ABF (sol.A) foram diluídos a 5,0 
mL com água destilada. Ao se determinar a Absorvância desta solução diluída (sol.B) 
em 580 nm encontrou-se um valor de 0,4. Qual a concentração da solução A em 
mg/mL? Fator de conversão ABF = 0,1 mg/mL ([ABF] = fator X Abs X diluição) 
 
 
2) Como se determina o fator de conversão do ABF? Qual branco seria usado para esta 
determinação? Por que se determina a concentração de ABF em 580nm? 
O fator de conversão é determinado por uma relação matemática entre as absorbâncias e 
concentrações de uma solução desconhecida e padrão (concentração conhecida). Para 
isso, primeiro é necessário fazer uma varredura da solução padrão de ABF para verificar 
em qual comprimento de onda houve maior absorbância. Visto esse comprimento de 
onda, é preciso fazer uma curva padrão com diferentes concentrações de ABF e 
relacionar com a absorbância. 
 
A Lei de Lambert-Beer relaciona absorbância e concentração como grandezas diretamente 
proporcionais, a partir da equação: 
 
Sendo Ɛxl constantes, tem-se que 
𝐴𝑑
𝐶𝑑
=
𝐴𝑝
𝐶𝑝
 
Tem-se que a razão Ap/Cp é uma razão conhecida retirada da curva padrão. Esse é o 
fator de conversão. Assim, a partir da absorbância de uma concentração desconhecida 
de solução, por espectrofotometria, é possível saber qual a solução da amostra apenas 
multiplicando pelo fator de conversão. 
O branco é toda solução de referência cujas absorbâncias podem ser descontadas da 
absorbância de interesse, por isso, o branco deve contar toda e qualquer espécie química 
que não seja a espécie de interesse. Isso se faz necessário porque a absorbância é 
aditiva. Assim, um branco que pode ser utilizado para a determinação da curva padrão 
de ABF é água destilada, visto que a medida iria descontar a absorbância da água, já que 
vamos medir a solução de ABF. 
Determina-se a concentração de ABF em 580 nm pois este é o comprimento de onda em 
que se observou uma absorbância máxima do ABF. Isso é observado durante a etapa de 
varredura, que consiste na etapa em que se testa vários comprimentos de onda com o 
objetivo de verificar em qual deles há a maior absorbância. Consequentemente, é nesse 
comprimento que a leitura será realizada de forma mais eficiente.