DOSAGEM MICROBIOLÓGICA DE ANTIBIÓTICOS 05102021

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DOSAGEM 
MICROBIOLÓGICA 
DE ANTIBIÓTICOS
JANAINA R. KUBISZESKI
DOSEAMENTO MICROBIOLÓGICO DE 
ANTIBIÓTICOS
A atividade (potência) dos antibióticos pode ser demonstrada 
sob condições específicas através de seu efeito sobre o 
crescimento de microrganismo-padrão sensível.
• Potencia da FF pode esta abaixo do esperado = não tem 
efeito desejado
• Potencia da FF pode esta acima do esperado = efeito toxico.
DOSEAMENTO MICROBIOLÓGICO DE 
ANTIBIÓTICOS
Quando usar microbiológico ou físico-química 
(doseamento)?
indicado para substâncias ou preparações em que a 
potência/teor dos antibióticos não pode ser analisada por 
métodos físico-químicos.
>> é mais especifico e detecta concentrações mais baixas
DOSEAMENTO MICROBIOLÓGICO DE 
ANTIBIÓTICOS
A quantificação da substância ativa de um 
medicamento exige o emprego de uma avaliação 
comparativa com um padrão pré-estabelecido. 
>> mede a resposta, a ação do medicamento, essa 
resposta pode ser convertida de em valores.
UNIDADE INTERNACIONAL E 
PREPARAÇÃO PADRÃO
◦ Unidade Internacional é a atividade específica contida em uma 
quantidade (massa) de Padrão Biológico Internacional ou Preparação 
de Referência Biológica Internacional. A quantidade equivalente de 
unidades para uso internacional é estabelecida, sempre que necessário, 
pela Organização Mundial da Saúde. 
>> O número de unidades, ou a massa equivalente da substância pura, 
em microgramas, contidos em 1 mg de substância antibiótica, está 
indicado na monografia de cada um dos produtos inscritos na 
Farmacopeia.
MICRO-ORGANISMOS 
RECOMENDADOS
MÉTODO DE DIFUSÃO EM ÁGAR
1. Difusão do antibiótico
2. Crescimento microbiano
Resultando na zona de 
inibição de crescimento.
MÉTODO DE DIFUSÃO EM ÁGAR
Para cada antibiótico relacionado verificar o meio de 
cultura, a quantidade de meio a ser usada na camada 
base e na camada inoculada e o microorganismo de 
ensaio. 
RELAÇÃO DOSE-RESPOSTA
concentração da solução padrão versus diâmetro dos halos de inibição
A preparação das amostras dos antibióticos está indicada na respectiva 
monografia. As concentrações do antibiótico utilizadas desde que haja 
relação linear entre o logaritmo da concentração do antibiótico e o 
diâmetro do halo de inibição. 
MÉTODO DE DIFUSÃO EM ÁGAR
A transferência da substância pelo mecanismo da 
difusão pode ocorrer de forma linear ou radial.
>> formação do halo: indica que o 
crescimento do microrganismo foi INIBIDO 
o em função da ação do antimicrobiano 
difundido no ágar.
FATORES DE INFLUÊNCIA
◦Quantidade de inoculo: 
◦ em geral preparado a partir do caldo de cultura que foi incubado 
por 4 a 6 horas, quando o crescimento é considerado em fase 
logarítmica;
◦ coletadas amostras de várias colônias de aspecto semelhante 
para diminuir a variação na população bacteriana;
A quantidade de inóculo utilizada deve ser a de menor valor, porém 
suficiente para apresentar crescimento uniforme, que propicie contraste 
com a zona de inibição do crescimento, sem se apresentar como 
colônias isoladas.
FATORES DE INFLUÊNCIA
◦ Espessura do ágar
◦ Bicamada: correção de falhas >> superfície contém o inóculo
– facilita a visualização pelo contraste entre as zonas
◦ Monocamada: reduzida favorece a formação de halos de 
inibição maiores, para substâncias de pequena difusibilidade
FATORES DE INFLUÊNCIA
[ ] antibiótico >> definido em cada monografia
Microorganismo e meio de cultura
◦ Incubação: período de tempo adequado em condições 
especificadas para cada MO.
1.Alíquota suspensão microbiana
2.Meio de culatra >> verter nas placas
3.Solidificação do meio
4.Aplicação da solução teste
5.Tempo de difusão
6.Incubação >>crescimento microbiano
FATORES QUE INFLUENCIAM A 
DETERMINAÇÃO DA POTÊNCIA DE 
ANTIBIÓTICOS
◦ pH – compatível com o crescimento microbiano, atividade e estabilidade do 
antibiótico
◦ Condições de incubação (tempo e temperatura)
◦ Composição do meio
◦ Espessura e uniformidade do Agar
◦ Velocidade de difusão da substância no Agar
◦ Distribuição do inóculo em placas de Petri (nitidez do halo de inibição)
◦ Características da amostra
FATORES QUE INFLUENCIAM O 
TAMANHO DO HALO DE INIBIÇÃO
◦Escolha do microrganismo e sua sensibilidade
◦Condições do microrganismo teste (forma vegetativa ou esporulada)
◦ Formulação e condição do meio
◦Densidade da semeadura
◦Volume da solução-teste
◦Espessura do agar
◦Tempo de aplicação da solução teste
◦Temperatura de incubação
DELINEAMENTO DO ENSAIO
2 x 2: duas concentrações padrões: alta e baixa 
DELINEAMENTO DO ENSAIO
3 x 3: três concentrações padrões: alta, média e baixa 
6 placas
DELINEAMENTO DO ENSAIO
5 x 1: quatro concentrações do padrão (P1, P2, P4 e 
P5) + uma concentração média (P3)
12 placas
36 halos de P3
9 halos de P1, P2, P4 e P5
P3 corrige os outros valores
CÁLCULO DA POTENCIA
Potência = 100 antilog X (diferença entre amostra e padrão)
X logR
R= equação 
da reta
y=ax+b
(diferença entre doses)
MÉTODO DE TURBIDIMETRIA
Depende da inibição do crescimento de um microrganismo em 
meio de cultura líquido, contendo solução uniforme de 
antibiótico.
Delineamento 2x2; 3x3; ou 5x1
adição do ATB-test à suspensão do organismo em meio 
nutriente liquido >> incubação >> leitura da turbidez
DIFUSÃO EM AGAR E TURBIDIMÉTRICO
◦ Vantagem: as técnicas de cilindro e de orifício 
mostram-se mais sensíveis à pequenas concentrações. 
◦ Desvantagem: As técnicas de cilindro e de orifício são 
mais trabalhosas e necessitam de cuidados extremos 
no manuseio das placas.
DIFUSÃO EM AGAR E TURBIDIMÉTRICO
◦ Vantagem: Mais rápido
◦ Desvantagem: pH pode influenciar o 
crescimento do microrganismo; 
◦ Há interferência de soluções turvas ou 
coradas.
◦ Padrão e amostra devem ser solúveis 
em água ou em solventes miscíveis em 
concentração tal que não interfira no 
crescimento
Questões
◦Qual a finalidade do método de dosagem de potencia de 
ATBs?
◦Qual a relação da dosagem de potencia de ATBs com a 
fabricação de genéricos?
◦Quais as consequências da potencia do ATB acima ou abaixo 
do preconizado?
◦Qual método de dosagem é utilizado no artigo? E qual a 
vantagem em relação a outros métodos?