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EX A ME PA RA S IT OL ÓGICO DE FEZ ES (EPF) - FASE aNALÍTI CA Mét odos Qual i t at i vos Flu t u aç ã o Es pon t â nea EPF - O ex ame é bar at o , de f ác i l ex ecu ção e de g r ande apl i cal i dade c l í ni ca. S e dimen t aç ã o Es pon t ã nea FEZES Ti po s de ex ames : - Fase Pr é- anal ít ica Ex ame Di r et o - Cultura de fezes. - Parasitológico de fezes. - Pesquisa de sangue oculto nas fezes. - Pesquisa de rotavirus nas fezes. S e dimen t aç ã o por Cen t r if ugaç ã o 1. Solicitação do exame: -Indicação do método a ser realizado. -Indicar parasita a ser pesquisado. 2. Coleta da amostra/ orientações: -Procedimento para coleta. -Número de amostras. -Uso de conservantes, etc. 3. Transporte da amostra para o laboratório: -Envio imediato x arnazenamento em geladeira. - Coleta no laboratório. - Exame Macroscópico - Exame Microscópico -Consistência das fezes; -Odor; - Resto de alimentos; - Presença de elementos anormais ( muco ou sangue e vermes adultos). -Pesquisa de ovos e larvas de helmintos; trofozoítas e cistos de protozoários. - Uso de processos de enriquecimento e coloração. - Metódos gerais: Sedimentação Espontânea e Centrifugação; - Observação: '' Nenhum método é capaz de diagnosticar todas as formas parasitárias simultaneamente.'' - Permite vizualizar Protozoário (trofozoítas e cistos) e helmintos (ovos, larvaa e proglotes); - Fezes recém-emitidas (no máximo 30 minutos) e normalmente diarreicas. Método: - Colocar 60/70 mg de fezes em uma lâmina de microscopia (diluir em salina se necessário). Quando diluído em solução NaCl a 0.85% - Motilidade de trofozoítas e refração citoplasma dos cistos. - com lugol - Melhor definição da estrutura nuclear dos cistos. - Presença de detritos fecais - Revelação de poucoc detalhes estruturais. - Cobrir as fexes com lamínula ( embebida em solução aquosa de verde de malaquita a 3% ou lugol) - Examinar ao microscópio. Cent r í f ugof l ut uação Conc en t r aç ã o de L ar v as de Helm in t os Mét odos Quant i t at i vos - Método de Hoffman, Pons & Janer (HPJ) e Lutz. - Método de Faust. - Mét odo de Baer mann- Mor aes, Rugai e Har ada. -Análise microscópica. -Contagem da quantitativa de ovos e cistos por campos visuais ou por lâmina. - Classificação utilizada por cruzes(+/++++). - Pouco usada na prática. - Mét odo de Kat o- Kat z. -Pesquisa quantitativa de ovos de helmintos (principalmente S. mansoni). - Amostra de fezes de consistência normal, sem conservantes. - Vantagens: Método quantitativo, maior sensibilidade para ovos de S.mansoni. - Desvantagens: Tempo de procedimento (1-2 horas), requer materiais especiais. - Passo a passo: 1. Preparar uma solução de verde-malaquita (tem a finalidade de conservar as fezes e clarificar as formas parasitárias.) 2. Cortar papel celofane (24 x 30mm) e deixá-los mergulhados na solução de verde-malaquita por 24h. 3. Colocar sobre um papel higiênico uma porção da amostra de fezes. 4. Comprimir as fezes com um pedaço de tela metálica ou de náilon (trama 0.9mm). 5. Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e transferi-las, com o auxílio de um palito para uma lâmina de microscopia. 6. Cobrir as fezes com lamínula depapel celofane embebida em verde-malaquita, inverter a lãmina sobre uma folha de papel absorvente e comprimi-la. 7. Aguardar 1 a 2 horas e analisar ao microscópio. Mapa mental - Exame Parasitológico de Fezes - Método Qualitativo: Hoffman, Pons & Janer (HPJ) - Método de sedimentação espontânea. - Permite o encontro de larvas, helmintos e cistos e protozoários. - Material: Cálice, bastão de vidro, fezes, água tratada, funil, gaze cirúrgica dobrada em quatro, lâmina, lamínula, lugol, canudinho ou pipeta. - Método Qualitativo: HPJ . - Técnica: Diluir as fezes em água tratada pelo bastão. - Coar a solução através de gaze assentada sobre um funil para um cálice. - Deixar sedimentar por 2 a 24h. - Com o canudinho ou pipeta, depositar uma gota sobre lâmina e colocar lamínula. - Observar em objetivas de 10 e 40x. - Método Qualitativo: Faust - Método de centrífugo-flutuação. -Usado para a pesquisa de cistos de protozoários e ovos leves. - Material: - Solução de fezes e água; - Sulfato de zinco a 33%; - Tubos de centrífuga; -Alça de platina; - Lâmina e lamínula; - Centrífuga; - Lugol. Técnica: Coar solução em tubo de centrífuga e centrífugar a 2500 rpm. - Desprezar o sobrenadante e completar com água, centrifugar até ficar claro. - Adicionar o sulfato de zinco a 33% e centrifugar; - Com a alça de platina, recolher a película superficial e depositar em lâmina com lugol e observar em objetiva de 10 e 40x. - Vantagens: Maior sensibilidade para a detecção de cistos; - Desvantagens: Procedimento mais complexo, requer reagentes específicos. - Método Qualitativo: Baermann - Moraes. - Método de concentração para identificação de larvas de helmintos (Strongyloides stercoralis) por migração ativa. - Propriedades de hidrotropismo e termotropismo positivos. - Material utilizado: Fezes em trouxa de gaze, peneira, água a 45ºC, funil ligado a borracha, pinça de Mohr, centrífuga e microscópio. - Pré-analítico: As fezes tem que ser recém emitidas e não se pode colher em frasco contendo MIF ou ouitro conservante. - Técnica: - Colocar 10 g de fezes sobre gaze dobrada em quatro, fazendo uma trouxinha. - Colocar o material sobre um funil conectado a um tubo de borracha à sua extremidade e fechado com uma pinça de Mohr. - Colocar água pré-aquecida a 45ºC de modo a emergir as fezes. - Deixar 1h em repouso. - Colher 5 ml, abrindo a pinça em tubo cônico de centrífuga. - Centrifugar. - Desprezar o sobrenadante. - Depositar em lâmina, corando com lugol e observar em microscópio óptico, em objetivas de 10 e 40x. Método de Rugai: - Concentração de larvas de helmintos. - Passo a passo: 1. Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e envolvê-lo em uma gaze dobrada em quatro fazendo uma pequena trouxa. 2. Colocar o material assim preparado, com a abertura voltada para baixo, em um cálice de sedimentação contendo água aquecida (45ºC) em quantidade suficiente para entrar em contato com as fezes. 3. Deixar 1 hora em repouso. 4. Coletar o sedimento no fundo do cálice com a ajuda de uma pipeta e colocar sobre uma lâmina. 5. Adicionar uma gota de lugol e obsevar ao microscópio. - Observação: Esse método só poderá ser realizado com fezes frescas e não diarreicas. - Método de Blagg ou Mifc e Método de Ritchie. - Método MIFc ou Blagg: Técnica de concentração por centrifugação. - Material: - Fezes em suspensão com água ou MIF. - Tubo cônico. - Éter. - Centrífuga. - Gaze montada em pinça. - Lâmina e lamínula. - Lugol. - Técnica: 1. Coletar as fezes recém eliminadas em líquido conservante de MIF e homogeneizar bem. 2. Filtrar a suspensão de fezes em gaze dobrada em quatro em um cálice de vidro. 3. Transferir 1 a 2 mL do filtrado para um tubo cônico de centrifugação com capacidade para 15 mL. 4. Acrescentar 4 a 5 mL de éter sulfúrico e agitar vigorosamente (importante para desengordurar o material). 5. Centrifugar por 1 min a 1500 rpm. 6. Com o auxílio de um bastão, descolar a camada de detritos da parede do tubo. 7. Inverter o tubo para desprezar o líquido, mantendo-o com a boca voltada para baixo até limpar sua parede, utilizando um palito com algodão em sua extremidade. 8. Acrescentar ao sedimento gotas de solução salina e/ou lugol, e em seguida, colocar este material sobre uma lâmina, cobrir com lamínula e observar ao microscópio. - Método de Willis. - Método de Willis - Técnica de flutuação espontânea. - Passo a passo: 1. Colocar 10g de fezes em um frasco de Borrel (ou pode ser utilizado o próprio frasco no qual as fezes foram enviadas) 2. Diluir as fezes em solução salina saturada. 3. Completar o volume até a borda do frasco. 4. Colocar na boca dofrasco uma lamínula, que deverá entrar em contato com o líquido. 5. Deixar em repouso por 5 minutos a 1 hora. 6. Ao final desse tempo, retirar rapidamente a lamínula e colocá-la sobre uma lâmina, voltando a parte molhada para baixo. 7. Observar ao microscópio. Nome: Jaqueline Gomes de Oliveira Matricula: 202303111932 http://S.mansoni. Mapa mental P�gina 1
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