Relatorio Metodos Instumentais de Analise

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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS 
 
 
 
 
 
 
 
 
CURSO: FARMÁCIA DISCIPLINA: MÉTODOS INSTRUMENTAIS DE ANÁLISE 
 
 
 
NOME DO ALUNO: ANA KARINA B. BESSA DE MENEZES RA: 0413070 
 
 
 
POLO: ERCÍLIA/SÃO JOSÉ DO RIO PRETO 
 
 
DATA: 29/10/2022
Manual de Estágio 
 
Aula 1 - Análise em espectrofotômetro - Espectro de absorção e análise 
de amostra desconhecida 
Objetivo: 
Este experimento tem por objetivo efetuar a varredura de comprimento de 
onda na região visível do espectro eletromagnético para uma solução aquosa 
de alaranjado de metila utilizando o espectrofotômetro UV-VIS e determinar o 
comprimento de onda de máxima absorbância dessa substância. 
Procedimento 
Parte I: Determinação do Espectro de Absorção 
Ajustar o comprimento de onda no aparelho para 400 nm. 
Adicionar água destilada a uma cubeta, tomando cuidado para que o volume 
adicionado permita a passagem, pela amostra, do feixe de radiação emitido 
pelo aparelho. 
Limpar a cubeta com papel-absorvente e introduzi-la no compartimento do 
espectrofotômetro. 
Ler o valor da absorbância no visor do aparelho e zerar a absorbância. 
Adicionar solução de alaranjado de metila (4,0 mg/L) em outra cubeta e 
introduzi-la no compartimento do espectrofotômetro. 
Anotar o valor de absorbância indicado pelo aparelho. 
Ajustar novo comprimento de onda no aparelho, como indicado na tabela 1, e 
repetir os itens 3 a 6. Completar a tabela com os valores de absorbância 
obtidos em cada comprimento de onda ajustado no aparelho. 
Tabela 1: Varredura de absorbância em diferentes comprimentos de onda 
para análise de solução de alaranjado de metila 4,0 mg/L. 
Tabela e Valores Original do Roteiro feito em Aula 
λ (nm) A (nm) 
400 0,184 
410 
420 
430 0,306 
Manual de Estágio 
 
440 
450 
460 0,389 
470 
480 
490 0,376 
500 
510 
520 
530 0,129 
540 
550 
560 
Construir o gráfico que representa o espectro eletromagnético de absorção do 
alaranjado de metila, tendo a absorbância (A) como ordenada e comprimento 
de onda (λ) como abscissa. Identificar o comprimento de onda referente à 
máxima absorbância e indicá-lo 
Analisando a tabela e o gráfico, obter o valor do comprimento de onda de máxima 
absorbância para o alaranjado de metila: λmax = 460 nm 
 
Obs: Valores Utilizados para tabela e gráfico, substituídos. 
λ (nm) A (nm) 
400 0,184 
410 
200 0.006 
220 0.036 
240 0.039 
250 0.042 
257 0.048 
Manual de Estágio 
 
260 0.054 
280 0.038 
300 0.015 
400 0.597 
500 0.575 
440 0.083 
 
Construir o gráfico que representa o espectro eletromagnético de absorção do 
alaranjado de metila, tendo a absorbância (A) como ordenada e comprimento 
de onda (λ) como abscissa. Identificar o comprimento de onda referente à 
máxima absorbância e indicá-lo 
Analisando a tabela e o gráfico, obter o valor do comprimento de onda de máxima 
absorbância para o alaranjado de metila: λmax = 400 nm 
 
Parte II: Determinação da absorbância de amostras com concentração 
desconhecida de alaranjado de metila 
Ajustar o comprimento de onda correspondente à máxima absorção para o 
alaran- jado de metila (λmax), definido após análise dos resultados da Parte I. 
Adicionar água destilada à cubeta, tomando cuidado para que o volume 
adicionado permita a passagem, pela amostra, do feixe de radiação emitido 
pelo aparelho. 
Manual de Estágio 
 
Limpar a cubeta com papel-absorvente, adicioná-la no compartimento do 
espectrofotômetro e zerar a absorbância do aparelho. 
Adicionar solução de alaranjado de metila (4,0 mg/L) em outra cubeta e 
introduzi-la no compartimento do espectrofotômetro. 
Ler o valor de absorbância indicado no visor do espectrofotômetro e anotar 
abaixo. 
 
 
Aula 2 – Análise em Espectrofotômetro - Construção da curva de 
calibração para análise de alaranjado de metila 
Objetivo: Este experimento tem por objetivo construir a curva de calibração 
(concentração em função da absorbância) para a análise do alaranjado de 
metila por espectrofotometria. 
Procedimento 
Parte 1: Preparo dos padrões de alaranjado de metila em balões volumétricos. 
Transferir parte da solução estoque de alaranjado de metila (10 mg/L) para 
um béquer de 50 ml. 
Identificar quatro balões volumétricos de 50 ml, indicando as concentrações, 
como representado a seguir. 
Utilizando a expressão para cálculos de diluição C1.V1 = C2.V2, determinar o 
volume de solução estoque a ser adicionado em cada balão volumétrico para 
obter a concentração final desejada. 
 
Solução estoque (10 mg/L) 8,0 mg/L 5,0 mg/L 2,5 mg/L 1,0 
mg/L 
A = 0,389 
Concentração (mg/L) VEstoque (ml) 
Manual de Estágio 
 
 
Transferir, com auxílio de pipeta graduada, o volume de solução estoque 
calculado para o balão volumétrico correspondente. 
Completar o volume do balão com água destilada, obedecendo à marca de 
aferição, evitando erro de paralaxe e homogeneizar as soluções. 
Parte 2: Dosagem dos padrões em espectrofotômetro 
1. Ajustar o comprimento de onda no aparelho para 460 nm. 
2. Adicionar água destilada à cubeta (branco), limpar a cubeta com papel-
absorvente e introduzi-la no compartimento do espectrofotômetro. 
3. Ler a absorbância do branco e zerar a escala. 
4. Com auxílio da micropipeta automática, adicionar as soluções preparadas, 
uma a uma, à cubeta e efetuar a leitura da absorbância para cada uma das 
soluções e anotar os valores na tabela a seguir, iniciando pela solução de 
menor concentração. 
5. Lavar a cubeta com água destilada entre cada solução padrão analisada. 
6. Descartar as amostras lidas no aparelho em frasco de descarte adequado. 
Tabela: Resultados de Absorbância (A) para as soluções de diferentes 
concentrações de alaranjado de metila 
C (mg/L) A 
1,0 0,074 
2,5 0,165 
5,0 0,321 
8,0 0,504 
10,0 0,638 
Construção da curva de calibração e equação da reta 
Em papel-milimetrado, ou utilizando software apropriado, construir a curva de 
1,0 5 
2,5 12,5 
5,0 25 
8,0 40 
Manual de Estágio 
 
calibração para o alaranjado de metila, tendo absorbância em função da 
concentração. 
 Determinar a equação da reta e coeficiente de correlação e representá-la a 
seguir. 
 
 
Análise do coeficiente de correlação (r) 
 O valor calculado deverá estar próximo a 1,000, o que indica boa correlação 
entre a absorbância obtida no espectrofotômetro para as diferentes 
concentrações de alaranjado de metila. 
Segundo a RDC 166/2017, o método será considerado LINEAR quando 
apresentar r ≥ 0,990. 
Com a equação de reta correspondente à calibração para as soluções de 
alaranjado de metila, efetuar o cálculo do teor (concentração) dessa 
substância que estava presente na amostra desconhecida analisada na 
prática 1 (Parte 2). 
Aula 3 – Avaliação da seletividade do método espectrofotométrico de 
dosagem de alaranjado de metila 
Observação: a solução de referência de alaranjado de metila (5,0 mg/L) 
deverá ser preparada pelo técnico do laboratório dissolvendo a substância em 
água destilada. 
Objetivo 
Realizar os ensaios de seletividade, precisão e exatidão para a validação 
parcial do método instrumental de quantificação do teor de alaranjado de 
metila em solução. 
Procedimento 
Parte I: Preparo de solução de alaranjado de metila 4,0 mg/L (amostra) 
Com auxílio do professor, calcular a massa a ser pesada de alaranjado de 
metila para a obtenção de 200 mL de solução de amostra na concentração 
4,0 mg/L. 
Em balança analítica ou semi-analítica, pesar a massa de alaranjado de metila 
Abs = _______ x [Concentração] + ______ 
Manual de Estágio 
 
calculada. 
Transferir, quantitativamente, para balão volumétrico de 200 ml. 
Efetuar a dissolução completa pela adição de 100 ml de água destilada. 
Completar o balão volumétrico com água destilada (observando a marca de 
aferição). 
Transferir a solução deamostra 4,0 mg/L para frasco e rotular indicando que 
se trata da solução de amostra preparada pelo grupo. 
Parte II: Ensaio de seletividade 
Nomear dois tubos de ensaio como: 
Tubo A: Amostra (solução preparada pelo grupo na aula prática anterior). 
Tubo B: amostra com adição da solução referência. 
Adicionar, com auxílio de micropipeta automática, 2 mL da solução matriz 
(amostra preparada pelo grupo) no tubo “A”. 
Adicionar, com auxílio de micropipeta automática, 1 mL da solução matriz 
(amostra preparada pelo grupo) no tubo “B”. 
Ao tubo “B”, adicione 1 mL de solução referência em 1 mL de solução matriz 
(amostra preparada pelo grupo). 
Ajustar o comprimento de onda no aparelho para 460 nm. 
Adicionar água destilada à cubeta (branco) e limpá-la com papel-absorvente. 
Ler a absorbância do branco e zerar a escala. 
Com auxílio da micropipeta automática, adicionar a solução do Tubo A à 
cubeta e efetuar a leitura da absorbância. Lavar a cubeta com água destilada. 
Anotar o valor de absorbância indicado pelo aparelho (A) na tabela a seguir. 
Com auxílio da micropipeta automática, adicionar a solução matriz (solução 
de alaranjado de metila preparada pelo grupo) à cubeta e efetuar a leitura no 
aparelho. Lavar a cubeta com água destilada. 
Com auxílio da micropipeta automática, adicionar a solução do Tubo B à 
cubeta e efetuar a leitura da absorbância. Lavar a cubeta com água destilada. 
Anotar o valor de absorbância indicado pelo aparelho (AP) na tabela a seguir. 
 
 
Manual de Estágio 
 
Tabela de resultados 
Tubo Absorbância (A) 
A A= 0,536 
B AP= 0,393 
 P= 0,367 
 
Utilizar os resultados para o cálculo da percentagem de recuperação e 
avaliação da seletividade do método de acordo com a RDC 196/2017, 
utilizando a fórmula a seguir. 
 
AP: concentração para a amostra com adição do padrão de referência. A: 
concentração para a amostra sem adição do padrão de referência. P: 
concentração do padrão de referência. 
No método da adição de padrão, os valores aceitos são entre 80% - 120% de 
recuperação para que o método possa ser considerado seletivo. 
Aula 4 – Avaliação da precisão e exatidão do método 
espectrofotométrico da dosagem de alaranjado de metila 
Observação: a solução de referência de alaranjado de metila (4,0 mg/L) e a 
solução de referência de alaranjado de metila (10 mg/L) deverão ser 
preparadas pelo técnico do laboratório dissolvendo a substância em água 
destilada. 
Objetivo 
Realizar os ensaios de precisão e exatidão para a validação parcial do método 
instrumental. 
Parte I: Ensaio de precisão e exatidão 
Cálculo do teor a 80% da concentração da solução de alaranjado de metila 
com concentração 4,0 mg/L. 
Para analisar uma solução de alaranjado de metila com 80% da concentração 
da amostra preparada pelo aluno (4,0 mg/L) será necessário efetuar uma 
Manual de Estágio 
 
diluição da solução de referência (10 mg/L) de forma a se alcançar uma 
concentração igual a 3,2 mg/L. Para tanto, seguir o procedimento descrito a 
seguir. 
Transferir 64 mL da solução referência (10,0 mg/L) para balão volumétrico de 
200 mL. 
Completar o volume com água destilada. 
Medir três vezes (descartando e colocando novamente a solução na cubeta e 
fa- zendo o ajuste do zero) as absorbâncias das soluções resultantes em 460 
nm, utilizando água destilada para ajuste do zero (branco). 
Registrar as medidas de Absorbância (A) na tabela a seguir. 
Tabela 1: Absorbância obtida pela leitura de solução de alaranjado de metila. 
Replicata (80% da concentração) Absorbância (A) 
1 0,166 
2 0,165 
3 0,169 
Média 0,166 
Concentração (mg/L) 
 
Cálculo do teor a 120% da concentração da solução de alaranjado de metila 
com concentração 4,0 mg/L. 
Para se analisar uma solução de alaranjado de metila com 120% da 
concentração da amostra preparada pelo aluno (5,0 mg/L) será necessário 
efetuar uma diluição da solução de referência (10 mg/L) de forma a se 
alcançar uma concentração igual a 4,8 mg/L. Para tanto, seguir o 
procedimento: 
Transferir 48 ml da solução referência (10,0 mg/L) para balão volumétrico de 
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100 ml. 
Completar o volume com água destilada. 
Medir três vezes (descartando e colocando novamente a solução na cubeta e 
fazendo o ajuste do zero) as absorbâncias das soluções resultantes em 460 
nm, utilizando água destilada para ajuste do zero. 
Registrar as medidas de Absorbância (A) na tabela a seguir. 
Utilizar a equação de reta (curva de linearidade para o alaranjado de metila) 
obtida para converter o valor para concentração de alaranjado de metila na 
solução. 
Tabela 2: Absorbância obtida pela leitura de solução de alaranjado de metila. 
Replicata (120% da concentração) Absorbância (A) 
1 
2 
3 
Média 
Concentração (mg/L) 
Cálculo do teor a 100% da concentração da solução de alaranjado de metila 
com concentração 4,0 mg/L. 
Para se analisar uma solução de alaranjado de metila com 100% da 
concentração da amostra preparada pelo aluno (4,0 mg/L) será necessário 
utilizar a solução preparada pelo grupo e reservada em frasco âmbar. Para 
tanto, seguir o procedimento: 
Medir três vezes (descartando e colocando novamente a solução na cubeta e 
fazendo o ajuste do zero) as absorbâncias das soluções resultantes em 460 
nm, utilizando água destilada para ajuste do zero. 
Registrar as medidas de Absorbância (A) na tabela a seguir. 
Manual de Estágio 
 
Utilizar a equação de reta (curva de linearidade para o alaranjado de metila) 
obtida para converter o valor para concentração de alaranjado de metila na 
solução. 
Tabela 3: Absorbância obtida pela leitura de solução de alaranjado de metila. 
Replicata (100% da concentração) Absorbância (A) 
1 
2 
3 
Média 
Concentração (mg/L) 
 
Utilizar os resultados para o cálculo do coeficiente de variação (CV%) e 
avaliação da precisão do método de acordo com a RDC 196/2017. 
Utilizar os resultados para o cálculo da porcentagem da exatidão do método 
de acordo com a RDC 196/2017. 
 
 
Aula 5 – Análise por cromatografia em camada delgada – Análise 
cromatográfica de ácido acetilsalicílico e paracetamol 
Objetivo 
Avaliar a separação de princípios ativos de ação analgésica pela técnica da 
CCD. Estudar o emprego de técnicas cromatográficas para separação e 
análise de substâncias em função de sua estrutura química e do fenômeno de 
adsorção cromatográfica. Serão analisadas amostras de aspirina, 
paracetamol e coristina D. 
Manual de Estágio 
 
Procedimento 
Parte 1: Preparação das amostras de analgésicos (técnico do laboratório) 
Transferir para béquer, previamente, a amostra triturada de ácido 
acetilsalicílico e paracetamol (substância a ser analisada). Um béquer para 
cada amostra triturada. 
Em capela: a cada béquer, adicionar 10 mL de solução de extração. 
Com auxílio de bastão de vidro, efetuar agitação. 
Levar os béqueres a banho de água e deixar por 5 minutos em aquecimento 
moderado (40 ºC). 
Aguardar a decantação das partículas insolúveis. 
Parte 2: Análise cromatográfica 
O técnico deverá deixar preparada uma cuba contendo a fase móvel (acetato 
de etila com 0,5% de ácido acético glacial). Deverá esperar tempo suficiente 
para que ocorra a completa saturação. Manter a cuba coberta até o momento 
da análise. 
Em uma placa de sílica (2,5 x 7,5 cm), efetue duas marcações (cerca de 1 a 
2 cm da extremidade) indicando o ponto de aplicação da amostra e o ponto 
onde se indicará o final da corrida. 
Utilizando um capilar, aplique duas porções de cada extrato sobre uma placa 
de sílica (2,5 x 7,5 cm) a 1,0 cm de uma das extremidades. 
Colocar cuidadosamente a placa de sílica na cuba, evitando que o ponto de 
aplicação da amostra mergulhe no solvente. 
Aguardar até que o solvente atinja cerca de 0,5 cm do topo da placa, remover 
a placa e marcar a frente do solvente (linha de chegada da fase móvel). 
Para que seja possível a visualização na placa de sílica é necessáriolevar até 
uma lâmpada de UV (utilizar óculos de segurança e obedecer a todas as 
regras de segurança quanto ao uso desse tipo de lâmpada passadas pelo 
professor no momento da visualização). 
Marcar, com auxílio de lápis, o ponto visualizado para cada analgésico após 
a corrida na placa de sílica. 
Com auxílio de régua, determinar a distância de cada ponto e calcular os 
Manual de Estágio 
 
valores de Rf. 
Analise o resultado da CCD e indique qual a molécula presente em cada 
mancha cromatográfica obtida. 
Relacione a molécula ao valor de Rf calculado para cada mancha: 
Molécula Rf 
Paracetamol 10,5/18 = 0,583 
Ácido acetilsalicílico – 14,5 14,5/18 = 0,805 
Principais princípios ativos presentes nos analgésicos: 
 
Acetamenofeno (Paracetamol) 
 
 
 
 
 
Ácido Acetilsalicilico