Relatório aula prática de microbiologia de alimentos (1)

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UNIVERSIDADE PAULISTA – UNIP
 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS
 
CURSO: Farmácia 
DISCIPLINA: Microbiologia de alimentos
NOME DO ALUNO: Andrieli Do Nascimento Schmidt
R.A: 0418658
POLO: Itaipulândia - Pr
DATA: 05 / 03 / 2023
 UNIP 2023
 INTRODUÇÃO 
 As aulas práticas de métodos instrumentais de análises foram realizadas com o 4º e 5º período do curso de farmácia, nos dias 25 e 04 de março de 2023, no laboratório da UNIP CESUFOZ na cidade de FOZ DO IGUAÇU, no período da manhã das 8:30 às 12:00 e a tarde das 13:00 às 17:00. Para iniciar as aulas, vestimos de maneira adequada e individual, calça comprida, calçado fechado, cabelos presos, uso do jaleco, luva e touca, que são as normas de segurança obrigatória em um laboratório. As aulas laboratoriais foram baseadas no material que está disponível no AVA na matéria de microbiologia de alimentos, contém quatro aulas com dois roteiros cada com instruções sobre cada experimento a ser executado, que foram seguidos passo a passo.
 Nas aulas foram abordados os conceitos básicos referentes a microbiologia de alimentos. A microbiologia de alimentos está ligada a três aspectos fundamentais: o controle de transmissão através dos alimentos, a preservação de alimentos pelo emprego de microrganismos, detecção e prevenção de intoxicação produzidas através dos microrganismos. Podemos classificar em três grupos as principais funções muito importantes para o alimento desempenhados pelos microrganismos dependendo do tipo de interação entre ambos: microrganismos que alteram os alimentos, microrganismos causadores de doenças, microrganismos que causam alterações benéficas para o alimento. Bactérias, fungos (bolores e leveduras) e vírus são os microrganismos de interesse aos alimentos e as suas principais fontes de contaminação são água e solo, utensílios, manipulação de alimentos, pele de animais, plantas, trato intestinas, ração animal, ar e pó. Sua capacidade de sobrevivência depende de uma série de fatores dentre eles o fator intrínsecos e extrínsecos. Os fatores intrínsecos estão relacionados com os fatores internos dos alimentos, ocasionando alterações no aroma, sabor e composição dos nutrientes nos alimentos. Os principais fatores intrínsecos são: fatores antimicrobianos naturais, pH, estrutura biológica, atividade de água, composição química. Os fatores extrínsecos são fatores relativos ao ambiente que cerca o alimento e poderão atuar positiva ou negativamente sobre os microrganismos, dentre eles são a temperatura, microrganismos indicadores, indicação de contaminação fecal ou da qualidade higiênica sanitária do alimento, composição gasosa. No processo de conservação dos alimentos são usados substâncias ou métodos que impedem o crescimento dos microrganismos, baseia-se na destruição total ou parcial alternado o alimento, alguns deles são uso de calor, uso de frio, conservação pelo uso de sal ou açúcar, fermentação, uso de aditivos, irradiação, defumação. Os perigos são classificados como biológico, químico e físico, os biológicos são as bactérias, fungos, vírus e parasitas, os físicos são representados por objetos ou materiais estranhos que causam danos ao consumidor, e os químicos são contaminantes da natureza química. (LUIS, 2023).
 O exame microbiológico de um alimento nos indicara informações sobre a qualidade da matéria prima usada, sanitização da manipulação ao longo do processamento, adequação das técnicas usadas na preservação do produto e a eficiência das operações de transporte e armazenamento do produto final, assim será possível uma estimativa da sua vida útil ou na prateleira, pela pesquisa de patógenos ou indicadores de poluição fecal é possível evidenciar os riscos à saúde proveniente de seu consumo. Os indicadores de condições higiênicos dos alimentos são as seguintes: contagem padrão em placas, contagem de bolores e leveduras, coliformes totais, indicadores de contaminação fecal. (LUIS,2023).
 
 RESULTADOS E DISCUSSÃO
AULA 3
ROTEIRO 1
 Título da aula: Análise Microbiológica da água: contagem padrão de bactérias heterotróficas por Pour Plate. Esta aula teve como objetivo realizar o método de contagem microbiana, principalmente as bactérias aeróbias mesófilas, em amostras de água utilizando-se de técnicas de semeadura em profundidade e saber interpretar os resultados obtidos considerando os parâmetros nacionais para a potabilidade de água.
 Materiais utilizados: garrafa de água mineral, placas de Petri, pipeta graduada 5 ml, bico de Bunsen, Plate Count ágar, estufa bacteriológica, contador de colônia, Tiossulfato de sódio a 10%, Béquer 200 ml, banho-maria 44 ºC.
 Iniciamos o experimento transferimos com uma pipeta estéril 1 ml da água mineral em duplicata para uma placa de petri previamente esterilizada, abrimos a placa e adicionar o meio de cultura, previamente fundido e já estabilizado em banho-maria a 44 ºC, foi homogeneizado o conteúdo da placa em movimentos circulares moderados em forma de infinito aproximadamente 10 vezes, deixar parado até se solidificar e logo em seguida foi incubado a placa em posição invertida a 0,5 º C, – no final do experimento foi feito a contagem das colônias com o auxílio de um contador de colônias que foi superior a 100 o número de UFC/ml.
A seguir fotos registradas durante o experimento.
 
Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. 
Questões para a fixação do conteúdo
1) Comente sobre a gravidade da detecção de coliformes fecais em água e em alimentos. Pode afetar a saúde do indivíduo causando infecções e intoxicação alimentar além de provocar sintomas como vomito, diarreia e desidratação.
2) Analisando o método anterior, comente sobre a sua especificidade. O meio de cultura Plate Count ágar é um meio seletivo para o cultivo de bactérias laticínios (lactobacilos spp., Streptococcus spp., enterococos spp.) presentes no queijo e iogurte também pode ser usado para o cultivo dos outros microrganismos que produzem ácido láctico.
3) Existe o risco de resultados falso-positivos? Explique. Sim, pode ser influenciado pelos materiais contaminados no nosso caso o bebedouro pode estar contaminado.
AULA 3
ROTEIRO 2
 Título da aula: Análise microbiológica da água: detecção de coliformes fecais. Esta aula teve como objetivo mostrar ao aluno a técnica de detecção de amostras de coliformes fecais em água.
 Materiais utilizados: tubos de ensaio de vidro, Meio Caldo Lauril Triptose, Meio EC, Meio EMB, Bico de Bunsen, banho-maria 44,5 ºC, estufa bacteriológica, pipeta 10 ml, placas de Petri, tubos de ensaio de vidro, caneta para vidro.
 Iniciemos o procedimento identificando 3 tubos de ensaio como A, B e C. no tubo A foi adicionado 10 ml de Caldo Lauril Triptose mais 10 ml da amostra que é Escherichia Coli, no tubo B foram 9 ml de Caldo Lauril Triptose mais 1 ml da amostra, no tubo C foram 9,9 ml de Caldo Lauril Triptose mais 0,1 ml da amostra, em seguida foi encubado a 37 °C, por 48 horas. Não foi visualizado a presença de gás em nem um dos tubos inoculados, foi utilizado os tubos A e B nos próximos procedimentos experimentas porque ouve turvação.
TESTE PARA O GRUPO DE COLIFORMES FECAIS
 Transferimos uma alçada de todos os tubos do teste presuntivo que deram um resultado positivo que foram A e B para os tubos contendo 5 ml do meio EC, incubemos os tubos em banho-maria, a 44,5 °C por 48 horas. 
DIFERENCIAÇÃO DE BACTÉRIAS DO GRUPO COLIFORME
 Foi Inoculado por esgotamento, a partir dos tubos positivos A e B de meio EC, uma placa com meio EMB, incubemos as placas invertidas por 24 horas. As placas apresentaram colônia típica pois eram nucleadas com brilho metálico.
A seguir fotos registradas durante o experimento.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoriaprópria. Fonte: Autoria própria. 
Questões para a fixação do conteúdo 
 1) Descreva a importância da detecção e do controle da presença de coliformes fecais na água. Para fazer o controle de qualidade da água garantido a segurança dos usuários.
2) Comente as condições em que podem ocorrem a contaminação da água. Contato com rede de esgotos, contato com descartes de lixo, entre outros. 
3) Descreva a importância dos microrganismos indicadores. A importância indica o grau de contaminação da água que não pode ser consumida.
AULA 4 
ROTEIRO 1
 Título da aula: Análise microbiológica de leites. Esta aula teve como objetivo realizar a determinação do número de bactérias mesófilas em leite pasteurizado utilizando a técnica de semeadura de superfície.
 Materiais utilizados: Leite integral A, leite integral B, leite de soja, tubos de ensaio de vidro, solução salina estéril 500 ml, alça de drigalsky, placas de Petri com meio Plate Count ágar, estufa bacteriológica, bico de Bunsen, pipeta graduada, contador de colônia.
 Para iniciar os experimentos foi preparar uma diluição de 1:10 dos leites, foram utilizadas duas marcas de leite integral diferente como A e B e leite de soja como C, em uma solução salina estéril no volume de 5 ml, a partir disso realizar as diluições seriadas até 10-5 em solução salina, 0,1 ml de cada tubo contendo as diluições de 10-4 a 10-5 foi semeada com uma alça de Drigalsky em duplicata em placas contendo Plate Count Ágar, as placas foram incubadas sob condições anaeróbias a 37 °C em estufa bacteriológica por um tempo de 48 horas, no final do período de incubação foi feito a contagem das colônias com o auxílio de um contador de colônias e os resultados foram os seguintes:
	10-4
	 A
	45 UFC/ml
	10-5
	 A
	41 UFC/ml
	10-4
	 B
	48 UFC/ml
	10-5
	 B
	41 UFC/ml
	10-4
	 C
	12 UFC/ml
	10-5
	 C
	24 UFC/ml 
 Para a execução da análise do queijo, um derivado do leite, utilizaremos um fragmento de 2,5 g, que foi depositado em um recipiente estéril contendo 22,5 ml de solução salina, a 0,8%, estéreo, o material foi homogeneizado por um minuto em um agitador Vórtex.
Abaixo fotos tiradas durante o experimento é a microbiológica do leite que foram analisados na placa de petri.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria.
AULA 4
ROTEIRO 2
 Título da aula: Coloração de Gram. Esta aula teve como objetivo demostrar que a avaliação da morfologia microbiana é muito importante para a execução da maior parte dos exames microbiológicos. A coloração de Gram também deve ser revisada, dada a sua grande importância no diagnóstico clínico das amostras microbiológicas. 
 Materiais utilizados: solução salina, corantes para a coloração de Gram, óleo de imersão, estufa bacteriológica, lâminas, microscópios, alças bacteriológicas.
 Iniciemos o procedimento pingando sobre a lâmina, foram 3 laminas utilizadas a do Luiz, Iasmin e Edina, uma gota de solução salina estéril, recolhemos uma colônia pré-cultivada com uma alça bacteriológica, coloquemos a colônia junto à lâmina e homogeneizemos, fixemos o esfregaço no calor e cobrimos o esfregaço com cristal de violeta por 1 minuto, lavemos o esfregaço com água corrente removendo o excesso de corante, cobrimos o esfregaço com lugol por 1 minuto, repetimos a lavagem do esfregaço com agua corrente removendo o excesso, descoremos com álcool acetona até remover o excesso de corante, repetimos a lavagem do esfregaço com agua corrente removendo o excesso, cobrimos o esfregaço com Safranina por 30 segundos, lavemos e sequemos e examinemos no microscópio, obtivemos o crescimento de leveduras em maior número e bactérias bacilos Gran positivo que só visualizados na lamina da Edina.
A seguir fotos registradas durante o experimento.
 Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria. Fonte: Autoria própria.
 Questões para a fixação do conteúdo
1) Descreva a importância dos métodos de coloração diferencial. 
A coloração diferencial é importante para caracterizar e classificar primeiramente as bactérias permitindo a visualização em microscópio ótico e permiti classificar em gran negativo ou em gran positivo.
2) Diante desta identificação, o que podemos concluir com a análise da água e do leite? Que existe microrganismos presentes tanto na água como no leite, presença de bactérias e fungos (leveduras).
3) Quais os procedimentos para evitar a contaminação do alimento por esses microrganismos? Existem formas físicas e químicas, químicas são o uso de substância químicas como conservantes, vinagre, água sanitária, cloro, e físicos são o armazenamento em freezer, a fervura, lavar os ingredientes, filtrar.
 
 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
[1] ALMEIDA, Ellen; LIMA, Keli Cristina De; SANTOS, Ederson Josué dos. BRQUALITY. Microbiologia Em Alimentos: O Que É E Qual Sua Importância. 20 de janeiro de 2022. Disponível em: Microbiologia em alimentos: O que é e qual a sua importância (brqualityconsultoria.com.br) Acesso em: 05-03-2023.
[2] CARVALHO, Luís Carlos Figueira De. MICROBIOLOGIA DOS ALIMENTOS. 2023. Disponível em:ALIMENTOS (profluiscarloscarvalho.com.br) Acesso em: 05-03-2023.
[3] CARVALHO, Irineide Teixeira De. e- Tec Brasil Escola Tecnica Aberta do Brasil. Microbiologia dos Alimentos. Janeiro de 2010. Disponível em:untitled (ifpr.edu.br) Acesso em: 05-03-2023.