Roteiro de Aulas Praticas de Imunologia Clinica

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R O T E I R O D E
A U L A S
P R Á T I C A S 
D E
I M U N O L O G I A
C L Í N I C A
S É T I M O S E M E S T R E - C U R S O D E
F A R M Á C I A - U N I V E R S I D A D E D A
A M A Z Ô N I A 
1 ª E D I Ç Ã O - 2 0 2 1 
L E O N A N O L I V E I R A
M I L E N A M A R T I N S
É R I C A C O S T A
Mestre em Ciências
Farmacêuticas
Docente da
Universidade da
Amazônia 
.
Milena 
mARTINS
Discente de Farmácia
na Universidade da
Amazônia
Monitor de
Imunologia Clínica
Leonan
Oliveira
Mestre em Ciências
Farmacêuticas
Docente da
Universidade da
Amazônia 
ÉRICA 
CORDEIRO DE
DA SILVA
COSTA
CRISTINA
VANESSA SOUZA
 Investigar doenças infecciosas e/ou auto-imunes
causadoras de desordens do sistema imunológico através de
métodos laboratoriais de análise de soros e plasmas com
reagentes imunológicos. Proporcionando orientação para
diagnóstico clínico, pesquisas científicas e tratamento
direcionado . 
COMPETÊNCIA DA DISCIPLINA
DE IMUNOLOGIA CLÍNICA
COMPETÊNCIA DO ROTEIRO
DE AULAS PRÁTICAS
 Instruir de forma clara e didática a prática de como
executar os métodos e procedimentos de análise imuno-
laboratorial, utilizando testes para pesquisa de antígeno-
anticorpo ou proteínas. 
2. PESQUISA DE PROTEÍNA C REATIVA (PCR)
2.1. Conceito
2.2. Coleta e Armazenamento
2.3. Procedimento
2.4. Análise do Resultado
3. TESTE RÁPIDO PARA HEPATITE C (FLUXO
LATERAL)
3.1. Conceito
3.2. Coleta e Armazenamento
3.3. Procedimento
3.4. Análise do Resultado
4. TESTE RÁPIDO PARA HIV (DUPLO
PERCURSO)
4.1. Conceito
4.2. Coleta e Armazenamento
4.3. Procedimento
4.4. Análise do Resultado
5. TIPAGEM SANGUÍNEA SISTEMA ABO E RH
5.1. Conceito
5.2. Coleta e Armazenamento
5.3. Procedimento
5.4. Análise do Resultado
6.1. Conceito
6.2. Coleta e Armazenamento
6.3. Procedimento
6.4. Análise do Resultado
6. VDRL
SUMÁRIO
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1. BIOSSEGURANÇA 05
Máscara
Descartável
Luvas
Descartáveis
 Desta forma, a biossegurança deverá ser adotada no
ambiente laboratorial em todas as etapas para realização do
procedimento, desde a coleta, armazenagem, transporte até a
execução da análise. Esta consiste na utilização de
equipamentos de proteção individual (EPI) e/ou equipamentos
de proteção coletiva (EPC).
Jaleco ou Capote
Descartável
 Biossegurança é o conjunto de medidas adotadas para
minimizar riscos e promover segurança, prevenção e proteção
durante a realização de um procedimento, método ou serviço
de modo individual e/ou coletivo.
1. BIOSSEGURANÇA
Sapato Fechado
Calça 
 Comprida
 Touca
Descartável
EPI's de uso obrigatório nos laboratórios da Universidade:
 
 O teste de PCR detecta proteína C reativa, que é uma adjuvante mediadora
da fase aguda do processo inflamatório, presente no soro de pacientes. A
partir de partículas de látex estabilizadas e sensibilizadas com anticorpo anti-
proteína C-reativa, é possível detectar a proteína quando estiver em
concentração maior do que 6,0 mg/L através da reação de aglutinação.
 Coleta-se uma amostra de sangue
do indivíduo (não precisa estar em
jejum) que deverá ser armazenada em
um tubo para separação do soro
(com ou sem ativador de coágulo), e
centrifugado após coleta. 
 Seu armazenagem deve ser em
ambiente refrigerado por até 2 dias
em temperatura de 2-8 ºC. 
TESTE QUANTITATIVO
a) Homogeneizar a suspensão de látex
e pipetar 25μl na mesma área da
amostra. 
b) Pipetar 25μl das amostras (soro do
paciente) em uma área do cartão-
teste. 
c) Misturar bem com o uso de vareta
plástica em movimentos circulares. 
d) Após DOIS minutos, observar
(movimentando o cartão) se houve ou
não aglutinação, comparando a
amostra do paciente com os
resultados obtidos com o controle
positivo e controle negativo.
 
TESTE SEMI-QUANTITATIVO
a) Preparar diluições seriadas do soro
(1/2,1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64) utilizando
solução salina. 
b) Homogeneizar a suspensão de látex e
pipetar 25μl na mesma área da amostra. 
c) Pipetar 25μl das amostras (soro do
paciente) em uma área do cartão-teste. 
d) Misturar bem com o uso de vareta
plástica e/ou em movimentos circulares. 
e) Após DOIS minutos, observar
(movimentando o cartão) se houve ou
não aglutinação. 
Será considerado título a maior
concentração da amostra que
apresentar aglutinação macroscópica.
2. PESQUISA DE PROTEÍNA C REATIVA (PCR)
COLETA E ARMAZENAMENTO
CONCEITO
PROCEDIMEN
TO
O sangue deverá 
ser centrifugado e
utilizado apenas o
soro.
CITRATO
DE
SÓDIO
CITRATO
DE
SÓDIO
SORO: COM
OU SEM
ATIVADOR DE
COÁGULO
HEPARINA
EDTA
FLUORETO
DE 
SODIO
Resultado Negativo:
Resultado Positivo:
Calculo de concentração de PCR: 
6 x 8 = 48mg/L.
Total ausência de aglutinação. Concentração inferior
a 6mg/L.
Aglutinação tênue ou nítida.
Concentração (mg/L) = 6xD, onde 6 é a sensibilidade
do teste e D, a maior diluição que apresenta
aglutinação.
EXEMPLO: Se o título obtido for 1:8, a concentração
aproximada de PCR existente na amostra será: 
 
 
[ ANÁLISE DO RESULTADO ]
Cartão de Teste de PCR
 NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO
Sempre leia e siga as orientação do manual de instruções
do fabricante do teste.
3. TESTE RÁPIDO DE HEPATITE C
 
COLETA E ARMAZENAMENTO
CONCEITO
PROCEDIMEN
TO
 Por tratar-se de uma teste rápido, a sua
realização não necessita de armazenamento
prévio de amostra.
 Para a coleta da amostra por punção digital
utiliza-se uma lanceta descartável (dispositivo
utilizado para perfurar o tecido do dedo) para
fazer uma pequena perfuração no dedo do
paciente. Em seguida, com a ajuda de um tubo
capilar ou micropipeta descartável é feita a
coleta desta amostra de sangue para realização
do exame. A amostra também pode ser obtida
por punção venosa com auxilio de uma seringa
e agulha.
 O teste rápido para hepatite C baseia-se na tecnologia de imunocromatografia e
utiliza membrana de nitrocelulose que permite a detecção de anticorpos anti-HCV
ou antígenos como o HbsAg no soro ou sangue total. Trata-se de um teste
qualitativo, baseado na combinação de antígenos de HCV ligados a uma membrana
(fase sólida), anticorpos específicos e um conjugado com partículas de ouro coloidal,
que é o revelador do resultado do teste.
Micropipeta Descartável
Tubo Capilar
Lanceta Descartável
a) Faca a punção digital ou venosa. 
b) Com auxilio de uma pipeta ou capilar colete a amostra e coloque-a no
poço da amostra de acordo com a quantidade preconizada pelo
fabricante. 
c) Adicione duas gotas da solução tampão presente no kit no poço do
dispositivo de teste. 
d) Acione o cronômetro após a colocação do diluente e faça a leitura do
teste entre 10 e 25 minutos.
e) Interprete o resultado do teste levando em consideração as
informações fornecidas pelo fabricante que validou o método.
Resultado Invalido:
Se a linha de controle (C) não aparecer dentro do tempo
estabelecido pelo fabricante para leitura do resultado – isto é,
após 10 minutos da adição do tampão de corrida –, o teste não
será considerado válido, mesmo que a linha roxa/rosa na área de
teste (T) apareça.
Resultado Reagente:
Quando o resultado for
reagente, aparecerão duas
linhas de coloração roxa/rosa:
uma na área de controle (C) e
uma na área de teste (T).
 
 Resultado Não Reagente:
Quando o resultado for não
reagente, aparecerá somente uma
linha roxa/rosa na área de controle
(C) e não aparecerá nenhuma linha
na área de teste (T).
[ ANÁLISE DO RESULTADO ]
Sempre leia e siga as orientação do manual de instruções
do fabricante do teste.
4. TESTE RÁPIDO DE HIV (DUPLO PERCURSO)
 
CONCEITO
 O teste rápido para HIV (Human Immunolodeficienccy Virus) de fluxo lateral,
baseia-se na tecnologia de imunocromatografia e utiliza plataforma de duplo
percurso que permite detecção de anticorpos específicos para o HIV-1 e HIV-2.
Trata-se de um teste qualitativo, baseado na combinação de antígenos de HIV-1 e
HIV-2 ligados a uma membrana (fase sólida), anticorpos específicos e um conjugado
com partículasde ouro coloidal, que é o revelador do resultado do teste.
 Por tratar-se de uma teste rápido, a sua
realização não necessita de armazenamento
prévio de amostra.
 Para a coleta da amostra por punção digital
utiliza-se uma lanceta descartável (dispositivo
utilizado para perfurar o tecido do dedo) para
fazer uma pequena perfuração no dedo do
paciente. Em seguida, com a ajuda de um tubo
capilar ou micropipeta descartável é feita a
coleta desta amostra de sangue para realização
do exame. A amostra também pode ser obtida
por punção venosa com auxilio de uma seringa
e agulha.
a) Insira a amostra no poço 1.
b) Adicione duas gotas da solução no poço 1 do dispositivo de teste. 
c) Acione o cronômetro e marque 5 minutos. Observe que na janela de
leitura existem duas linhas: uma linha azul na área de teste (T) e uma
linha verde na área de controle (C). Após os 5 minutos, essas linhas
deverão desaparecer.
d) Em seguida, com o frasco do tampão na posição vertical e, sem tocar
o dispositivo do teste, adicione quatro gotas de tampão de corrida ao
poço 2.
e) Acione o cronômetro, após a colocação do diluente e faça a leitura do
teste entre 10 e 25 minutos ou de acordo com a orientação do
fabricante.
COLETA E ARMAZENAMENTO
PROCEDIMEN
TO
Lanceta Descartável
Micropipeta Descartável
Tubo Capilar
[ ANÁLISE DO RESULTADO ]
Resultado Reagente:
Quando o resultado for
reagente, aparecerão duas
linhas de coloração roxa/rosa:
uma na área de controle (C) e
uma na área de teste (T).
 
 
Resultado Não Reagente:
Quando o resultado for não
reagente, aparecerá somente uma
linha roxa/rosa na área de controle
(C) e não aparecerá nenhuma linha
na área de teste (T).
Resultado Invalido:
Se a linha de controle (C) não aparecer dentro do tempo
estabelecido pelo fabricante para leitura do resultado – isto é,
após 10 minutos da adição do tampão de corrida –, o teste não
será considerado válido, mesmo que a linha roxa/rosa na área de
teste (T) apareça.
Sempre leia e siga as orientação do manual de instruções
do fabricante do teste.
 Para realização do teste no momento
da coleta se faz necessário três gotas de
sangue sobre uma lâmina de vidro limpa
e identificada para a detecção de
antígenos do sistema ABO e Rh.
 Nos casos de teste não realizados no
mesmo momento, deverá ser coletado
uma amostra de sangue por punção
venosa disposta em tubo com
anticoagulante e refrigerada até o
momento da realização do exame. 
a) Colocar uma gota do reagente Anti-A no
lado esquerdo da lâmina e uma gota de
reagente Anti-B no lado direito. Em uma
segunda lâmina, colocar uma gota de
reagente Anti-D. 
b) Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias
a cada reagente.
 
CONCEITO
 O teste de tipagem sanguínea baseia-se na reação de aglutinação
que permite a identificação da presença dos antígenos de membrana de
hemácias do sistema ABO e Rh. Desta forma, indica o tipo antigênico de
um indivíduo, provenientes do cruzamento genético de antígenos do pai
e da mãe.
5. TIPAGEM SANGUÍNEA (SISTEMA ABO E Rh)
COLETA E ARMAZENAMENTO
PROCEDIMEN
TO
Lâmina de Vidro 76x26
c) Misturar o reagente com as hemácias em uma área de 2x3 cm.
Movimentar delicadamente a lâmina para promover a mistura e
examinar a presença ou não de aglutinação macroscópica. A
aglutinação se inicia em poucos segundos. 
 O resultado deverá
ser considerado quando
houver a presença de
aglutinado sobre a
lâmina, atestando a
presença do antígeno
pesquisado, como
demonstra o teste
controle.
[ ANÁLISE DO RESULTADO ]
Não observar a lâmina
por mais de 2 minutos,
quando não houver
aglutinação.
#CURIOS
IDADE
PROCEDIMEN
TO
TESTE QUALITATIVO
a) Pipetar 25μl das amostras (soro
do paciente) em uma cavidade da
placa escavada (placa de Kline).
b) Dispensar 25μl da suspensão
antigênica (reagente) sobre a
amostra.
c) Colocar a placa em um agitador
mecânico ou agitar durante 4
minutos.
d) Após quatro minutos, observar
o resultado ao microscópio
utilizando o aumento de 40x.
TESTE SEMI-QUANTITATIVO
a) Preparar diluições seriadas do soro
(1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64)
utilizando solução salina.
b) Pipetar 50μl das amostras em uma
cavidade da placa escavada.
c) Dispensar 50μl da suspensão
antigênica na mesma área da amostra.
d) Colocar a placa em um agitador
mecânico ou agitar durante 4 minutos.
e) Após quatro minutos, observar o
resultado ao microscópio utilizando o
aumento de 40x.
f) Será considerado título a maior
concentração da amostra que
apresentar aglutinação macroscópica.
6. VDRL - VENEREAL DISEASE RESEARCH LABORATORY
 
 Detectar anticorpos inespecíficos, não treponêmicos, presentes no soro de
pacientes com infecção sifilítica. Partículas de colesterol revestidas com
cardiolipina e lectina reagem com os anticorpos presentes na amostra,
resultando em floculação que pode ser observada microscopicamente.
COLETA E ARMAZENAMENTO
CONCEITO
 Placa de Kline
O sangue deverá 
ser centrifugado e
utilizado apenas o
soro.
 Coleta-se uma amostra de sangue
do indivíduo (não precisa estar em
jejum) que deverá ser armazenada em
um tubo para separação do soro (com
ou sem ativador de coágulo), e
centrifugado após coleta. 
 Seu armazenagem deve ser em
ambiente refrigerado por até 2 dias
em temperatura de 2-8 ºC. 
Resultado Reativo:
Agregados médios e grandes.
Resultado Não Reativo:
Ausência de agregados,
aspecto homogêneo.
[ ANÁLISE DO RESULTADO ]
POSITIVO NEGATIVO
 Após o preparo da amostra na placa de Kline, esta deverá ser
observada em microscópio óptico com lente de aumento de 40x.