Testes imunológicos

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sítio de combinação de anticorpo
reage com mais de um
determinante antigênico
Afinidade
à força de ligação entre um
único determinante
antigênico a um anticorpo
particular
Avidez
à força de ligação entre
antígenos e anticorpos.
Especificidade
Um antígeno reage a apenas
um sítio de um anticorpo
particular
Reação Cruzada
população de moléculas de
anticorpos que reagem com
mais de um antígeno;
X
São sítios nos antígenos aos
quais os receptores das
cél. B ou anticorpos se ligam
Epítopos 
Compartilhado - semelhante em estrutura
Similar- semelhante quimicamente
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
Fatores que afetam a reação
antígeno-anticorpo
 
Razão Ag-Ac: Efeito
pró-zoina
 
Antígeno 
particulado 
Antígeno 
solúvel 
Afinidade Avidez Forma física do Ag
(Solúvel ou
Particulado)
Tamanho dos complexos
está relacionado com a
concentração do antígeno e
do anticorpo
Quanto maior a afinidade
do anticorpo pelo
antígeno, mais estável
será a interação
Reações entre antígenos
multivalentes e anticorpos
multivalentes são mais estáveis
e são mais fáceis de detectar Aglutinação 
 Precipitação
grandes
complexos
antígeno-
anticorpo
insolúveis
Fenômeno pró-zona: excesso de anticorpos
no soro testado, o qual interfere na formação
do complexo antígeno-anticorpo necessário
para que aconteça a reação de floculação.
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
TESTE DE AGLUTINAÇÃO
Formação de agregados grandes devido
a pontes de anticorpos combinadas
com determinantes antigênicos iguais,
que ficam na superfície das células.
Aglutinação indireta (passiva)
 
Fatores que afetam reação de Aglutinação 
 
Aglutinação direta
 
Boa especificidade e reprodutibilidade
Baixa sensibilidade/pouca estabilidade
Ag-Ac
Um antígeno particulado e seu anticorpo
específico
 
Hemoaglutinação
 
Uma partícula inerte e recoberta de
antígeno solúvel e seu anticorpo
específico
partículas usadas forem hemácias com
antígeno adsorvido em sua superfície
Fenômeno Pró –Zona::excesso de Ac levando a
inibição da aglutinação
Anticorpos incompletos ou bloqueadores: soros
que contém Ac IgG, contra hemácias Rh, que são
incapazes de aglutinar.
Tratamento: tripsina, albumina ou usa o Soro de
Coombs
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
 AGLUTINAÇÃO
 Inibição da aglutinação Látex-PCR
Partículas de látex estabilizadas e
sensibilizadas com Ac antiproteína C
reativa humana
Testes limite mínimo de detecção
Podem ser qualitativo ou semi-
quantitativo
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
REAÇÃO DE COOMBSEritroblastose fetal
Detecta anticorpos ligados à superfície das
hemácias
Diagnóstico: doenças autoimunes e eritroblastose
fetal
Soro de Coombs contém anti Ig-Humana
Coombs direto
Mãe Rh- e o feto Rh+
Produz IgM inicialmente que
não atravessa a placenta e
posteriormete IgG que
atravessa a placenta
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REAÇÃO DE COOMBS
Coombs indireto
 Pesquisa-se a
presença de
anticorpos
incompletos ou
imunes presentes
no soro
Soro com Ac +
hemácias
Sensibilização de
hemácias
Soro de Coombs
contém anti Ig-
Humana
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
Veneral Desease Research Laboratory” (VDRL)
Princípio
 Pesquisa-se Ac contra a cardiolipina, presente em
elevados níveis na infecção por Treponema pallidum.
A micropartícula de colesterol tem afinidade pela
cardiolipina
Se houver Ac contra cardiolipina, se forma um
imunocomplexo resultando em floculação
Pode permanecer reagente após a cura da infecção
com quedas progressivas
RN não infectados podem apresentar teste reagente
devido a presença de Ac maternos 
Títulos são considerados positivos quando 1/16 ou
mais;
Negativo Positivo
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
Reação de Fixação de Complemento
Princípio
 IgM, IgG1 e IgG3
 Ag solúveis e particulados 
Utilizam sistema indicador (Hc de carneiro +
Ac específico)
Qualitativos e Quantitativos
A base é o sistema complemento
Se o paciente tem o Ac o contra o Ag, esse Ac
se liga ao Ag, e o complemento se liga o Ac.
Ag+ Ac= Fixação complemento
Quando a hemácia de carneiro e o Ac de
carneiro são colocados, o Ac se liga a hemácia,
porém o sistema complemento não se liga por
já estar ligado ao Ac do soro do paciente, logo
há Ac contra tal Ag
Se não houvesse Ac, o complemento iria se
ligar ao Ac de carneiro, seria ativado e
ocorreria hemólise- resultado negativo
Reação de citotoxicidade: hemólise
é um fenômeno citotóxico
Ex.: Prova de linfotoxicidade 
https://www.youtube.com/watch?v=Vgf8kxLTLoM
Prova Cruzada (Cross match) Clássica Microlinfotoxidade
Princípio
A prova de reação cruzada tem por objetivo
detectar a presença no soro do paciente
anticorpos dirigidos contra os antígenos HLA
do doador potencial. 
Se a reação for positiva (lise celular) o
transplante não é indicado
Se a reação for negativa (ausência de lise
celular) o transplante é indicado
 
Imunofluorescência
Identificar a localização de um antígeno em tecidos ou
células, intracelular ou de membrana. 
Anticorpos ligados a fluorocromos
Fluorocromos: grupos absorvem luz comprimento onda
curto / alta energia
Emitem luz comprimento onda longo/ baixa energia
Ex fluorocromos: fieritrina e vermelho Texas
I. indireta
Busca o Ag
Alto Custo: requer um
conjugado Ac-Fluorocromo
para cada Ag
Ex.: Estreptococcus beta-
hemolíticos, bacilo diftérico. 
Busca o Ac
Mais evidente: várias moléculas do
Ac fluorescente ligam-se a Ig
Pode-se utilizar o mesmo conjugado
para pesquisar Ig em diferentes
reações
 Permite detectar qual a classe de Ac;
Por diluições seriadas do soro em
estudo, tem-se o título da reação. 
Ex.: Toxoplasmose, Sífilis, Chagas,
Anti-DNA
 
Princípio
I. Direta
ELISA - Ensaio de imunossorvente ligado a enzima 
ELISA detecta substância com
propriedades antigênicas
(principalmente proteínas)
 Reação enzimática colorimétrica
Enzima é utilizada para detectar
ligação Antígeno – Anticorpo
Enzima converte o substrato sem
cor em um produto colorido
Princípio
detecção de anticorpo presente na
amostra
ELISA indireto
O antígeno é imobilizado na placa
Primeiro um anticorpo primário é
ligado ao antígeno específico 
Depois é adicionado um segundo
anticorpo ligado à uma enzima que
se liga ao anticorpo primário.
Utilizado principalmente para
detecção de anticorpos
Detecção de antígeno presente na amostra analisada
ELISA direto
ELISA Sanduiche
 Anticorpo é impregnado à
placa
0 antígeno se liga à ele
Posterirormente é adicionado
outro anticorpo ligado à
enzima para se ligar em um
outro epítopo do antígeno e
formar o complexo.
Utilizado principalmente para
detecção de antígenos
1.
2.
3.
ELISA por competição
 O antígeno ou anticorpo está
impregnado à placa
O local de ligação tem a
competição do antígeno ou
anticorpo da amostra com um
outro pipetado no kit.
 
1.
2.
3.
Citometria de Fluxo
As células em suspensão são marcadas com
um marcador fluorescente pela
imunofluorescência direta ou indireta
São analisadas no citômetro de fluxo
Princípio
 Contagem de células
específicas
• HLA
• Sequências genéticas
O citômetro de fluxo permite leituras
em um ou mais comprimento de
onda de modo que diferentes
fluorocromos podem ser usados e
vários
marcadores podem ser medidos
simultaneamente
Aplicação:
1)Preparação das células e
marcação com reagentes
fluorescentes;
2) Processamento das células
marcadas no citômetro de fluxo e
coleta
dos dados;
3) Análise dos dados
ex.: Histogramas,
Quimioluminescência
Quantifica Ag e Ac presente em
fluidos corporais;
 Muito usado para dosagens de
hormônio e marcadores tumorais;
 Método imunológico baseado na
emissão de energia luminosa a partir
de uma reação química (pode ser
enzimática);
 A técnica se baseia na ligação de Ag-
Ac. Um dos dois reagentes é
conjugado a uma substância que,
quando ativada, emite luz visível.
Então, a emissão de luz é
proporcional ao agente pesquisado
Vantagens
Opçãode ensaio com elevada sensibilidade e especificidade adequada;
- Exame automatizado e rápido;
- Várias amostras podem ser analisadas e distintas substâncias investigadas de
uma só vez;
- A técnica se baseia na ligação de Ag-Ac. Um dos dois reagentes é conjugado a
uma substância que, quando ativada, emite luz visíve
Eletroquimioluminescência
Os fótons são medidos através de
um fotomultiplicador que tem a
função de transformar a luz
emitida pelos fótons em impulsos
elétricos.
Estes impulsos são lidos em
contagens de luz por segundo
(cps). Essa unidade é proporcional
a quantidade de Ag na amostra