Técnicas de Clonagem e Hibridização

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14/06/2023, 17:38 Avaliação I - Individual
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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741)
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Prova 65697990
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 10/0
Nota 10,00
Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de 
bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA:
A As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de
restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA.
B Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo
extremamente específico para identificar o conteúdo expresso em uma célula ou tecido.
C As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que
posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa.
D A biblioteca de cDNA contém éxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de
DNA, incluindo o não codificante.
O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material 
genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico 
de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as 
asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, 
inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas 
um vetor.
 
PORQUE
II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas 
horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em 
uma colônia diferente de crescimento bacteriano.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições falsas.
B As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
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[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o roteiro de hibridização, o sucesso dessa prática 
depende da capacidade do DNA de se anelar às sequências complementares após a desnaturação 
(período em que a fita de DNA é simples). Dessa forma, o ponto de fusão do DNA, ou seja, o 
momento em que ocorre a ruptura das pontes de hidrogênio e a abertura da dupla fita de DNA, varia 
de um organismo para outro. O ponto de fusão do DNA também depende da quantidade de pares de 
base G-C e A-T, sendo que, quanto mais pares G-C, maior o ponto de fusão do genoma. Isso ocorre 
porque o par G-C é mais estável, apresentando três pontes de hidrogênio, enquanto o par A-T conta 
apenas com duas. Após o anelamento da sonda com sua sequência-alvo complementar, o padrão de 
hibridização é visto em microscópio de fluorescência. Além do ponto de fusão, outros fatores podem 
interferir na hibridização da sonda de DNA. Sobre esses fatores, analise as opções a seguir:
I- Temperatura de fusão.
II- pH alto para produzir condições de hibridização.
III- Concentração de cátions monovalentes.
IV- Presença de solventes orgânicos.Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a opção I está correta.
B Somente a opção III está correta.
C Somente a opção II está correta.
D As opções I, II, III e IV estão corretas.
[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica 
que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base 
(adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar 
sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da 
espécie.
Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA:
A O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem
necessidade de incubação.
B A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner.
C Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.
D A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes.
O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma 
maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR 
qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com 
essas duas técnicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma 
amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra. 
( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas 
relativas à quantidade de expressão de um gene. 
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( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação 
dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A V - F - F.
B F - F - V.
C V - V - F.
D F - V - F.
"A clonagem de genes possui variadas aplicações na área de pesquisa, por meio do conhecimento da 
organização de genomas, da sequência de genes e suas proteínas codificadas, da criação de 
bibliotecas de DNA e cDNA, além de produtos que beneficiam a sociedade, como a produção de 
enzimas industriais, produção de insulina humana, vacinas, hormônios de crescimento e 
melhoramento genético". Sobre as principais diferenças entre essas técnicas, destacando os objetivos 
de cada uma delas, analise as sentenças a seguir:
I- As Bibliotecas de DNA ou cDNA são grandes coleções de material genético mantidas em colônias 
de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados.
II- Uma biblioteca de DNA é formada por fragmentos originados a partir de um DNA genômico. Já 
uma biblioteca de cDNA é formada por sequências codificantes dos genes que estavam expressos na 
forma de mRNA em uma determinada amostra.
III- A formação das bibliotecas de DNA e cDNA permite que fragmentos clonados sejam mantidos e 
replicados por tempo indeterminado.
Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: CALEFFE, R. T. T.; OLIVEIRA, S. R.; FREITAS, A. C. O.; KIDO, K. K.; GARCIA, A.; 
PAMPHILE, J. A. Clonagem de genes: métodos e aplicações. Revista UNINGÁ, v. 47, p. 73-77, 
jan./mar. 2016. Disponível em: http://revista.uninga.br/index.php/uninga/article/view/1252/874. 
Acesso em: 5 fev. 2021.
A Somente a sentença II está correta.
B Somente a sentença III está correta.
C Somente a sentença I está correta.
D As sentenças I, II e III estão corretas.
A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram analisar as 
sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificar a 
molécula. Sobre esses métodos, assinale a alternativa CORRETA:
A
É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser
sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro
por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR.
B
A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos
de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo
adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real.
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C
Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas
quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma
biblioteca de DNA.
D
É o mais recente avanço em biologia molecular,que permite o sequenciamento de DNA de forma
portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos,
semelhantes a pen drives. A plataforma MinION é a mais utilizada.
O gráfico a seguir ilustra uma curva de amplificação da PCR em tempo real. De acordo com a 
interpretação do gráfico, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct. 
( ) A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a quantidade de 
material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse. 
( ) A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade 
intermediária de amostra, quando comparadas às amostras A e C. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A V - F - V.
B V - V - F.
C V - F - F.
D F - F - V.
A técnica de eletroforese consiste na separação de moléculas de DNA, RNA ou proteínas em gel 
de agarose ou poliacrilamida. Essa separação se dá de acordo com o tamanho da molécula. Com base 
no processo de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir:
I- Uma corrente elétrica é transmitida através do gel do polo negativo ao polo positivo. 
II- As moléculas de DNA são carregadas negativamente e são carregas por afinidade para o polo 
positivo. 
III- Moléculas menores tendem a migrar com maior dificuldade no gel. Já as moléculas maiores, 
tendem a migrar mais facilmente.
 
Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a sentença III está correta.
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B As sentenças I e II estão corretas.
C Somente a sentença II está correta.
D As sentenças I e III estão corretas.
O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisa de 
expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR. 
Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA 
complementar (cDNA).
II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando 
como molde uma fita simples de RNA. 
III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de 
cDNA.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As sentenças I e II estão corretas.
B Somente a sentença II está correta.
C Somente a sentença III está correta.
D As sentenças I e III estão corretas.
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