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Curso de Biomedicina Histologia Humana Prof. Huander Felipe Andreolla, MSc. huander.unifra@gmail.com Aula 1 Introdução ao estudo da histologia Conteúdo Programático Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Preparação dos tecidos Microscopia Introdução ao estudo das células: Citoplasma Introdução ao estudo das células: Núcleo Conteúdo Programático Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Preparação dos tecidos Microscopia Introdução ao estudo das células: Citoplasma Introdução ao estudo das células: Núcleo O que é histologia? Ramo da anatomia que estuda os tecidos dos animais e das plantas (GARTNER & HIATT, 2003) Sinônimo de anatomia microscópica Células Órgãos Sistemas É o estudo das células e dos tecidos do corpo e de como essas estruturas se organizam para constituir os órgãos (JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2013) Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia óptica Microscopia eletrônica Microscopia confocal Microscopia de contraste de fase Microscopia óptica convencional Microscopia de fluorescência Microscopia eletrônica de transmissão Microscopia eletrônica de varredura Microscopia Óptica Microscopia óptica Convencional Princípio: Transluminação Componente óptico formado por três sistemas de lentes: Condensador Objetivas Oculares Poder de resolução: 0,2mm Possibilita um aumento de 1000 a 1500x a escala real Não distingue objetos menores ou mais delgados do que 0,2mm Uso em larga escala na rotina de diagnóstico laboratorial, requer emprego de colorações específicas Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia óptica Convencional Microscopia Óptica Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia óptica Convencional Microscopia Óptica Microscopia de Contraste de fase e de contraste diferencial de interferência (microscopia de Nomarski) Princípio: Transluminação Possibilita a visualização de células ou secções de tecidos não corados Imagens visualizadas em preto e branco Uso mais comum em rotinas de pesquisa Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia Óptica Microscopia Confocal Princípio: Transluminação Evita superposição entre os planos que aparecem em foco simultaneamente Fundamentos: Iluminação provida por uma fonte de laser Imagem coletada deve passar por um orifício muito pequeno Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Componente de interesse deve ser marcada com molécula fluorescente Requer uma amplificação eletrônica da detecção e visualização em monitor Microscopia Óptica Microscopia de Fluorescência Princípio: Transluminação Secções são iluminadas por uma fonte de luz de mercúrio Fundamentos: Os componentes são visualizados uma vez que seja selecionado um determinado comprimento de onda As substâncias fluorescentes são observadas como objetos brilhantes e coloridos Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia Eletrônica Microscopia Eletrônica de transmissão Princípio: Interação entre elétrons e componentes dos tecidos Altíssima resolução: 0,1 nm (usualmente 3 nm) Poder de aumento em 400 .000x a escala original. Ocorre o fluxo unidirecional de elétrons Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia Eletrônica Microscopia Eletrônica de transmissão Fundamentos: Ao atravessar o corte alguns elétrons interagem com os átomos do espécime e continuam seus trajetos em direção às outras lentes enquanto que outros elétrons simplesmente cruzam o corte histológico sem interagir com ele Cátodo: filamento de tungstênio Ânodo: placa redonda de metal com um furo no meio Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia Eletrônica Microscopia Eletrônica de varredura Princípio: Interação entre elétrons e componentes dos tecidos Fornece imagens pseudotridimensionais das células, tecidos e órgãos Os elétros não atravessam o espécime Fundamento: elétrons varrem uma delgada camada de metal previamente aplicada ao espécime e são refletidos pelos átomos do metal Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia óptica Microscopia eletrônica Microscopia confocal Microscopia de contraste de fase Microscopia óptica convencional Microscopia de fluorescência Microscopia eletrônica de transmissão Microscopia eletrônica de varredura Microscopia Óptica Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Microscopia óptica Convencional Preparo de espécimes para o exame microscópico Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Fixação: Processo químico que tem por objetivo evitar a autólise, endurecer os fragmentos e preservar a composição molecular dos tecidos Substâncias empregadas: Formalina 10%, Formaldeído 4% ou Glutaraldeído. Desidratação e Clareamento: Banhos em soluções com concentração crescente de etanol Inclusão ou embebição em parafina: Processo realizado para se obter finas camadas do tecido Substâncias empregadas: Formalina 10%, Formaldeído 4% ou Glutaraldeído. Preparo de espécimes para o exame microscópico Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Micrótomo utilizado para realizar os cortes histológicos Preparo de espécimes para o exame microscópico Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Coloração: Tem como objetivo tornar evidentes os vários componentes dos tecidos, das células e da matriz extracelular Basófilos: componentes teciduais de caráter ácido corados por corantes básicos. Na coloração H&E, por exemplo, o núcleo (o qual é constituído por ácidos nucleicos) tem alta afinidade por hematoxilina. Ex: Hematoxilina, azul de toluidina e azul de metileno. Acidófilos: componentes teciduais de caráter básico são corados por corantes ácidos. Na coloração H&E, por exemplo, citoplasma e fibras de colágeno são corados por eosina Ex: Eosina, orange G, fucsina Preparo de espécimes para o exame microscópico Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Preparo de espécimes para o exame microscópico Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia https://www.youtube.com/watch?v=PafHxS5bq9A Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Bibliografia recomendada Introdução à histologia e técnicas básicas de histologia Introdução ao estudo das células: Citoplasma
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