Avaliação I - bio moecular

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14/06/2023, 18:09 Avaliação I - Individual
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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741)
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Prova 66112081
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 9/1
Nota 9,00
Os ciclos do PCR (reação em cadeia da polimerase) são críticos para o sucesso da técnica. Em 
torno de 20-40 ciclos são programados no termociclador, a fim de se obter milhares de cópias de 
DNA. Sobre os ciclos do PCR associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Desnaturação.
II- Anelamento.
III- Extensão.
( ) Estágio em que os primers se ligam à fita do DNA na sua sequência complementar.
( ) Estágio inicial, em que ocorre abertura da dupla fita, liberando os nucleotídeos de cada uma das 
fitas simples. Esta etapa ocorre em uma alta temperatura, em cerca de 95º C.
( ) Estágio correspondente à adição de nucleotídeos pela DNA polimerase específica, denominada 
como Taq DNA polimerase, em uma temperatura de 72º C.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A III - II - I.
B I - III - II.
C I - II - III.
D II - I - III.
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as 
amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e 
armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse 
– nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos 
devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de 
nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o processo de extração de DNA e RNA 
identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Etapa de Lise.
II- Etapa de Ligação.
III- Etapa de Lavagem.
IV- Etapa de Eluição.
( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de 
sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e 
homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, 
pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. 
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( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue 
novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do 
tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo 
de coleta e centrifugue novamente.
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e 
centrifugue a amostra.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A II - III - IV - I.
B I - II - III - IV.
C I - II - IV - III.
D IV - III - II - I.
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os 
ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados 
e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, 
baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a 
detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da 
expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em 
cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas 
infecções e doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas 
citadas é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do 
DNA pode ser dividido em etapas. 
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.
B A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da
amostra e 20 µl do tampão de lise S.
C A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no
eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin. 
D Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.
"A PCR pode ser precedida por uma reação de transcrição reversa (RT) para a obtenção de cDNA a 
partir de RNA (RT-PCR), representando, por exemplo, uma possibilidade de análise de expressão 
gênica em células ou tecidos" (SANTOS, 2004, s.p.). Sobre os componentes essenciais para a 
realização da técnica de PCR e RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- Para o processo de PCR convencional, utiliza-se a fita molde de DNA, os nucleotídeos ou dNTPs, 
os primers e a Taq DNA polimerase.
II- Para o processo de RT-PCR, é utilizada uma enzima denominada como termoestável, como a Taq 
DNA polimerase.
III- Para o processo de RT-PCR, utiliza-se a fita molde de mRNA, os nucleotídeos ou dNTPs, primers 
oligodT e enzima transcriptase reversa.
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Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: SANTOS, Carlos Ferreira dos et al. Transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase: 
princípios e aplicações em odontologia. J. Appl. Oral Sci., v. 12, n. 1, p.1-11, 2004.
A As sentenças I e III estão corretas.
B As sentenças II e III estão corretas.
C Somente a sentença I está correta.
D As sentenças I e II estão corretas.
O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma 
maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR 
qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com 
essas duas técnicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma 
amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra. 
( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas 
relativas à quantidade de expressão de um gene. 
( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação 
dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A V - F - F.
B V - V - F.
C F - F - V.
D F - V - F.
A hibridização in situ foi elaborada com o objetivo de isolar e identificar fragmentos, através do 
anelamento entre duas fitas simples de origens distintas, sejam elas DNA ou RNA. Sobre essa 
técnica, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Northen-blotting.
II- Southern-blotting.
III- Hibridização in situ.
( ) Técnica que utiliza sondas de ácidos nucleicos, com marcação química, no local em que a 
molécula de interesse deve ser encontrada (RNA dentro da célula, DNA específico em cromossomos). 
( ) Técnica que avalia padrões de sequências de nucleotídeos de genes do DNA e utiliza sondas de 
DNA molde, os quais são marcados com radiação ou quimicamente. 
( ) Nesta técnica, o RNA mensageiro (mRNA) é utilizado a fim de buscar comparar situações 
distintas, como, por exemplo, utilizar amostras controle como padrão para expressão do gene de 
interesse e, assim, comparar com a amostra de interesse. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
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A I - III - II.
B I - II - III.
C II - I - III.
D III - II - I.
Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de 
bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA:
A A biblioteca de cDNA contéméxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de
DNA, incluindo o não codificante.
B As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que
posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa.
C Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo
extremamente específico para identificar o conteúdo expresso em uma célula ou tecido.
D As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de
restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA.
O sequenciamento de DNA permite a identificação de qual nucleotídeo ocupa cada posição na 
fita de uma molécula ou fragmento de DNA. As primeiras técnicas que permitiram sequenciar o DNA 
começaram a ser desenvolvidas na década de 70, com o método desenvolvido por Sanger. Sobre o 
método de Sanger, assinale a alternativa CORRETA:
A
São utilizados iniciadores (primers), fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, ou seja, com a
mesma extremidade 5' e diferentes terminações 3', devido à inserção dos didesoxinucleotídeos,
que são nucleotídeos terminadores de cadeia (ddNTP: ddATP, ddTTP, ddCTP e ddGTP).
B Os didesoxinucleotídeos são ineficazes para a técnicas de Sanger, sendo utilizados somente os
primers e diversas fitas de DNA réplicas da mesma fita molde, com a mesma extremidade 5'.
C A técnica de Sanger, utiliza terminadores de sequência em réplicas de DNA de uma fita molde
diferenciada.
D Os didesoxinucleotídeos são similares aos primers ou iniciadores, já que iniciam a reação em
diferentes terminações 3'.
Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com enzimas de restrição 
e clonagem em vetor. Com base nas etapas para construção de uma biblioteca de DNA, ordene os 
itens a seguir:
I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da DNA ligase. 
II- Clivado do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares de fragmentos de 
DNA.
III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos diferentes fragmentos. 
IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um organismo.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
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A IV - II - III - I.
B I - III - II - IV.
C I - IV - III - II.
D IV - II - I - III.
Existem diferentes formas de sequenciar um genoma, sendo que cada uma se aplica dependendo 
da realidade do pesquisador em questão, podendo ser técnicas recentes, que são mais robustas e 
sofisticadas, ou então, técnicas mais antigas, que, ainda assim, demonstram um excelente resultado, 
apesar de serem mais complicadas e menos automatizadas. Sobre essas técnicas, associe os itens, 
utilizando o código a seguir:
I- Sequenciamento de Sanger. 
II- Next Generation Sequencing. 
III- Sequenciamento de terceira geração.
( ) Método de primeira geração, mais conhecido por utilizar nucleotídeos terminados de cadeia 
(ddNTP).
( ) Método que permite a análise da sequência de nucleotídeos em uma única molécula de DNA, 
sem a necessidade de amplificação dessa molécula, em tempo real.
( ) São métodos de nova geração, que não utilizam nucleotídeos terminadores de cadeia para o 
processamento das amostras.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A II - I - III.
B I - III - II.
C I - II - III.
D III - II - I.
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