04_-_Fibra_bruta

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Universidade Federal de Santa Maria
Centro de Ciências Rurais
Departamento de Tecnologia e Ciência dos Alimentos
Curso de Graduação em Agronomia
Disciplina de Bromatologia Animal
Protocolo de Protocolo de 
Fibra BrutaFibra Bruta
Professor: Renius Mello
by Prof. Renius Mello
1. Objetivo
‰ Determinar a fibra bruta (FB) em alimentos para animais.
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2. Método
‰ Análise de fibra em cadinho poroso (AOAC 978.10)p ( )
‰ Análise de fibra em saco filtrante (AOCS Ba 6a-05)
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3. Escopo
‰ Este método é aplicável para a determinação da fibra
bruta em amostras secas e desengorduradas de
forrageiras, grãos, farelos, farinhas, alimentos mistos eo age as, g ãos, a e os, a as, a e tos stos e
pet foods.
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4. Princípio básico
‰ É definida como o resíduo de células vegetais apósg p
extração por hidrólise ácida e alcalina.
N di t d ã i i t t é‰ No procedimento padrão, primeiramente a amostra é
fervida em ácido diluído e após em álcali diluído.
‰ A hidrólise ácida remove açúcares livres e amido.
‰ A hidrólise alcalina elimina proteína e alguns carboidratos. Este‰ A hidrólise alcalina elimina proteína e alguns carboidratos. Este
processo também remove parte da hemicelulose e da lignina,
portanto, apenas a recuperação parcial dos componentes fibrosos é
obtida.
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5. Equipamentos
‰ Aparelho digestor com condensador de refluxop g
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7Foto: Digestor de fibras (aquecedores/fogão + condensador) para béqueres de 600 mL
8Foto: Digestores de fibra para cadinhos filtrantes
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5. Equipamentos
‰ Dispositivo de filtragemp g
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5. Equipamentos
‰ Dispositivo de filtragem (kitassato + bomba vácuo)p g ( )
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5. Equipamentos
‰ Béqueres de 600 mL, forma alta
‰ Estufa de secagem por convecção à 105±2ºC e forno
mufla à 600±15ºCmufla à 600±15ºC
‰ Balança analítica com sensibilidade de 0,1 mg‰ Balança analítica com sensibilidade de 0,1 mg
‰ Dessecador e pinça/tenazç
‰ Funil de Buchner ou cadinho de Gooch filtrante de
l â i / l filt (Wh t 541porcelana + cerâmica/papel filtro (Whatman 541 ou
equivalente)/cadinho filtrante de vidro de 50 mL 11
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6. Reagentes
‰ Éter de petróleo (opcional)p ( p )
‰ Solução de ácido sulfúrico 1,25% (0,255±0,005N)
‰ 1,25 g H2SO4/100 mL ou 7 mL H2SO4/1.000 mL
ã ó ó‰ Solução de hidróxido de sódio 1,25% (0,313±0,005N)
‰ 1 25 g NaOH/100 mL ou 12 5 g NaOH/1 000 mL‰ 1,25 g NaOH/100 mL ou 12,5 g NaOH/1.000 mL
‰ Deve ser livre de carbonato de sódio - Na2CO3
OBS.: Checar a concentração das soluções por titulação
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6. Reagentes
‰ Antiespumante (opcional):p ( p )
‰ Álcool octílico (C8H18O);
‰ Álcool amílico (C5H12O); ou
‰ Silicone‰ Silicone.
‰ Álcool etílico/etanol à 95% v/v (C2H5OH)‰ Álcool etílico/etanol à 95% v/v (C2H5OH)
‰ Acetona (C3H6O)
‰ Solução de ácido clorídrico à 1% v/v (opcional) 13
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7. Precauções de segurança
‰ Elaborar as soluções na capela de exaustão de gasesç p g
utilizando avental, óculos e luvas de proteção
U di d ã d d b lh‰ Use os procedimentos padrão de quando se trabalha
com equipamentos elétricos ou de vidroq p
‰ Certifique-se que todos os equipamentos elétricos
t j d id t i t l d f i destejam devidamente instalados e funcionando
adequadamente
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8. 
Procedimento/marcha/roteiro
I. Pesar ± 2 g de amostra seca previamente desengordurada no
Soxhlet (P1), registrar o peso, e colocar no béquer.
II Adicionar 200 mL da solução de H2SO 1 25% fervente noII. Adicionar 200 mL da solução de H2SO4 1,25% fervente no
béquer, acoplar no condensador, ligar a água e o aquecimento.
Adicionar anti-espumante se necessário Proceder a digestãoAdicionar anti espumante se necessário. Proceder a digestão
ácida por 30 min. após início da fervura em refluxo. Agitar o
béquer periodicamente para remover as partículas aderidas nabéquer periodicamente para remover as partículas aderidas na
parede de vidro.
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8. 
Procedimento/marcha/roteiro
III. Decorrida a digestão ácida, proceder a filtragem do material
em papel filtro pré-aquecido com água quente (funil de
Buchner). A filtração deve ser realizada em menos de 10 min.
Lavar o papel filtro com água fervente.
IV Transferir o resíduo da filtração para o béquer utilizando 200IV. Transferir o resíduo da filtração para o béquer utilizando 200
mL da solução de NaOH 1,25% fervente, retornando
quantitativamente o material da digestão ácida retido no papelquantitativamente o material da digestão ácida retido no papel
filtro para o béquer. Proceder a digestão básica por mais 30
min em refluxo (como no passo II)min. em refluxo (como no passo II).
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8. 
Procedimento/marcha/roteiro
V. Pesar o papel filtro previamente seco em estufa e resfriado
em dessecador (P2). – Ou –
9 Cadinho de porcelana com amianto/cadinho de vidroCadinho de porcelana com amianto/cadinho de vidro
VI. Pré-aquecer o agente filtrante (papel filtro) com água
t filt i t hid li d di tã bá i lquente, filtrar a mistura hidrolizada na digestão básica, lavar o
resíduo com água fervente, com solução de HCl 1%, e
t á f t té H t ál lnovamente com água fervente até pH neutro, álcool,
terminando com três lavagens de éter de petróleo ou uma de
acetonaacetona.
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8. 
Procedimento/marcha/roteiro
VII. Secar o agente filtrante em estufa à 105º por 12 horas,
esfriar em dessecador, e pesar (P3). – Ou –
9 Incinerar na mufla à 550°C por 3 horas, esfriar, e pesar. O pesoIncinerar na mufla à 550 C por 3 horas, esfriar, e pesar. O peso
perdido na incineração é calculado como fibra bruta.
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9. 
Comentários/Considerações
‰ O tamanho de partículas influencia no teor de fibra.p
‰ Amostras ricas em gordura devem ser previamente
d d d i ifi ã fdesengorduradas para evitar a saponificação na fase
alcalina e, conseqüentemente, prevenir a formação deq p ç
espuma.
Eb li ã it f t di i i tid d d fib‰ Ebulição muito forte diminui a quantidade de fibra.
‰ As filtrações sob vácuo devem ser efetuadas o mais‰ As filtrações sob vácuo devem ser efetuadas o mais
rápido possível, sem deixar o material esfriar. 19
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10. Cálculos
‰ Dados:
Cartucho + MS = 2,8991 Papel + FB = 1,2885
Cartucho vazio = 0 7526 Papel vazio = 0 7206Cartucho vazio = 0,7526 Papel vazio = 0,7206
MS = 2,1465 FB = 0,5679
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10. Cálculos
‰ PI:
2,1465 g MS 0,5679 g FB
34 40 % MS X34,40 % MS X
X = 9,10% de FB no PI
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10. Cálculos
‰ MS:
2,1465 g MS 0,5679 g FB
100 % MS X
X = 26,45% de FB na MS
34 40 % MS 9 10 % FB34,40 % MS 9,10 % FB
100,00 % MS X
X = 26,45% de FB na MS
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10. Cálculos
‰ Percentagem de FB em base seca:g
Onde:Onde:
P1 = peso da amostra em g
P2 = peso da tara do agente de filtração em gP2 = peso da tara do agente de filtração em g
P3 = peso do agente de filtração mais resíduo seco em g 23
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13. Controle de qualidade
‰ Incluir uma ou mais amostras como controle de
qualidade (QC) e um branco de reagente em cada
corrida. Incluir pelo menos uma duplicata em cadacorrida. Incluir pelo menos uma duplicata em cada
corrida se determinações únicas estão sendo feitas.
‰ O desvio padrão médio aceitável entre as análises de
replicatas para FB é ± 0,10, resultando em limite dereplicatas para FB é ± 0,10, resultando em limite de
alerta (2s) de ± 0,20 e um limite de controle (3s) de ±
0 300,30.
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13. Controle de qualidade
‰ Plotar os resultados da amostra(s) QC em um gráfico( ) Q g
e examinar as tendências:
R lt d f d i t l d fi d 95% ( 2 ) id i‰ Resultados fora do intervalo de confiança de 95% (± 2s) evidenciam
possíveis problemas com o sistema analítico.
‰ Resultados fora dos limites de confiança de 99% (± 3s) indicam
perda de controle, e os resultados do teste devem ser descartados.‰ A queda de duas análises consecutivas em um lado da média entre
os limites de alerta e de controle também indicam perda de controle.
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Dúvidas?
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Foto: A-200/A220 (Ankom) Foto: A-2000 (Ankom)