testes de aglutinacao

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ENSAIOS DE 
AGLUTINAÇÃO
Professora Me.: Milena Martins
Aglutinação: 
• Formação de redes de células ou partículas inertes
interligadas por anticorpos, que se combinam
simultaneamente com dois determinantes antigênicos nas
superfícies de células ou partículas adjacentes.
• Formação de agregados visíveis: interação de anticorpos
específicos e partículas insolúveis.
• Utilizado no diagnóstico de vírus, bactérias, protozoários e
fungos; doenças auto-imunes; detecção de hormônios e
tipagem de grupos sanguíneos.
• Fácil execução (leitura visual) e baixo custo,
Reação de aglutinação direta 
• Antígeno faz parte naturalmente da célula, e haverá
aglutinação dessas células promovida por anticorpo contra
esses antígenos
• Hemácias, bactérias, fungos, protozoários podem ser
aglutinados diretamente por anticorpo.
• Ex: Sistema ABO/Rh e teste de Coombs direto
Sistema ABO
Sistema ABO
• A definição do grupo sanguíneo de um indivíduo se dá 
por duas provas:
• Prova Direta (ou Beth-Vincent): pesquisa dos antígenos fixados 
nas hemácias do paciente. Deve ser feita com soro Anti-A e Anti-B.
• Prova Reversa (ou prova de Simonin): pesquisa do anticorpo no 
soro do paciente. Deve ser feita com hemácias tipadas A e B, com 
atenção para o fato de que o anticorpo B costuma ser mais fraco 
(título fraco) que os demais anticorpos.
• A prova reversa é uma contra-prova fundamental para a 
conclusão do exame.
Sistema Rhesus – Rh (D)
• O fator Rh é um dos dois grupos de antígenos eritrocitários 
de maior importância clínica, estando envolvido nas 
reações transfusionais. 
Sistema Rhesus – Rh (D)
• Pesquisa D fraco e Controle: devem ser feitos, quando na 
classificação do Rh (D) existe ausência de aglutinação (negativa). 
Sua finalidade é detectar o anticorpo fracamente formado, devido a 
sua transmissão genética. Nesta prova é necessário usar técnicas 
mais sensíveis (Técnica do Coombs Indireto) para confirmar sua 
positividade ou negatividade.
• Controle Rh: é um reativo controle com ausência de anticorpo Anti-D
e de qualquer outro tipo de anticorpo para todos os sistemas 
eritrocitários. Este reativo controle tem por finalidade detectar erros 
ou patogenias existentes no paciente que resulte numa reação 
positiva do controle. 
Sistema Rhesus – Rh (D)
Teste de Coombs
• Anticorpos anti-imunoglobulinas 
(Robert Coombs);
• Para o diagnóstico de anemia 
hemolítica autoimune ou 
induzida por medicamentos, 
reação transfusional ou anemia 
hemolítica do recém-nascido 
(DHRN).
• Direto: Anticorpos ligados aos 
eritrócitos fetais;
• Indireto: Anticorpos anti-Rh 
não aglutinantes no soro 
materno.
Teste de Coombs
Teste de Coombs
• Baseia-se na capacidade que certos antígenos virais têm
de aglutinarem hemácias. Os anticorpos, se presentes na
amostra, revestem as partículas virais, resultando na
inibição da aglutinação, indicando um teste positivo para
a presença de anticorpos
• Anticorpos + Vírus = Ausência de Aglutinação (positivo 
para presença de Ac na amostra) 
• Ex.: Rubéola, Sarampo, Influenza.
Inibição da hemaglutinação direta por 
vírus: 
Inibição da hemaglutinação direta por 
vírus: 
Teste de aglutinação indireta: 
• (Antígeno + Partícula Inerte) + 
Anticorpo = Aglutinação. 
• Partículas inertes podem ser 
sensibilizadas por adsorção 
passiva (contato direto com o 
antígeno solúvel), por 
adsorção via agente químico 
(ácido tânico e cloreto de 
cromo), por conjugação do 
Antígeno (ligações químicas 
covalentes).
• Adsorção de Antígeno solúvel
Hemaglutinação passiva ou indireta: 
• Proteínas podem ser adsorvidas a hemácias tratadas 
com ácido tânico e podem ser aglutinadas por Ac 
específicos. 
• Geralmente é utilizado hemácias de carneiro ou humanas 
do grupo O. 
• O teste considerado positivo: verifica formação de tapete 
cobrindo o fundo da cavidade da placa em “V” (título será 
a máxima diluição em que se observa a formação de 
tapete). 
• Enquanto que o teste será considerado negativo quando 
hemácias sedimentam formando “botão” compacto. 
• Ex.: Pesquisa de anticorpo para Trypanosoma cruzi, 
Toxoplasma gondii.
Hemaglutinação passiva ou indireta: 
Hemaglutinação passiva ou indireta: 
Hemaglutinação passiva ou indireta: 
Diluições seriadas
Inibição da aglutinação indireta: 
• Baseia-se na competição, pelos sítios de combinação 
do Ac, entre o Ag fixado à uma célula ou partícula e o 
Ag solúvel. 
• O grau de inibição relaciona-se com a quantidade do 
Ag presente na amostra e com a afinidade pelos sítios 
de combinação do anticorpo. 
• Ex.: Detecção de Ag na hepatite e na hemofilia e 
presenca de hCG na urina.
Inibição da aglutinação indireta: 
Aglutinação do látex 
• Partículas de látex são esferas de poliestireno que podem 
ser utilizadas como suportes na adsorção de proteína 
solúvel e antígenos polissacarídicos, funcionando como 
sistema indicador da reação antígeno-anticorpo
• Útil na pesquisa de:
• Fator reumatóide;
• Antígenos bacterianos (Haemaphilus influenzae, estreptococos do 
grupo B, Neisseria meningitidis, etc.);
• Drogas e hormônios (�-HCG);
• Proteína C reativa;
Fator reumatóide
• O termo fator reumatóide (FR) 
engloba um grupo de auto-
anticorpos das classes IgG, IgM
e IgA que tem em comum a 
capacidade de reagir com 
diferentes epítopos da porção 
Fc da molécula da 
imunoglobulina G (IgG) 
humana. 
• Típico no processo patológico 
da artrite reumatóide
• O FR IgM pode servir como 
marcador precoce na AR.
Fator reumatóide e prova do látex 
• Detecção de anticorpo IgM
(pentamérico) dirigido 
contra a Fc do anticorpo 
IgG.
• Emprega partículas de látex 
revestidas por 
imunoglobulina G humana 
que reagem contra o FR, 
resultando em aglutinação. 
• Se não houver aglutinação, 
resultado negativo.
Reação de Waller-Rose
• Hemaglutinação indireta:
hemácias de carneiro, 
revestidas por 
imunoglobulina de coelho. 
• Teste rápido de aglutinação 
para a determinação 
qualitativa, em placa, de 
Fator Reumatóide. Apresenta 
resultados que podem ser 
positivo, quando na presença 
do Fator, ou negativo, na 
ausência deste.
Proteína C reativa
• A PCR é considerada uma proteína de fase aguda encontrada 
no soro em estados inflamatórios específicos ou não. 
• É detectada sua presença com partículas de látex contendo 
anticorpos anti-proteína C reativa. 
• Necessário fazer diluições, para evitar pró-zona.
Proteína C reativa
Antiestreptolisina O (ASO)
• Este exame mede a quantidade no sangue da 
antiestreptolisina O, um anticorpo contra a estreptolisina
O, uma toxina produzida por Streptococcus do Grupo A. 
• Os estreptococos do Grupo A (Streptococcus pyogenes) 
são bactérias responsáveis por faringites estreptocócicas. 
• Quando uma infecção desse tipo não é tratada de 
maneira ineficaz, podem ocorrer complicações (febre 
reumática e glomerulonefrite).
• O soro é colocado em 
contato com um reagente 
que contém partículas de 
látex revestidas com 
Estreptolisina-O. 
• ASO, se presente na 
amostra, provoca a
aglutinação visível a olho nu 
das partículas do látex. 
• A reação pode ser tanto 
qualitativa como quantitativa 
(através da técnica de 
diluição da amostra). 
Antiestreptolisina O (ASO)
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