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Eletroforese dos ácidos nucleicos em gel de agarose

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NUTRIÇÃO, UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA 
@larirodrigues.b 
1 
 
Eletroforese dos ácidos nucleicos em gel 
de agarose 
Uma das técnicas mais fundamentais em 
laboratórios de pesquisa e diagnóstico. 
Princípio da técnica é baseada na Lei de 
Coulomb de atração e repulsão das cargas 
elétricas. 
Em pH neutro/ alcalino, o fosfatos do DNA e 
RNA, ficam desprotonados e portanto, 
negativos. 
Quando submerso em uma matriz porosa de 
gel em que é submetido a um campo elétrico de 
pólos opostos onde as moléculas migram em 
direção ao pólo positivo (ânodo). 
A separação das moléculas é realizada pelo 
tamanho que elas apresentam. 
 
 Matriz: Agarose e Poliacrilamida 
 AGAROSE: polímero sintético não 
tóxico. Permite a separação de 
moléculas de tamanhos variáveis – 
0,2Kb a 50Kb (1Kb = 1000 pb – par de 
bases); 
 POLIACRILAMIDA: polímero sintético de 
componentes tóxicos. Permite a 
separação de moléculas menores que 
1Kb. 
Existe uma porcentagem proporcional da 
quantidade de polímeros na hora do preparo 
que vai determinar o tamanho dos poros. 
 
 Gel de agarose 
Não é tóxico; 
Rápida polimerização; 
Pode ser reutilizado algumas vezes; 
Método analítico ou preparativo 
(purificação de DNA); 
Utiliza o Brometo de Etídio como corante 
que é mutagênico; 
Precisa ser revelado em câmera de luz UV. 
Preparar gel de agarose 0,8%; 
Conhecer os fatores que afetam a 
eletroforese em gel de agarose; 
Analisar o padrão de bandeamento em 
função dos ácidos nucléicos presentes na 
amostra. 
 Preparo do gel de agarose 
1. Pese 0.4 g de agarose em um 
erlenmeyer de 125 mL; 
2. Adicione 50 ml de tampão TBE 1X. 
Misture; 
 
Introdução 
sol state Initial gel final gel structure 
≈ 45°C 
≈ 100°C ≈ 100°C 
ageing 
pore 
double helix 
Objetivos 
Material 
Procedimentos 
NUTRIÇÃO, UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA 
@larirodrigues.b 
2 
 
 
3. Aqueça em microondas até que a 
agarose se dissolva por completo; 
4. Deixe a preparação esfriar até 45°C. Em 
seguida, verta em bandeja de acrílico 
contendo o pente desejado. OBS: Para 
a correta formação das canaletas, o 
pente não pode tocar o fundo da 
bandeja; 
5. Esperar por aproximados 20 a 30 
minutos até que o gel solidifique. Retire 
o pente com cuidado para não danificar 
as canaletas. 
 
 Aplicação da amostra de DNA 
1. Coloque 3μL de cada amostra de DNA 
em microtubos limpos separados (DNA 
genômico de salmão e DNA do Vírus 
Lambda); 
2. Adicione 3μL tampão de carregamento 
da amostra (TA) – tem uma coloração 
que permite a visualização da corrida no 
gel de agarose; 
3. Adicione 4μL água deionizada a cada 
tubo. Misture com auxílio da ponteira; 
4. Aplique as amostras nas canaletas, de 
tal forma que cada canaleta receba uma 
amostra de DNA; 
5. Cubra o gel com TBE 1 X (permite que a 
corrente elétrica passe e a corrida 
aconteça) até que ele esteja totalmente 
submerso; 
6. Tampe a cuba de eletroforese. Ajuste a 
fonte para a voltagem desejada (80V). 
 
 Coloração da amostra com 
brometo de etídeo 
1. Desligue a fonte após a corrida. O azul 
de bromofenol presente no tampão de 
carregamento deve estar a 2 cm da 
extremidade do gel de agarose; 
2. Retire o gel de agarose e coloque-o 
em uma bandeja de plástico; 
3. Adicione 20μl de brometo de etídeo. 
Tampe a bandeja. OBS: Use luvas ao 
manusear o brometo, pois ele é 
mutagênico; 
4. Agite por 20 minutos. Retire o gel com 
cuidado e coloque-o sobre o 
transiluminador. Abaixe a proteção de 
acrílico e somente depois ligue a luz 
UV; 
5. Analise os resultados. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Tampão 
concentrado 
Água 
destilada 
Cuidado! 
O frasco estará quente. 
Despejar 
ESPERAR 
Aula Prática 
NUTRIÇÃO, UNIVERSIDADE FEDERAL DE VIÇOSA 
@larirodrigues.b 
3

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