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Introdução à Biologia Celular e do Desenvolvimento Aula Prática 01 Prof. Dra. Ana Paula Scaramal Ricietto Conhecer e manipular o microscópio óptico. Reconhecer e identificar as diferenças estruturais entre células procariontes e eucariontes. Observar a organização hierárquica das células eucariontes quanto a formação de tecidos e órgãos. Microscopia óptica Base Charriot Mesa ou platina Parafuso micrométrico Parafuso macrométrico Fonte de luz Condensador com diafragma Revólver Tubo ou canhão Braço Oculares Objetivas Fonte: PublicDomainPictures / Pixabay. Disponível em https://pixabay.com/pt/photos/branco-qu%C3%ADmica-isolado-microscopia-219983/. Acesso em 16 jul. 2020. Microscópio óptico Cálculo da ampliação total (Microscopia óptica) Ocular Objetiva Aumento Total 10x 4x 40x 10x 10x 100x 10x 40x 400x 10x 100x 1000x Fonte: Autora, 2021. Fonte: Wikimedia Commons / CNX OpenStax. Disponível em https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=49923763. Acesso em 21 mai 2021. Coloração HE Corantes ácidos: interagem com estruturas básicas das células, geralmente do citoplasma, corando-as. • Eosina (coloração rósea) • Fucsina (coloração vermelha) Corantes básicos: coram estruturas ácidas (núcleo) • Hematoxilina (coloração azul) Microscopia Recortar uma pequena letra de jornal; Colocar uma gota de água sobre a lâmina, com auxílio de um conta-gotas ou pipeta; Colocar a letra de jornal (na posição de leitura) sobre a gota de água; Colocar a lamínula na posição de 45º em relação à lâmina, abaixando-a suavemente; Caso haja excesso de líquido (fora da lamínula), retirá-lo com papel absorvente; Seguir as etapas de focalização indicadas pelo professor; Desenhar nos aumentos de 40x, 100x, 400x e 1000x. Esquematizar após a observação. Ampliada Invertida da esquerda para direita Invertida de cima para baixo Fonte: Leite, C. M. Adaptada; JUNQUEIRA, LUIZ CARLOS UCHOA; CARNEIRO, JOSÉ. Biologia celular e molecular. 9. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2012. Formação de imagem microscopia óptica Eucariontes: animal Fonte: Adaptado de Madigan et al. Brock biology of microoganisms. 13 ed. Pearson, 2012. Eucariontes Eucarionte animal: mucosa bucal Raspar levemente, com o auxílio da espátula, a mucosa bucal. Espalhar o material da espátula na lâmina. Adicionar uma gota do corante sobre a lâmina e aguardar 2’. Com o auxílio de uma almotolia/piseta, remover o excesso do corante. Cobrir a lâmina com uma lamínula. Retirar as bolhas de ar pressionando a pinça levemente sobre a lamínula. Observar no microscópio, nos aumentos de 10x e 40x focalizando a imagem com o auxílio do micrométrico. Esquematizar as estruturas observadas. Observação comentada Eucariontes: vegetal Fonte: Raven et al. Biologia Vegetal . 8 ed. Guanabara Koogan, 2014. Fonte: Adaptado de Reece et al. Biologia de Campbell. 10 ed. Artmed, 2015. Núcleo RER REL Ribossomos Vacúolo central Microfilamentos Microtúbulos Cloroplastos Plasmodesmos Parede celular Membrana celular Peroxissomos Mitocôndria Golgi Eucarionte vegetal: cebola Com a pinça, retire a epiderme da cebola colocando-a na lâmina sobre uma gota d’água. Cubra-a com a lamínula. Retirar as bolhas de ar pressionando a pinça levemente sobre a lamínula. Observar no microscópio, nos aumentos de 10x e 40x focalizando a imagem com o auxílio do micrométrico. Retire a lâmina da platina para a coloração com azul de metileno. Colocar o papel-filtro ao lado da lamínula. Adicionar uma gota de corante ao lado oposto do papel (o papel absorverá o excesso de água-corante). Observar no microscópio, nos aumentos de 10x e 40x focalizando a imagem com o auxílio do micrométrico. Esquematize as estruturas observadas salientando as diferenças proporcionadas pela coloração. Observação comentada Fonte: Wikimedia Commons. Disponível em https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Onion_Cells.jpg#/media/File:Onion_Cells.jpg. Acesso em 22 mai 2021. Procariontes ProcariontesFímbrias Citoplasma Ribossomos Nucleoide Inclusões Plasmídeo Flagelo Pili Cápsula Parede celular Membrana celular Fonte: Adaptado de Lumen Microbiology. Disponível em https://courses.lumenlearning.com/microbiology/chapter/unique-characteristics-of-prokaryotic-cells/. Acesso em 21 mai 2021. Fonte: Adaptado de Lumen Microbiology. Disponível em https://courses.lumenlearning.com/microbiology/chapter/unique-characteristics-of-prokaryotic-cells/. Acesso em 21 mai 2021. Parede celular Fonte: Madigan et al. Microbiologia de Brock. 14 ed. Artmed, 2016. Procarionte Com o auxílio de uma espátula, em uma lâmina com uma gota d’água, adicionar uma pequena porção do iogurte natural. Secar levemente à chama da lamparina. Corar o esfregaço com duas gotas de azul de metileno deixando reagir durante cerca de 3’. Lavar a lâmina com água destilada e deixar secar naturalmente. Observar ao microscópio utilizando a objetiva de menor aumento. Colocar uma gota de óleo de imersão e observar na objetiva de maior aumento (100x). Esquematizar as células observadas. Fonte: Josef Reischig / Wikimedia Commons. Disponível em https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Lactobacillus_acidophilus_(259_08)_Lactobacillus_acidophilus_(D%C3%B6derlein_bacillus).jpg. Acesso em 22 mai 2021. Observação comentada Verificar se todos os alunos conseguiram observar as lâminas especificas; Verificar se os alunos esquematizaram as estruturas; Verificar se os alunos conseguiram identificar as principais características estruturais das células estudadas; Esclarecer as possíveis dúvidas dos alunos quanto as características de cada lâmina observada.
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