Aula prática Microbiologia dos alimentos

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AULA PRÁTICA 
MICROBIOLOGIA DOS ALIMENTOS 
Ariele Mercês André Gomes 
TEMA DE AULA: VIDRARIA E EQUIPAMENTOS 
UTILIZADOS NO LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 
 
 
TEMA DE AULA: VIDRARIA E EQUIPAMENTOS 
UTILIZADOS NO LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 
• 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. 
• 2. Materiais utilizados. 
• 3. Conclusão sobre o conhecimento e uso das vidrarias 
utilizadas para o preparo de meios de cultura. 
 
PREPARAÇÃO DE MEIO DE CULTURA E 
PLAQUEAMENTO EM LABORATORIO DE 
MICROBIOLOGIA DOS ALIMENTOS 
 Preparo de meios de cultura. 
 Esterilização de meio de cultura. 
 Semeadura em placas 
Pesar o PCA 
O Agar PCA (Plate Count Agar) é um 
meio utilizado para contagem 
bacteriana em produtos alimentícios, 
água e outras amostras de importância 
sanitária. 
Colocar o meio de cultura num 
frasco ou Erlemeyer 500 ml e 
esterilizar na autoclave, a 121°C (1 
atm), durante 15 minutos; 
Após esterilização, deixar arrefecer o meio até 
cerca de 50-55°C e deitar, em condições de 
assepsia, cerca de 15 ml em cada uma das 
caixas de Petri previamente esterilizadas. 
 
 Deixar solidificar e virar as placas; 
Caso os meios preparados não sejam 
imediatamente utilizados, guardar no frigorífico 
(4°C). 
Importante: Cadeia de assepsia nos trabalhos microbiológicos. 
 
Técnicas de distribuição asséptica, usando pipetas estéreis. 
 
 
 
Preparação do meio de cultura 
 
Em uma balança calibrada, foi pesado o meio de cultura ágar nutriente e 
adicionados em um Erlemnmayer limpo contendo a quantidade correspondente de 
água destilada conforme o fabricante. 
Mexa com o bastão e aguarde até completa dissolução. Foi utilizado o micro-
ondas para facilitar a dissolução do meio de cultura. 
 
O meio de cultura foi tamponado com papel madeira e fita para autoclave e em 
seguida foi submetido ao processo de esterilização em autoclave como 
apresentado no rótulo do fabricante. 
 
Após ser autoclavado, o meio de cultura foi levado para dentro da capela de fluxo 
laminar adicione 20 a 25 mL dos meios em cada placa estéril, sob o fluxo laminar, 
na zona bacteriológica, para preparação de placas de petri. Após solidificação do 
meio de cultura nas placas, as mesmas foram invertidas e etiquetadas para 
posterior uso. (O nome do meio, a data de preparação, nome de quem fez) . 
 Conserve as placas/tubos em temperatura ambiente ou em geladeira em uma 
temperatura de 2 a 10°C. 
OBS. No caso dos meios líquidos distribua-os em tubos e guarde-os em estante 
para tubos. 
PLAQUEAMENTO EM LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DOS 
ALIMENTOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO: 
 
• 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. 
 
• 2. Materiais utilizados. 
 
• 3. Conclusão sobre a esterilização dos materiais, preparo dos meios 
de cultura e semeadura em placas. 
 
PLAQUEAMENTO EM LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 
DOS ALIMENTOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PLAQUEAMENTO EM LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 
DOS ALIMENTOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PLAQUEAMENTO EM LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA 
DOS ALIMENTOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Diluição seriada 
CONTAGEM TOTAL DE MICRO-ORGANISMOS AERÓBIOS 
MESÓFILOS 
Aula prática – Microbiologia 
dos alimentos 
• Pesar 25g ou pipetar 25mL da amostra 
• Se necessário, macerar as amostras sólidas com o auxílio do 
almofariz e pistilo. 
• Transferir para o Becker 
• Adicionar 225 mL de solução salina peptonada 0,1%. 
• Homogeneizar. Essa é a diluição 10-1 . 
• Preparar uma segunda diluição ( 10-2 ) transferindo 
assepticamente 1ml da diluição a 10-1 para um tubo de ensaio 
contendo 9ml de água peptonada. 
• Preparar uma terceira diluição (10 -3 ) transferindo 
assepticamente 1ml da diluição a 10-2 para um tubo de ensaio 
contendo 9ml de água peptonada. 
TEMA DE AULA: CONTAGEM TOTAL DE MICRO-
ORGANISMOS AERÓBIOS MESÓFILOS 
• Inocular 0,3ml de cada diluição na superfície de placas de 
Petri previamente preparadas (15 a 20 ml de PCA). Utilizar 
uma única placa para cada diluição. 
• Espalhar com o auxílio de uma alça de Drigalski até que 
todo excesso de líquido seja absorvido. 
• Fazer da placa de maior para a placa de menor diluição, 
flambando a alça de Drigalski entre uma placa e outra. 
• Aguardar 15 minutos para secarem 
• Incubar a 35°C/48h (derivados de leite a 32°C), placas 
invertida 
TEMA DE AULA: CONTAGEM TOTAL DE MICRO-
ORGANISMOS AERÓBIOS MESÓFILOS 
Aula prática – Microbiologia 
dos alimentos 
TEMA DE AULA: CONTAGEM DE COLIFORMES 
TOTAIS PELO MÉTODO DE NÚMERO MAIS 
PROVÁVEL (NMP): TESTE PRESUNTIVO 
• Pesar 25g ou pipetar 25mL da amostra 
• Se necessário, macerar as amostras sólidas com o auxílio do 
almofariz e pistilo. 
• Transferir para o Becker 
• Adicionar 225 mL de solução salina peptonada 0,1%. 
• Homogeneizar. Essa é a diluição 10-1 . 
• Preparar uma segunda diluição ( 10-2 ) transferindo 
assepticamente 1ml da diluição a 10-1 para um tubo de ensaio 
contendo 9ml de água peptonada. 
• Preparar uma terceira diluição (10 -3 ) transferindo 
assepticamente 1ml da diluição a 10-2 para um tubo de ensaio 
contendo 9ml de água peptonada. 
Inocular 1ml de cada diluição em tubos de ensaio 
previamente preparados com caldo Caldo Lauril Sulfato 
triptose (LST) (10 ml) e tubos de Durhan. 
Utilizar três tubos de ensaio para cada diluição. 
Incubar a 35°C/48h 
Verificar a produção de gás 
TEMA DE AULA: CONTAGEM DE COLIFORMES TOTAIS PELO 
MÉTODO DE NÚMERO MAIS PROVÁVEL (NMP): TESTE 
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