AULA 7 SEQUENCIAMENTO DE DNA

Esta é uma pré-visualização de arquivo. Entre para ver o arquivo original

Clique para editar o estilo do título mestre
Clique para editar o estilo do subtítulo mestre
*
*
*
SEQUENCIAMENTO DE DNA
*
*
*
Sequenciamento de DNA
*
*
*
*
*
*
Sequenciamento de DNA
Precisa ter um fragmento definido de DNA para ser sequenciado (PCR)
Uso de um primer para “subclonar” o fragmento definido
Separação dos fragmentos subclonados em gel de acrilamida
*
*
*
Sequenciamento de DNA
Método Sanger (19
dideoxinucleotídeos
Síntese de DNA filamentar usando nucleotídeos alterados
*
*
*
Sequenciamento de DNA
Método Sanger
dideoxinucleotídeos
*
*
*
Sequenciamento de DNA
Método Sanger
dideoxinucleotídeos
*
*
*
*
*
*
*
*
*
Ciclo de sequenciamento
http://www.dnalc.org/ddnalc/resources/sangerseq.html
*
*
*
Marcados radiativamente
Sequenciamento manual
Tempo de laboratório grande
Até 200-300 pares de bases
Novidade: marcação dos ddNTPs com fluorescente
*
*
*
*
*
*
Sequenciamento automático
Nucleotídeos marcados 
Com fluorescência
*
*
*
Sequenciamento automático
*
*
*
Ciclo de sequenciamento
http://www.dnalc.org/ddnalc/resources/cycseq.html
*
*
*
Open reading frame (ORF)
*
*
*
Buscando um gene
3 quadros de leitura possíveis
DNA 5’- ACTCGCTAGGCTCAGTCACTGCCTG - 3’
Quadro leitura 1 5’- ACT CGC TAG GCT CAG TCA CTG CCT G - 3’
Quadro de leitura 2 5’- A CTC GCT AGG CTC AGT CAC TGC CTG - 3’
Quadro de leitura 3 5’- AC TCG CTA GGC TCA GTC ACT GCC TG - 3’
*
*
*
Projeto Genoma e o Brasil
1981-1995 	Brasil multiplicou suas 					publicações em Biologia 				molecular num fator
Projeto Genoma-FAPESP
1997 - Projeto Xylella fastidiosa 
US$12 milhões 
Fitopatógeno que afeta a citricultura
200 pesquisadores e 30 instituições
Término – Janeiro de 2000
*
*
*
Projeto Genoma FAPESP
Pela primeira vez em 131 anos, uma pesquisa brasileira foi capa da revista científica britânica Nature
genoma da bactéria - 13 de julho de 2000 
Jornal The Economist: 
“Brasil: samba, futebol... e genômica”
*
*
*
Projeto Genoma e o Brasil
	 Genoma Humano do Câncer
Desenvolvimento de metodologia inovadora
Sequenciamento de somente as porções ativas do genoma, responsável pela produção de proteínas
1 milhão de seqüências de genes ativos em tumores
1999 - FAPESP + Instituto Ludwig
Amplificação de cDNA