ESTUDO DA CINÉTICA ENZIMÁTICA DA CATALASE

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ESTUDO DA CINÉTICA ENZIMÁTICA DA CATALASE 
 
1. EFEITO DO pH 
 
1.1. Reagentes 
H2O2 4% Extrato vegetal Solução de ovoalbumina Soluções tampão pHs 
4,5; pH 6,0; pH 7,0; pH 8,0; pH 10,0 Solução de H2SO4 1N Solução de NaOH 1N 
 
1.2. Técnica 
 
a) Preparar uma bateria de 7 tubos de ensaio 
b) Tomar o tubo no 1; adicionar 2,0 ml de água destilada; 2 gotas de ácido sulfúrico; 3,0 ml 
de extrato de alface e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, 
cuidadosamente, 1,0 ml de água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, 
tampando o tubo com parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
c) Tomar o tubo no 2; adicionar 2,0 ml da solução tampão pH 4,5; 3,0 ml de extrato de alface 
e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, cuidadosamente, 1,0 ml de 
água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com 
parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
d) Tomar o tubo no 3; adicionar 2,0 ml da solução tampão pH 6,0; 3,0 ml de extrato de alface 
e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, cuidadosamente, 1,0 ml de 
água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com 
parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
e) Tomar o tubo no 4; adicionar 2,0 ml da solução tampão pH 7,0; 3,0 ml de extrato de alface 
e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, cuidadosamente, 1,0 ml de 
água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com 
parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
f) Tomar o tubo no 5; adicionar 2,0 ml da solução tampão pH 8,0; 3,0 ml de extrato de alface 
e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, cuidadosamente, 1,0 ml de 
água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com 
parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
g) Tomar o tubo no 6; adicionar 2,0 ml da solução tampão pH 10,0; 3,0 ml de extrato de 
alface e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, cuidadosamente, 
1,0 ml de água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com 
parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
h) Tomar o tubo no 7; adicionar 2,0 ml de água destilada; 2 gotas de hidróxido de sódio; 3,0 
ml de extrato de alface e 6 gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Adicionar, 
cuidadosamente, 1,0 ml de água oxigenada. Homogeneizar por uma única inversão, 
tampando o tubo com parafilme. Esperar 10 minutos. Anotar o resultado na tabela. 
i) Construir o gráfico, analisando os resultados. 
 
Tubo Água 
destilada 
(ml) 
Tampão 
(2 ml) 
Ácido 
sulfúrico 
(gotas) 
NaOH 
(gotas) 
Extrato 
(ml) 
Sol. 
Albumin
a 
H2O2 
(ml) 
Resultado 
(mm de 
espuma) 
1 2,0 - 2 - 3,0 6 1,0 
2 - 4,5 - - 3,0 6 1,0 
3 - 6,0 - - 3,0 6 1,0 
4 - 7,0 - - 3,0 6 1,0 
5 - 8,0 - - 3,0 6 1,0 
6 - 10,0 - - 3,0 6 1,0 
7 2,0 - - 2 3,0 6 1,0 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2. EFEITO DA TEMPERATURA 
2.1. Reagentes 
H2O2 4% Água sangüínea Solução de ovoalbumina 
 
2.2. Equipamentos 
Banho-maria Termômetro 
 
2.3. Técnica 
 
a) Preparar uma bateria com 5 tubos de ensaio. 
 
b) Tomar o tubo no 1; adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 
gotas de solução de ovoalbumina. Homogeneizar. Incubar a 0oC, por 5 minutos. Tomar outro 
tubo e adicionar cuidadosamente, 3,0 mL de água sangüínea. Incubar a 0oC, por 5 minutos. 
Adicionar a água sangüínea a 0ºC ao tubo nº1 mantendo-o na temperatura indicada. 
Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 5 minutos com 
a solução incubada na temperatura indicada. Anotar o resultado na tabela para discussão e 
avaliação posterior. 
 
c) Tomar o tubo no 2; adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 
gotas de solução de ovoalbumina. Homogeneizar. Incubar a 30o C (ou em temperatura 
ambiente), por 5 minutos. Tomar outro tubo e adicionar cuidadosamente, 3,0 mL de água 
sangüínea. Incubar a 30oC, por 5 minutos. Adicionar a água sangüínea a 30ºC ao tubo nº2 
mantendo-o na temperatura indicada. Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo 
com parafilme. Esperar 5 minutos com a solução incubada na temperatura indicada. Anotar o 
resultado na tabela para discussão e avaliação posterior. 
 
d) Tomar o tubo no 3; adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 
gotas de solução de ovoalbumina. Homogeneizar. Incubar a 45o C, por 5 minutos. Tomar outro 
tubo e adicionar cuidadosamente, 3,0 mL de água sangüínea. Incubar a 45oC, por 5 minutos. 
Adicionar a água sangüínea a 45ºC ao tubo nº3 mantendo-o na temperatura indicada. 
Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 5 minutos com 
a solução incubada na temperatura indicada. Anotar o resultado na tabela para discussão e 
avaliação posterior. 
 
e) Tomar o tubo no 4; adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 
gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Incubar a 60o C, por 5 minutos. Tomar outro tubo 
e adicionar cuidadosamente, 3,0 mL de água sangüínea. Incubar a 60oC, por 5 minutos. 
Adicionar a água sangüínea a 60ºC ao tubo nº4 mantendo-o na temperatura indicada. 
Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 5 minutos com 
a solução incubada na temperatura indicada. Anotar o resultado na tabela para discussão e 
avaliação posterior. 
 
f) Tomar o tubo no 5; adicionar 1,0 mL de água oxigenada; 2,0 mL de água destilada; 6 
gotas de solução de albumina. Homogeneizar. Incubar a 100o C, por 5 minutos. Tomar outro tubo 
e adicionar cuidadosamente, 3,0 mL de água sangüínea. Incubar a 100oC, por 5 minutos. 
Adicionar a água sangüínea a 100ºC ao tubo nº5 mantendo-o na temperatura indicada. 
Homogeneizar por uma única inversão, tampando o tubo com parafilme. Esperar 5 minutos com 
a solução incubada na temperatura indicada. Anotar o resultado na tabela para discussão e 
avaliação posterior. 
 
g) Construir o gráfico, analisando os resultados. 
 
Tubo H2O2 mL H2O 
destilada 
mL 
Solução 
albumina 
gotas 
Temperatura 
oC 
Água 
sangüínea 
mL 
Resultado 
de 
espuma mm 
1 1,0 2,0 6 0 3,0 
2 1,0 2,0 6 30 3,0 
3 1,0 2,0 6 45 3,0 
4 1,0 2,0 6 60 3,0 
5 1,0 2,0 6 100 3,0 
EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DO SUBSTRATO 
 
3.1. REAGENTES 
a) solução de H2O2 a 4% b) água sangüínea c) solução de ovoalbumina 
 
3.2. TÉCNICA 
a) distribuir os reagentes como indicado na tabela abaixo, respeitando a ordem dos 
mesmos (da esquerda para a direita). 
b) Após a distribuição , homogeneizar os reagentes por uma única inversão, tampando os 
tubos. Esperar 10 minutos e anotar o resultado (em mm de espuma formada a partir da superfície 
do líquido). Anotar o resultado na tabela. 
 
Tubo H2O2 
mL 
H2O destilada mL Solução albumina 
(gotas) 
Água 
sangüínea mL 
Resultado 
mm 
1 - 2,0 6 5,0 
2 0,4 1,6 6 5,0 
3 0,8 1,2 6 5,0 
4 1,2 0,8 6 5,0 
5 1,6 0,4 6 5,0 
6 2,0 - 6 5,0