Relatório de aula prática métodos instrumentas de análises

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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP
 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS
 
CURSO: Farmácia 
DISCIPLINA: Métodos instrumentais de análises
NOME DO ALUNO: Andrieli Do Nascimento Schmidt
R.A: 0418658
POLO: Itaipulândia - Pr
DATA: 23 / 10 / 2022
 UNIP 2022
INTRODUÇÃO 
 As aulas práticas de métodos instrumentais de análises foram realizadas com o 3ª período do curso de farmácia, nos dias 08 e 22 de outubro de 2022, no laboratório da UNIP CESUFOZ na cidade de FOZ DO IGUAÇU, no período da manhã das 8:30 às 12:00 e a tarde das 13:00 às 17:00. Para iniciar as aulas, vestimos de maneira adequada e individual, calça comprida, calçado fechado, cabelos presos, uso do jaleco, luva e touca, que são as normas de segurança obrigatória em um laboratório. As aulas laboratoriais foram baseadas no roteiro que está disponível no AVA na matéria de métodos instrumentais de análises, contém 7 aulas com instruções sobre cada experimento a ser executado, que foram seguidos passo a passo. 
Nas aulas foram abordados os conceitos básicos referentes a atividades envolvendo a espectrofotometria. A espectrofotometria é um método com a função de medir o quanto uma substância química absorve a luz, medindo sua intensidade quando um feixe de luz passa através da solução da amostra, e os componentes de uma determinada solução pode ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível ou infravermelho. Transmitância é a fração da energia luminosa que consegue atravessar uma determinada espessura do material, sem ser absorvida, é a capacidade de transmitir a luz e a absorbância é a fração da energia luminosa que é absorvida por uma determinada espessura de um material a capacidade de absorver a luz. Mais concentrada for a solução, maior será a absorção de luz e a cor da solução é determinada pela cor da luz transmitida. A concentração de um analito em solução pode ser determinada através da Lei de Beer, mas é necessário conhecer o caminho óptico e a absortividade molar do analito em um determinado comprimento de onda, assim, conhecendo o analito e a concentração de diversas soluções padrões, poderá ser construído uma curva de calibração através de um gráfico entre a Absorbância x Concentração Molar, no qual pode-se ser usada também na determinação da concentração do analito em uma solução problema.
A validação de um método analítico é um processo contínuo que começa no planejamento da estratégia analítica e contínua ao longo de todo o seu desenvolvimento e transferência segundo a ANVISA e deve-se garantir através de estudos experimentais que o método atenda às exigências das aplicações analíticas, assim, garantindo a confiabilidade dos resultados. A seletividade, precisão e exatidão são alguns dos requisitos e atributos exigidos pelo INMETRO para a validação. a validação de um método analítico consiste em fornecer uma evidência documentada por meio de um processo por onde se realizam estudos laboratoriais que comprovam que determinado procedimento é o adequado para a sua finalidade. Precisão é a estimativa da dispersão de resultados entre ensaios independentes, repetidos de uma mesma amostra, em condições estabelecidas é. A exatidão é definida por tendência e representa o grau de concordância entre resultados individuais encontrados e um aceito como referência e segundo a ANVISA, é a proximidade dos resultados obtidos pelo método em estudo em relação ao valor verdadeiro. Seletividade é a capacidade de um método de medir com exatidão um analito em presença de outros componentes.
A cromatografia é uma técnica de separação utilizada para separar fisicamente uma mistura de dois ou mais compostos químicos, ou seja, é um processo de separação baseado nas diferentes afinidades de duas ou mais substâncias com um material estacionário, nesse sistema quando uma mistura de substâncias é passada por um material estacionário, os componentes da mistura serão retardados em diferentes graus pelo material estacionário. As velocidades das substâncias que passam pelo material estacionário serão diferentes por causa desta interação, e assim serão separados. A cromatografia em camada delgada (CCD) é um método de cromatografia do tipo adsorção e a sua fase móvel é o material usado para agilizar a amostra a ser separada sobre a fase estacionária, enquanto que sua fase estacionária pode ser um material sólido na qual as moléculas de diferentes polaridades serão adsorvidas, a distância que cada um corre é uma característica de cada composto, esta propriedade é quase sempre expressada em valor de Rf, e esse valor sempre será entre zero e um.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
AULA 1
Título da aula: Análise em Espectrofotômetro l Determinação do Espectro de Absorção (Varredura). Está aula teve como objetivo efeituar a varredura para o paracetamol em espectrofotômetro UV/Vis e determinar o espectro de absorção do fármaco e definir o comprimento de onda a ser empregado na análise espectrofotométrica. 
Materiais utilizados: espectrofotômetro UV/Vis, pipeta automática, cubeta de quartzo, papel absorvente, solução de paracetamol 7,5mg/L (preparado pela técnica do laboratório), hidróxido de sódio 0,01 M.
Para iniciar o experimento verificamos o espectrofotômetro estava no conforme para correta medição, ajustemos o comprimento de ondas para 200 nm, adicionemos o hidróxido de sódio 0,01 M na cubeta de quartzo por que é ultravioleta e em seguida limpemos a cubeta com um papel absorvente, zeremos o aparelho e coloquemos a solução de paracetamol na cubeta de quartzo, valores de absorbância na tabela a seguir foram obtidos em cada comprimento de onda ajustado no espectrofotômetro referente a solução do paracetamol: 
	 (nm)
	 Absorbância (A)
	 200
	 0,170
	 220
	 0,246
	 240
	 1,301
	 250
	 1,660
	 257
	 1,700
	 260
	 1,400
	 280
	 1,301
	 300
	 0,900
	 400
	 0
	 500
	 0
 Representação em gráfico através dos dados obtidos no espectro de absorção do paracetamol.
Foi executado uma varredura nos comprimentos de onda de 200 a 500 nm da amostra padrão, a figura apresenta o espectro de varredura do padrão de paracetamol e observa-se que a região do pico principal está entre os comprimentos de onda de 240 a 250 nm característico ao paracetamol.
A seguir fotos registradas durante o experimento.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria.
 
AULA 2
Título da aula: Análise em Espectrofotômetro ll Preparação de Solução de Paracetamol e utilização da Equação de Beer-Lambert. Objetivo dessa aula era determinar a concentração do paracetamol utilizando a equação de Beer-Lambert.
Materiais utilizados: espectrofotômetro UV/Vis, pipeta automática, cubeta de quartzo, papel absorvente, papel de manteiga, balança analítica, agitador mecânico, água destilada, paracetamol, béquer, almofariz e pistilo, balão volumétrico, filtro gravitacional, papel de filtro gravimétrico, pipeta volumétrica, proveta, hidróxido de sódio 0,01 M, hidróxido de sódio 0,1 M.
Parte l: para iniciar o experimento obtemos a solução do paracetamol (amostra), dilaceremos dois comprimidos de paracetamol 500 mg, pesamos 0,156g e adicionemos em um béquer e 50 ml de hidróxido de sódio 0,1 M e 100 ml de água destilada(balão1), agitemos por 15 minutos e transferimos para um balão volumétrico completando com água destilada(balão2), misturemose filtremos e diluímos 10 ml do filtrado para 100 ml de agua destilada, transferimos 10 ml da solução para um balão volumétrico e adicionamos 10 ml de hidróxido de sódio 0,1 M e completamos com água destilada(balão3), esta solução que foi considerada a 100% e utilizemos ela também na aula 3 e 4.
Parte ll: nesta parte do experimento adquirimos o valor da absorbância referente a solução do paracetamol, ajustemos o comprimento de ondas do aparelho para 257nm, adicionamos o hidróxido de sódio 0,01M na cubeta de quartzo, limpemos a cubeta com papel absorvente, zeremos o espectrofotômetro, adicionemos a solução de paracetamol(balão3) na cubeta de quartzo no aparelho e repetimos por três vezes valores de absorbância obtidos foram os seguintes:
	Replica
	Absorbância(A)
	1
	0,391
	 2
	0,391
	 3
	0,391
	Média 
	0,391
 Cálculo obtido através da concentração do paracetamol a partir da lei de Beer-Lambert. Dado 13000:
 x b x c
 0,39113000. 1. c
 c
 c mol/L
A seguir fotos registradas durante o procedimento.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria.
AULA 3
Título da aula: Análise em Espectrofotômetro lll Montagem de Curva de Calibração para Análise do Paracetamol (Avaliação da Linearidade do Método). Esta aula teve como objetivo a montagem da curva de calibração para análise do paracetamol por espectrofotometria e avaliação da linearidade do método instrumental.
Materiais utilizados: espectrofotômetro UV/Vis, pipeta graduada, cubeta de quartzo, papel absorvente, micropipeta automática, ponteiras de 1000, pera para pipeta, hidróxido de sódio 0,01 M, água destilada, hidróxido de sódio 0,1 M, béquer, balão volumétrico, solução de paracetamol 7,5 mg/100 ml (preparado pela técnica do laboratório).
Parte I: preparamos o paracetamol nos balões volumétricos, transferimos a solução estoque do paracetamol para um béquer, identifiquemos cinco balões volumétricos como 2,0, 4,0, 6,0, 7,5, 9,0, transferimos 12 ml de solução estoque no balão identificado como 9,0, foi 10 ml da solução no balão identificado com 7,5 e 8,0 ml no identificado como 6,0 e 6,0 ml no identificado como 4,0 e por último 4,0 ml no identificado como 2,0, com o auxílio da pipeta foi pipetado 10 ml de NaOH 0,1M e completado com agua destilada em todos os balões volumétricos e homogeneizando.
Parte II: foi determinado os padrões no espectrofotômetro, ajustamos o comprimento de onda no aparelho de 257nm, adicionamos o branco na cubeta de quartzo e limpemos com papel absorvente, zeremos o aparelho, adicionamos uma a uma das soluções preparadas nas cubetas de quartzo e efeituado a leitura no aparelho, em cada troca da solução foi lavada a cubeta com a própria solução a ser analisada e os valores da absorbância adquiridos foram os seguintes:
	 Concentração (mg/L)
	 Abs.
	 2,0
	 0,164
	 4,0
	 0,271
	 6,0
	 0,379
	 7,5
	 0,476
	 9,0
	 0,590
 
MONTAGEM DA CURVA DE CALIBRAÇÃO E EQUAÇÃO DA RETA 
Utilizamos o Exel para montagem de gráfico.
A seguir fotos registradas durante o procedimento.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria.
AULA 4
Título da aula: Avaliação da Seletividade, Precisão e Exatidão. Esta aula teve como objetivo realizar os ensaios de seletividade, precisão e exatidão para a validação parcial do método instrumental.
Materiais utilizados: espectrofotômetro UV/Vis, pipeta graduada, cubeta de quartzo, papel absorvente, micropipeta automática, ponteiras de 1000, ácido cítrico (preparado pela técnica do laboratório), hidróxido de sódio 0,01 M, água destilada, amostra (solução de paracetamol produzido pelo pelos alunos 7,5mg/L), béquer, balão volumétrico, tubos de ensaio, solução de referência (paracetamol 2,5 mg/L preparado pela técnica do laboratório).
Parte I: ensaio de seletividade, iniciemos identificando dois tubos de ensaio como A e B, no A foi adicionado 4 ml da amostra, e no B foi adicionado 2 ml da amostra mais 2 ml do ácido cítrico, ajustamos o aparelho no comprimento de onda para 257 nm, adicionemos o branco, limpemos a cubeta, zeremos o aparelho e com o auxílio de uma pipeta adicionemos a solução do tubo A na cubeta de quartzo analisemos o valor da absorbância e anotemos, e em seguida lavemos a cubeta com água destilada e fizemos com a solução matriz e sucessivamente com o tubo B, os valores de absorbância obtidos foram os seguintes:
	Tubo
	Absorbância (A)
	A (Amostra)
	A= 0,496
	B (Amostra + Ácido Cítrico)
	AC= 0,213
	Solução Matriz
	0,361
 
Parte II: 1- 80% da concentração da solução do paracetamol, foi transferido 8 ml da solução referência para o balão volumétrico, adicionamos 10 ml de hidróxido de sódio 0,1 M e completamos o volume com água destilada, ajustamos para 257 nm adicionamos o branco no aparelho e zeremos, medimos três vezes e os resultados da absorbância obtidos foram os seguintes: 
	Replicata (80% da concentração)
	Absorbância (A)
	1
	0,075
	2
	0,068
	3
	0,062
	Média 
	0,068
2- Cálculo do teor 120% da solução de paracetamol, for transferido 12 ml da solução de referência para um balão volumétrico e adicionado 10 ml de hidróxido de sódio 0,1 M e completado com água destilada e agitamos, ajustamos o aparelho em 257 nm, adicionamos o branco e zeramos, adicionamos a solução nas cubetas de quartzo e repetimos a leitura por três vezes os resultados obtidos foram os seguintes: 
	Replicata (120% da concentração)
	Absorbância (A)
	1
	0,081
	2
	0,080
	3
	0,083
	Média
	0,081
Parte II: ensaio de exatidão a partir da porcentagem de recuperação, iniciemos identificando dos tubos de ensaio como A e B, no tubo A adicionamos 4 ml da solução da amostra e no tubo B adicionamos 2 ml de da solução de referência e 2 ml de solução de amostra, ajustemos o aparelho no comprimento de ondas de 257 nm, adicionamos o branco na cubeta de quartzo limpemos e zeremos o aparelho, efetuamos a leituro do tubo A e em seguida da amostra e logo em seguida do tudo B, lavando as cubetas de quartzo com agua destilada toda vez que trocava de solução, os resultados obtidos foram os seguintes:
	Tubo
	Absorbância (A)
	A
	A= 0,470
	B
	AP= 0,296
	Média
	0,361
A seguir fotos registradas durante o experimento.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria.
AULA 5
Título da aula: Análise por Cromatografia em Camada Delgada I Análise Cromatográfica de Ácido Acetilsalicílico e Paracetamol. Esta aula teve como objetivo avaliar a separação de princípios ativos de ação analgésica pela técnica da CCD e estudar o emprego de técnicas cromatográficas para separação e analise de substâncias em função de sua estrutura química e do fenômeno de absorção cromatográfica, com as amostras de aspirina, paracetamol e coristina D foram analisados.
Materiais utilizados: cuba cromatográfico, banho de aquecimento, lâmpada UV, 50 ml de solução de extração (25 partes de acetato de etila, 1 parte de etanol e 1 parte de ácido acético), ácido acetilsalicílico e paracetamol (1 comprimido triturado de cada medicamento) 100 mg de cada substância (amostra).
Parte I: preparaçãodas amostras de analgésicos que foi realizado pela técnica do laboratório.
Parte II: análise cromatográfico, a técnica do laboratório deixou preparada a cuba, nos iniciemos cortando a placa de sílica e efeituamos um leve risco com duas marcações indicando o ponto de aplicação e o ponto final da corrida, colocamos 1 gota da amostra de paracetamol e 1 gota de ácido salicílico sobre a linha e adicionamos cuidadosamente a placa de sílico na cuba por aproximadamente 30 minutos, removemos da cuba e aguardemos até a secagem, para que fosse possível a visualização tivemos que usar a lâmpada de UV utilizando óculos e todas as proteções necessárias e nunca virando a luz para si evitando acidentes quanto menos se expor na luz melhor, marcamos com um lápis aonde cada ponto de analgésico parou sobre a placa de sílico, e com a régua medimos a distância de cada ponto para calcular o valor de Rf, a migração do solvente foi 7,3 e os valores de Rf obtidos foram os seguintes:
	Molécula
	Rf
	Paracetamol
	4,6 cm
	Ácido Acetilsalicílico
	5,9 cm
Calculo efetuado:
 Rfp= = 0,630 Rfaas= = 0,808
 A seguir fotos registradas durante o procedimento.
 Fonte: Autoria própria Fonte: Autoria própria Fonte: Autoria própria 
AULA 6
Título da aula: Cromatografia em Camada Delgada (CCD) II Análise Cromatográfica de Pigmentos. Esta aula teve como objetivo avaliar a separação de pigmentos pela técnica da CCD e estudar o emprego de técnicas cromatográficas para separação e análise de substâncias em função de sua estrutura química e do fenômeno de absorção cromatográfica.
Materiais utilizados: cuba cromatográfico, chapa de Aquecimento, balança semianalítica, béquer, Erlenmeyer, funil de separação, suporte, funil para filtração, garra, pinça metálica, bastão de vidro, capilares, papel de filtro, placa cromatográfica, hexano, acetona, Iodo sólido, pimentões (vermelho, verde e amarelo), sulfato de sódio anidro, papel para pesagem em balança, espátula. 
Parte 1: preparação do extrato foi realizado pela técnica do laboratório (nos alunos fizemos somente do item 8 em diante) separemos a fase aquosa no béquer e descartemos, transferimos a fase orgânica para um Erlenmeyer e adicionamos 2 g de sulfato de sódio de anidro, deixemos em repouso, filtremos em um béquer o extrato até o volume de 1ml através do aquecimento da manta. 
Parte 2: análise cromatográfico, a técnica já deixou preparada a cuba contendo o hexano com 5% de acetona, nos alunos recortemos a placa de sílica e efetuemos as marcações indicando o ponto de aplicação da amostra e o ponta do final da corrida, com um capilar apliquemos na placa de sílico uma gota de cada extrato concentrado do pimentão (verde, amarelo, vermelho) em posições diferentes, cuidadosamente a placa na cuba e aguardar até que o solvente atinge a segunda marcação do topo da placa, removemos da cuba e deixemos secar por aproximadamente 10 minutos e observemos as manchas coloridas formadas, medimos com o auxílio de uma régua as manchas e foi a seguinte: migração so solvente 6,3 cm, pimentão amarelo 5,4 cm, pimentão vermelho 5,5 cm, pimentão verde 5,6 cm.
Calculo efeituado do Rf das manchas: 
Rfa= = 0,857 Rfv= = 0,873 Rfverde= = 0,888
A- Análise o resultado da CCD e indique qual a molécula presente em cada mancha cromatográfica obtida. Molécula caroteno mancha amarela, criptoxantina mancha verde, capsantina mancha vermelha.
B- Relacione a molécula ao valor de Rf calculado para cada mancha:
	Molécula
	Rf
	Caroteno
	0,857
	Capsantina
	0,873
	Criptoxantina 
	0,888
A seguir fotos registradas durante o procedimento.
 Fonte: Autoria própria Fonte: Autoria própria Fonte: Autoria própria 
AULA 7 
 Não foi realizada por falta de insumo.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
[1] Análise de drogas vegetais por CCD. ANÁLISE DE DROGAS VEGETAIS POR CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD). Disponível em: cromatografiia.doc (live.com) Acesso em: 23-10-2022.
[2] PASSOS, Elisangela De Andrade. PRÁTICA 03 – ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO MOLECULAR NO UV–VIS: LEI DE BEER. Disponível em: Metodos Instrumentais de Analise.indd (ufs.br) Acesso em: 23-10-2022.
[3] K KASVI do seu lado. Sempre a frente. Espectrofotometria: Análise da concentração de soluções. 16 fev. 2018.Disponivel em: Espectrofotometria: Análise da concentração de soluções (kasvi.com.br) Acesso em: 23-10-2022.