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HEMATOLOGIA Índices hematimétricos HEMOGRAMA Por que o exame foi solicitado??? No nosso sangue circulam três tipos básicos de células produzidas na medula óssea. São estas células que estudamos através do hemograma: • Hemácias (glóbulos vermelhos ou eritrócitos). • Leucócitos (glóbulos brancos). • Plaquetas. ❑ É a parte do hemograma que avalia a massa, forma e a variabilidade de tamanho dos eritócitos circulantes. ❑ Indicação = diagnóstico e tratamento: anemia, policitemia. Eritrograma Determinação do tamanho de eritrócito grande (macrócito) em analisador hematológico que utiliza a impedância elétrica como método de contagem. O tamanho aumentado da célula é percebido pela altura do pulso elétrico. Determinação do tamanho do eritrócito pequeno (micrócito) em analisador hematológico que utiliza a impedância elétrica como método de contagem. O tamanho diminuído da célula é percebido pela altura do pulso elétrico. Impedância elétrica ✓ Formação de corrente elétrica entre dois eletrodos. o quando uma célula atravessa a corrente elétrica é gerado um impulso elétrico que é quantificado, conforme o diâmetro (eritrócitos, leucócitos, plaquetas). Wallace e Joseph Coulter O PRINCÍPIO COULTER (1946) Dispersão a laser É uma técnica de medição das propriedades de células em suspensão, orientadas em um fluxo laminar e interceptadas uma a uma por um feixe de luz (LASER). ❖ Amplificador e processador dos sinais luminosos (SENSORES); ❖ Sistema computacional integrado para processar as informações oriundas dos sensores. ❖ O feixe de laser incidirá sobre cada célula (de forma individual) ❖ A radiação incidente sofrerá desvios que serão reconhecidos pelos fotosensores. ❑ Citometria de fluxo fluorescente A luz espalhada pelas células é medida por dois detectores ópticos: dispersão direta (FSC - forward scatter) que detecta a dispersão ao longo do caminho do laser e dispersão lateral (SSC - side scatter) que mede a dispersão em um ângulo de noventa graus em relação ao laser. https://www.youtube.com/watch?v=OmD1Iv66sQM&t=26s O eritrócito é medido em dois ângulos (baixo e alto), ❖ um para a determinação da concentração de hemoglobina (alto) e ❖ outro relacionado ao tamanho do eritrócito (baixo). Dispersão a laser Histogramas de volume e concentração de hemoglobina. ❖ No gráfico de volume com os limites de 60 a 120 fL. Células microcíticas são plotadas à esquerda enquanto eritrócitos macrocíticos, à direita. ❖ No gráfico de concentração de hemoglobina, células hipocrômicas localizam-se à esquerda e as hipercrômicas à direita. Histograma V/HC fornecido pelos modelos Bayer Advia Localizam-se no(s) plote(s) do histograma, eritrócitos: (1) macrocíticos e hipocrômicos (reticuócitos); (2) macrocíticos normocrômicos (anemia megaloblástica); (3) macrocíticos hipercrômicos; (4) normocíticos hipocrômicos; (5) normocíticos e normocrômicos; (6) normocíticos hipercrômicos (esferócitos, depranócitos); (7) microcíticos hipocrômicos (anemia ferropriva); (8) Microcíticos normocrômicos (talassemmia heterozigótica); (9) microcíticos e hipercrômicos. HEMOGLOBINA A hemoglobina é um hetero-tetrâmero formada: Heme – estrutura porfirínica (anel tetrapirrólico) que contêm o íon ferro (Fe2+ “ferroso”), que se combina reversivelmente com uma molécula de oxigênio. Globina – cadeia polipeptídica → estrutura globular 4nária HEMOGLOBINA Max Perutz e John Kendrew: estrutura 3D da hemoglobina em 1959. HEMOGLOBINA Atualmente considera-se por anemia a constatação clínica e laboratorial uma pessoa com valor de hemoglobina abaixo do esperado para sua faixa etária. HEMOGLOBINA Reagente de Drabkin QUANTIFICAÇÃO HEMATÓCRITO É a razão entre o massa de eritrócitos e o volume de sangue total. O resultado em % exprime a concentração de eritrócitos obtidos por centrifugação do sangue não coagulado. Valor normal: 40 a 50% (adulto). Expresso em percentual (%) Métodos não automatizados e automatizados: Centrifugação - (microhematócrito) Calculado (Contagem de hemácias x VCM / 10) ◼ Medido pela soma de pulsos elétricos (impedância) https://labtestsonline.org.br/tests/hematocrito S a n g u e t o ta l P la sm a C é lu la s https://labtestsonline.org.br/tests/hematocrito HEMATÓCRITO HEMATÓCRITO ❑ O hematócrito diminui até menos que o normal, indicando anemia, quando ocorre redução da produção. ❑ O hematócrito se eleva quando o número de hemácias aumenta ou quando o volume de plasma diminui, como na desidratação. https://labtestsonline.org.br/understanding/conditions/anemia https://labtestsonline.org.br/glossary/dehydration CONTAGEM DE HEMÁCIAS Determina o número de células eritrócitos (mm3 ou µL) Expresso em milimetros cúbicos (mm3) de sangue. Métodos automatizados e não automatizados: Contadores/Analisadores hematológicos: impedância Contagem em câmara de Neubauer. Contagem de hemácias Concentração DIMINUIDA da massa eritrocitária ❖ Deficiências na síntese de Hb ❑ (anemia ferropriva, talassemia, sideroblástica). ❖ Síntese deficiente de nucleoproteínas ❑ (def. de vit. B12 e ácido fólico). ❖ Hematopoese deficiente ❑ (anemia aplásica, ...). ❖ Anemias hemorrágicas ❖ Alcoolismo, hepatopatias, neoplasias, HIV. Contagem de hemácias Concentração AUMENTADA da massa eritrocitária ❖ Relativa = na hemoconcentração secundária ❑ desidratação. ❖ Absoluta = na hipóxia ❑ intoxicação por CO, altas altitudes, doença pulmonar, distúrbios neurológicos. ❖ Doença renal ❑ cistos, hidronefrose, estenose de artéria renal. ❖ Tumores ❑ hipernefroma, hepatoma, tumor de adrenal, feocromocitoma. Contagem de hemácias ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS Relaciona a qtde de Hb ao tamanho (Ht%) das hemácias. Relaciona a qtde Hb ao nº das hemácias. VCM - VOLUME CORPOSCULAR MÉDIO ❖ Indica o volume médio dos eritrócitos. O volume médio gira em torno de 80 a 100 fL (L x 10-15) Expresso em fentolitros (fL). Determina a morfologia da hemácias e leva ao diagnóstico do tipo de anemia, classificando-as em: Anemia microcitica - VCM menor que 80 fL Anemia normocítica - VCM entre 80 e 100 fL Anemia macrocítica - VCM maior que 100 fL Métodos de determinação: cálculo: Hct x 10 C.E Automação: citômetro de fluxo ou impedância https://pt.wikipedia.org/wiki/Anemia HCM - HEMOGLOBINA CORPOSCULAR MÉDIA ❖ Indica a quantidade média de hemoglobina (Hb) presente em cada eritrócito. Utilizado para identificar o tipo e causa da anemia. Valor normal: 27 a 32 pg (picogramas). Expresso em picogramas (pg) = g x 10 -12 Métodos de determinação: Cálculo: Hb x 10 C.E Automação: citômetro de fluxo ou impedância Não automatizado ◼ câmara de Neubauer + espectrofotômetro Dependendo do valor encontrado a anemia pode ser classificada em: Anemia hipercrômica HCM maior que 32 picogramas: ◼ deficiência de vitamina B12 ou de ácido fólico. ◼ Também pode ser causado por doença hepática e após quimioterapia. Anemia normocrômica HCM entre 27 e 32 picogramas: ◼ indica que a causa da anemia é perda de sangue. ◼ hemorragia, sangue nas fezes, hematêmese; linfomas, sepse e síndrome nefrítica. Anemia hipocrômica: HCM menor a 27 picogramas, ◼ pode ser causada por deficiência de ferro. HCM - HEMOGLOBINA CORPOSCULAR MÉDIA ❖ Indica a concentração média de hemoglobina (Hb) baseado em um volume (100 mL) de eritrócitos (Ht%). Utilizado para identificar o tipo e causa da anemia. Valor normal: 32 a 37 g/dL (grama por decilitro). Métodos de determinação: Cálculo: Hb x 100 Ht Automação: citômetro de fluxo ou impedância Nao automatizado ◼ microhematócrito + espectrofotômetro CHCM – CONCENTRAÇÃO DE HEMOGLOBINA CORPOSCULAR MÉDIA • CHCM: Relaciona a qtde de Hb ao tamanho (Ht%) das hemácias • HCM: Relaciona a qtde Hb ao nº das hemácias. ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS VCM = Hct (%) x 10 C.E x 10 6 mm3 HCM = Hb(g/dL) x 10 C.E x 10 6 mm3 CHCM = Hb (g/dL)x 100 Hct (%) fentolitros (fL) pg (picogramas) g/dL (grama por decilitro) RDW - Red blood cells Distribution Width Amplitude de Distribuição dos Eritrócitos ▪ Mede a variação no tamanho das hemácias. ▪ Quando muito diferentes, indica uma heterogenicidade no tamanho celular que é denominada anisocitose. ▪ Valor de Referência = 10,0 – 14,0% RDW - Red blood cells Distribution Width Amplitude de Distribuição dos Eritrócitos https://www.wjgnet.com/1949-8462/full/v10/i2/6.htm Avaliação microscópica ▪ Nesta etapa, é possível classificar a hemácia quanto ao tamanho, forma, coloração celular e, presença ou ausência de inclusões. ▪ Qualquer alteração relevante deve ser descrita de forma criteriosa no laudo. ANORMALIDADES DOS ERITRÓCITOS Anisocitose → variação em tamanho da célula Microcitose: menor que o tamanho normal Macrocitose: maior que o tamanho normal Poiquilocitose → variação na forma da célula Policromasia → Alteração na coloração da célula Hipocromia: diminuição da concentração de hemoglobina Classificação laboratorial das anemias Classificação laboratorial das anemias Classificação laboratorial das anemias Classificação laboratorial das anemias Alterações Patológicas - Série Vermelha Eliptócito / Ovalócito (seta) - hemácias que perdem elasticidade normal quando passam por um vaso sanguíneo de pequeno calibre devido à um defeito na proteína espectrina do citoesqueleto, não retornando ao seu formato normal; Acantócito (seta tracejada) - hemácia que apresenta espículos, que são projeções citoplasmáticas distribuídas irregularmente ao redor da célula. Acantócitos tem espículos de variados tamanhos e em menor quantidade que hemácias crenadas. Alterações Patológicas - Série Vermelha Codócito (seta): hemácia apresentando um círculo no centro. Alterações Patológicas - Série Vermelha Anisocitose (diferença de tamanho entre hemácias), Pecilocitose (eritrócitos com formas anormais) e Policromasia (hemácias policromáticas - seta tracejada); Codócitos (seta) - Hemácias em alvo; Dacriócito (seta dupla) - hemácias que adquirem formato de "gota" ao passarem, principalmente, pelo baço sofrendo estiramento; Fragmentos de Hemácias (seta tracejada dupla); Alterações Patológicas - Série Vermelha Anisocitose evidente: diferença no tamanho das hemácias. Macrócito (seta) - Hemácia maior que o tamanho normal; Micrócito (seta tracejada) - Hemácia menor que o tamanho normal; Eritrócito de tamanho normal (seta dupla). Alterações Patológicas - Série Vermelha Eritroblasto basófilo. Alterações Patológicas - Série Vermelha Eritroblasto basófilo (seta), Segunda fase de maturação eritrocitária (após o proeritroblasto), citoplasma azulado (basofílico), a cromatina começa a se condensar. Eritroblasto policromático (seta dupla) - Terceira fase de maturação eritrocitária, núcleo com cromatina condensada e citoplasma levemente acinzentado devido a hemoglobinização (confere acidofilia). Eritroblasto ortocromático (seta tracejada) - Quarta fase de maturação eritrocitária, demonstrando núcleo picnótico e geralmente excêntrico ou sendo expulso da célula, citoplasma mais acidófilo (intensa hemoglobinização). Alterações Patológicas - Série Vermelha Eritroblasto policromático (seta). Eritroblastos ortocromáticos (setas tracejadas). Outros elementos: Monócito (seta dupla). Alterações Patológicas - Série Vermelha Eritroblasto policromático. Alterações Patológicas - Série Vermelha Eritroblasto policromático binucleado. Alterações Patológicas - Série Vermelha Eritroblasto ortocromático expelindo núcleo. Eritroblasto ortocromático. Alterações Patológicas - Série Vermelha Reticulócitos (coloração com azul de cresil brilhante). Quinta e última fase de maturação eritrocitária, apresentando vestígios de RNA que conferem a característica de policromasia. Só podem ser identificados pela coloração com azul de cresil brilhante. Reticulocitose evidente. Alterações Patológicas - Série Vermelha Rouleaux eritrocitário Normalmente a carga ao redor das hemácias é negativa, o que causa repulsão entre elas. Esse efeito é conhecido como "Fator Zeta" e, quando este é anulado, as hemácias empilham-se formando o Rouleaux. Ocorre em situações como o mieloma múltiplo devido ao aumento de gamaglobulinas no sangue.