Laboratório Virtual Micologia e Virologia

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MICROCULTIVO DE BOLORES (FUSARIUM SP.) 
 
PRÉ TESTE 
 
1. Como podemos identificar um fungo filamentoso? 
A. través da análise macroscópica (aspectos da colônia) e microscópica (hifas, conídios, 
por exemplo) do fungo; 
A identificação de fungos filamentosos tem, como fundamento, a observação da 
morfologia da colônia e aspectos microscópicos. A análise da colônia visa observar: cor, 
textura, superfície e reverso da colônia, pigmento difusível no meio de cultura, por 
exemplo. Enquanto a análise das estruturas microscópicas visa observar hifa hialina ou 
demácia, septada ou cenocítica, morfologia, disposição e formação dos esporos. 
 
2. Quais são os meios de cultura apropriados para a realização do microcultivo para 
fungos filamentosos: 
A. ágar Sabouraud e batata; 
O ágar sabouraud e o ágar batata são meios capazes de estimular o desenvolvimento 
das estruturas microscópicas do fungo (esporângios/conídeos). 
 
3. A velocidade do crescimento fúngico é extremamente importante para a sua 
identificação. Assinale a assertiva que corresponde à classificação de crescimento dos 
fungos filamentosos: 
B. rápido (< 7 dias), intermediário (8 a 14 dias) ou lento (> 15 dias); 
A afirmativa classifica a velocidade de crescimento dos fungos corretamente. 
 
4. Considerando a técnica do microcultivo de bolores (Fusarium sp.), responda: 
A. a técnica do microcultivo de bolores (Fusarium sp.) preserva a disposição original dos 
esporos sobre as hifas e mantém íntegras as estruturas formadoras de esporos, o que 
facilita a visualização microscópica; 
O microcultivo permite a integridade das estruturas fúngicas, já que o fungo cresce sob 
a lamínula sem a necessidade da retirada de fragmentos da cultura. 
 
5. Quando deve ser realizado o microcultivo de bolores (Fusarium sp.)? 
A. Quando é impossível a identificação do gênero/espécie do fungo pela lâmina 
realizada diretamente da colônia; 
Em alguns casos, torna-se impossível a visualização das estruturas dos fungos através da 
lâmina confeccionada da cultura primária. Nesses casos, é indicado o microcultivo. 
 
Pós Teste 
 
1. Em alguns momentos, a preparação de uma lâmina pode ser insuficiente para a 
visualização adequada das estruturas microscópicas do fungo a ser investigado. 
Marque a alternativa que indique o motivo dessa visualização precária. 
A. Ausência de arranjos e estruturas fúngicas características; 
Durante a confecção da lâmina diretamente da cultura primária, é necessária a 
fragmentação da porção retirada do meio de cultura. Esse processo pode impedir a 
visualização dos arranjos estruturais do fungo a ser investigado. 
 
2. Quais substâncias podem ser utilizadas para a visualização das estruturas fúngicas 
do microcultivo? 
B. Hidróxido de potássio e lactofenol; 
O microcultivo utiliza KOH a 20-40% ou lactofenol para facilitar a visualização de 
estruturas fúngicas na amostra avaliada. 
 
3. É essencial durante o processo de incubação do microcultivo: 
A. o ágar Sabouraud ou de batata estarem em uma espessura adequada; 
O fungo precisa de nutrientes e um ambiente para o seu crescimento durante o período 
de incubação. O microcultivo em um meio extremamente fino impede o 
desenvolvimento do fungo. 
 
4. Observe a imagem abaixo. Com relação ao microcultivo, esta corresponde a: 
 
B. um microcultivo de um fungo demáceo; 
A microscopia evidenciou estruturas demáceas. 
 
5. Durante a montagem do microcultivo, o que não devemos utilizar? 
B. Lamínula acondicionada em um local mofado; 
Uma lamínula acondicionada de modo incorreto pode dificultar a identificação do fungo 
investigado devido a contaminação do microcultivo. 
 
MICROSCOPIA DE FUNGOS FILAMENTOSOS (BOLORES) E FUNGOS 
LEVEDURIFORMES 
 
PRÉ TESTE 
 
1. Quais são as classificações utilizadas para os tipos de fungos? 
A. Filamentosos, leveduriformes e dimórficos; 
Existem três classificações utilizadas: filamentosos (possuem suas células em forma de 
filamentos tubulares denominados de hifas, e o seu conjunto é chamado de micélio), 
leveduriformes (apresentam suas células em um formato arredondado ou ovalado e são 
chamadas de leveduras) e dimórficos (a depender da temperature podem se apresentar 
como fungo filamentoso ou leveduriforme). 
 
2. Os filamentosos apresentam filamentos tubulares denominados de hifas e o seu 
conjunto é chamado de micélio. Em relação as características das hifas, marque a 
alternativa correta. 
A. Podem ser classificadas em hialinas quando apresentam cores claras ou são 
transparentes e demáceas quando apresentam uma cor mais escura; 
As hifas podem ser classificadas como hialinas por apresentarem uma coloração 
clara/transparente na microscopia e como demáceas por apresentarem melanina na sua 
estrutura promovendo uma coloração acastanhada. 
 
3. Em relação aos fungos encontrados na natureza e que ocasionalmente parasitam os 
homens e/ou animais, marque a assertiva correta. 
B. Geofílicos, zoofílicos e antropofílicos; 
Geofílicos, zoofílicos e antropofílicos são os tipos de classificações dos fungos 
encontrados no solo que, ocasionalmente, podem parasitar os homens e/ou animais. 
 
4. Considerando que um fungo apresenta uma morfologia diferente a depender da 
temperatura a qual estará exposto, marque a alternativa correta. 
A. Podemos classificá-lo como fungo dimórfico; 
Os fungos dimórficos são capazes de existir nas duas formas: leveduriformes entre 25°C 
a 37°C e filamentosos entre 25°C a 30°C. 
 
5. Considerando que os fungos necessitam de matéria orgânica para sobreviver, 
assinale a assertiva correta. 
A. Podem ser associados ao material orgânico como decompositores, simbiontes, 
comensais e parasitas; 
Os efeitos decorrentes destas associações podem ser considerados úteis ou prejudiciais, 
já que necessitam de matéria orgânica para a obtenção de carbono e de energia para o 
seu metabolismo. 
 
Pós Teste 
 
1. A visualização de estruturas fúngicas é essencial à identificação final desse micro-
organismo. Em relação ao processo de microscopia para pesquisa direta para fungos, 
assinale a alternativa correta. 
A. Com o auxílio de uma alça em “L”, deve-se retirar uma pequena porção da amostra 
biológica a ser analisada e, já na lâmina previamente com hidróxido de potássio (KOH) a 
20%-40%, fazer a suspensão em círculos suavemente. Depois deve-se colocar uma 
lamínula e observar no microscópio na objetiva 40X; 
 
2. Qual o método utilizado para a visualização das estruturas fúngicas em amostras 
biológicas? 
B. Micológico direto; 
O micológico direto utiliza KOH a 20-40% para facilitar a visualização de estruturas 
fúngicas na amostra avaliada. 
 
3. Os fungos possuem necessidades nutricionais que podem ser supridas através dos 
meios de cultura artificiais. Em relação ao cultivo de fungos, pode-se afirmar que: 
A. o ágar Sabouraud é o meio de cultura mais utilizado para o cultivo desses micro-
organismos; 
O ágar Sabouraud possui uma elevada concentração de dextrose, que proporciona uma 
vantagem para o desenvolvimento dos fungos estáveis por osmose, à medida que a 
maioria das bactérias não suporta a elevada concentração de açúcar. 
 
4. Analise a imagem do micológico direto de um raspado de unha abaixo e assinale a 
alternativa que corresponde aos achados visualizados na microscopia. 
 
B. Hifas hialinas septadas; 
O micológico direto evidenciou a presença de estruturas tubulares, denominadas hifas 
de coloração hialina e com presença de septos. 
 
5. Analise a imagem da coloração de Gram abaixo e assinale a alternativa que 
corresponde aos achados visualizados na microscopia. 
 
B. Leveduras; 
As leveduras são fungos unicelulares ovais ou esféricos (geralmente de 3 a 4 µm de 
diâmetro) e que podem ser corados de roxo pela metodologia do Gram. 
 
IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS FILAMENTOSOS E LEVEDURAS EM SUCO DE 
FRUTAS 
 
PRÉ TESTE 
 
1. A presença de fungos filamentosos e leveduras em grande número indica matéria-
prima excessivamente contaminada, limpeza e desinfecção de superfícies 
inadequadas, bem comohigiene insuficiente na produção e condições impróprias de 
tempo e temperatura durante a conservação dos alimentos. Com base nas 
informações apresentadas, assinale a alternativa que descreve alimento(s) que 
deve(m) ser submetido(s) à análise para quantificação de fungos filamentosos e 
leveduras. 
A. Alimentos ácidos, com pH ≤ 4,5; 
Nesses alimentos, o crescimento de fungos poderá comprometer a qualidade do 
produto. 
 
2. Os meios de cultura são insumos preparados em laboratórios que fornecem os 
nutrientes para o crescimento e o desenvolvimento de microrganismos (como 
bactérias e fungos) fora do seu habitat natural. Qual meio de cultura deve ser utilizado 
para análise de quantificação de fungos filamentosos e leveduras em alimentos, tais 
como sucos de frutas? 
C. Ágar batata dextrose (ABD) acidificado. 
O ágar batata dextrose (ABD) acidificado tem sido utilizado para quantificação geral de 
fungos filamentosos (bolores) e leveduras em amostras de alimentos. 
 
3. Assinale a alternativa que apresenta a forma correta de expressar o resultado de 
uma análise laboratorial referente à quantidade de colônias de fungos filamentosos e 
leveduras em uma amostra de alimento. 
B. UFC por grama ou mililitro de alimento; 
A contagem poderá ser expressa em UFC por grama para alimentos sólidos ou em UFC 
por mililitro no caso de alimentos líquidos. 
 
4. Os fungos filamentosos e as leveduras fazem parte do reino Fungi. Esse grupo inclui 
os cogumelos, organismos macroscópicos muito utilizados na alimentação humana, e 
organismos microscópicos, tais como os fungos em geral. Sobre a determinação de 
fungos em alimentos, assinale a alternativa correta. 
B. Nos meios de cultura, as colônias de fungos filamentosos apresentam aspecto 
cotonoso, enquanto as leveduras apresentam colônias mucoides; 
As leveduras são microrganismos unicelulares, enquanto os fungos filamentosos 
pluricelulares formam estruturas maiores na placa, devido à presença de hifas. Estes 
últimos apresentam crescimento característico com aspecto aveludado ou cotonoso 
(parecendo algodão) na visualização por exame macroscópico. 
 
5. O uso benéfico dos fungos está associado a processos industriais como produção de 
queijos e até mesmo obtenção de antibióticos. Assinale a alternativa que NÃO está 
relacionada à aplicação e à utilização de forma desejável de fungos filamentosos e 
leveduras em alimentos. 
A. Produção de micotoxinas, principalmente por espécies que pertencem aos gêneros 
Aspergillus, Penicillium e Fusarium; 
As micotoxinas são compostos toxigênicos produzidos por determinados fungos e não 
estão associadas ao efeito benéfico do crescimento de fungos filamentosos e leveduras 
em alimentos. 
 
PÓS TESTE 
 
1. O desenvolvimento dos microrganismos em alimentos acarreta alterações na sua 
composição química, alterações sensoriais e estruturais. Como é feita a determinação 
e a quantificação de fungos filamentosos e leveduras em alimentos? 
C. Pela contagem em placas com ágar batata dextrose (ABD) acidificado. 
O meio de cultura ágar batata dextrose (ABD) acidificado irá possibilitar o crescimento 
de fungos filamentosos e leveduras após incubação das placas a 25 °C por 3 a 5 dias. 
 
2. Os fungos (bolores e leveduras) são microrganismos majoritariamente aeróbios, 
capazes de se desenvolver na superfície dos alimentos. Portanto, qual o método de 
plaqueamento mais adequado para sua determinação? 
B. Plaqueamento em superfície, com auxílio da alça de Drigalski para espalhamento do 
inóculo; 
A determinação de fungos em alimentos deverá ocorrer por meio da contagem das UFC 
na superfície de placas de ágar batata dextrose (ABD) acidificado. 
 
3. Foi publicada, no Diário Oficial da União (D.O.U.), no dia 26 de dezembro de 2019, 
a Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) nº 331/2019, que trata dos padrões 
microbiológicos de alimentos e sua aplicação. Essa legislação estabelece os limites 
aceitáveis para contagem de fungos filamentosos (bolores) e leveduras em sucos de 
frutas. 
Assinale a alternativa que apresenta a resposta correta em relação à determinação de 
fungos filamentosos e leveduras em alimentos. 
A. Contagens elevadas de fungos em geral (bolores e leveduras) são indicativos de 
produto elaborado com matéria-prima excessivamente contaminada, limpeza e 
desinfecção de superfícies inadequadas, higiene insuficiente na produção e condições 
impróprias de tempo e temperatura durante a conservação dos alimentos; 
Contagens acimas de 102 UFC/mL ou grama de alimento são indicativas de que as 
condições de higiene, processamento e matéria-prima para elaboração do alimento não 
estão aceitáveis. 
 
4. Quando da aplicação de métodos de contagem de colônias viáveis em placas, o 
analista deve estar atento a alguns detalhes importantes e que influenciam o 
resultado das análises realizadas. Muitos dos resultados obtidos devem ser 
interpretados com base em uma série de regras existentes no Compendium of 
Methods for the Microbiological Examination of Foods – APHA e publicações similares. 
Qual a quantidade máxima de colônias de fungos filamentosos e leveduras presentes 
em placas de meio de cultura utilizadas em análise laboratorial para consideração e 
registro dos resultados de quantificação obtidos? 
A. Limite máximo de 50 UFC; 
Placas que apresentarem número de colônias inferior a 250 UFC (para bactérias) e 50 
UFC (para bolores e leveduras) por placa deverão ser consideradas para o registro dos 
resultados. 
 
5. Na tabela a seguir são apresentados os resultados de uma análise para 
determinação da quantidade de fungos filamentosos e leveduras em suco de abacaxi. 
Expresse corretamente o resultado da análise em UFC/mL levando em consideração o 
volume e a diluição das amostras plaqueadas. 
 
C. 2,5 x 105 UFC/mL. 
Para expressão dos resultados, deve-se multiplicar o número de UFC contadas em placas 
pelo inverso da diluição. Logo: 
242 x 102 = 2,4 x 104 (utilizar somente 1 casa após a vírgula) 
26 x 103 = 2,6 x 104 
Ainda, recomenda-se obter um valor médio entre as contagens. O valor médio entre 2,6 
e 2,4 é 2,5. Logo, tem-se como resultado da análise 2,5 x 104 UFC por 0,1 mL de amostra 
(de acordo com o volume que foi plaqueado, descrito na tabela apresentada – 
espalhamento em superfície utiliza 0,1 mL de amostra; espalhamento em profundidade 
utiliza 1 mL de amostra). Para obter-se o valor em UFC/mL, basta realizar regra de três: 
2,5 x 104 UFC -------- 0,1 mL 
 
X? ---------- 1 mL 
 
X = 2,5 X 105 UFC/mL