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09/06/2023, 14:38 Avaliação I - Individual about:blank 1/5 Prova Impressa GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:823741) Peso da Avaliação 1,50 Prova 65698186 Qtd. de Questões 10 Acertos/Erros 9/1 Nota 9,00 A clonagem de DNA se refere à produção, dentro de uma célula, de diversas cópias de uma sequência específica de um fragmento de DNA. Sobre o exposto, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- A clonagem de DNA depende da utilização de um vetor, do fragmento de DNA e, posteriormente, de um organismo hospedeiro. PORQUE II- O fragmento de DNA de interesse, será inserido em uma molécula de DNA genômico com capacidade de autorreplicação (DNA do vetor), originando o DNA recombinante. Essa inserção se dá através de enzimas de restrição e enzimas de ligação. Assinale a alternativa CORRETA: A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. B As asserções I e II são proposições falsas. C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira. D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. [Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base (adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da espécie. Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA: A A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner. B Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho. C A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes. D O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação. VOLTAR A+ Alterar modo de visualização 1 2 09/06/2023, 14:38 Avaliação I - Individual about:blank 2/5 Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA: A Uma biblioteca de DNA contém somente os íntrons de uma molécula de DNA, sendo extremamente específico para identificar o conteúdo expresso em uma célula ou tecido. B As bibliotecas de cDNA contêm somente os éxons de uma molécula de mRNA, que posteriormente é convertido em cDNA pela técnica de transcrição reversa. C As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA. D A biblioteca de cDNA contém éxons e íntrons, já que são clonados todos os fragmentos de DNA, incluindo o não codificante. A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram analisar as sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificar a molécula. Sobre esses métodos, assinale a alternativa CORRETA: A Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma biblioteca de DNA. B É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR. C A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real. D É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o sequenciamento de DNA de forma portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos, semelhantes a pen drives. A plataforma MinION é a mais utilizada. O RNA é uma molécula muito semelhante ao DNA, originado a partir do processo de transcrição, em que carrega informações contidas no DNA para fora do núcleo. Essas informações, darão origem à síntese de proteínas, através do processo de tradução. Sobre o RNA, assinale a alternativa CORRETA: A O RNA é uma estrutura em fita simples, composta pelos nucleotídeos adenina, timina, citosina e guanina. B O RNA é composto por cinco nucleotídeos, adenina, uracila, timina, guanina e citosina. C O RNA é uma estrutura em dupla hélice, composta pela desoxirribose, nucleotídeos e fosfato. D O RNA é uma estrutura em fita simples, composta pela pentose denominada como ribose; os nucleotídeos adenina, uracila, citosina e guanina e fosfato. 3 4 5 09/06/2023, 14:38 Avaliação I - Individual about:blank 3/5 [Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse – nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o processo de extração de DNA e RNA identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Etapa de Lise. II- Etapa de Ligação. III- Etapa de Lavagem. IV- Etapa de Eluição. ( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min. ( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente. ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A II - III - IV - I. B I - II - III - IV. C IV - III - II - I. D I - II - IV - III. "A clonagem de genes possui variadas aplicações na área de pesquisa, por meio do conhecimento da organização de genomas, da sequência de genes e suas proteínas codificadas, da criação de bibliotecas de DNA e cDNA, além de produtos que beneficiam a sociedade, como a produção de enzimas industriais, produção de insulina humana, vacinas, hormônios de crescimento e melhoramento genético". Sobre as principais diferenças entre essas técnicas, destacando os objetivos de cada uma delas, analise as sentenças a seguir: I- As Bibliotecas de DNA ou cDNA são grandes coleções de material genético mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. II- Uma biblioteca de DNA é formada por fragmentos originados a partir de um DNA genômico. Já uma biblioteca de cDNA é formada por sequências codificantes dos genes que estavam expressos na forma de mRNA em uma determinada amostra. III- A formação das bibliotecas de DNA e cDNA permite que fragmentos clonados sejam mantidos e replicados por tempo indeterminado. 6 7 09/06/2023, 14:38 Avaliação I - Individual about:blank 4/5 Assinale a alternativa CORRETA: Fonte:CALEFFE, R. T. T.; OLIVEIRA, S. R.; FREITAS, A. C. O.; KIDO, K. K.; GARCIA, A.; PAMPHILE, J. A. Clonagem de genes: métodos e aplicações. Revista UNINGÁ, v. 47, p. 73-77, jan./mar. 2016. Disponível em: http://revista.uninga.br/index.php/uninga/article/view/1252/874. Acesso em: 5 fev. 2021. A As sentenças I, II e III estão corretas. B Somente a sentença I está correta. C Somente a sentença III está correta. D Somente a sentença II está correta. Existem diferentes formas de sequenciar um genoma, sendo que cada uma se aplica dependendo da realidade do pesquisador em questão, podendo ser técnicas recentes, que são mais robustas e sofisticadas, ou então, técnicas mais antigas, que, ainda assim, demonstram um excelente resultado, apesar de serem mais complicadas e menos automatizadas. Sobre essas técnicas, associe os itens, utilizando o código a seguir: I- Sequenciamento de Sanger. II- Next Generation Sequencing. III- Sequenciamento de terceira geração. ( ) Método de primeira geração, mais conhecido por utilizar nucleotídeos terminados de cadeia (ddNTP). ( ) Método que permite a análise da sequência de nucleotídeos em uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificação dessa molécula, em tempo real. ( ) São métodos de nova geração, que não utilizam nucleotídeos terminadores de cadeia para o processamento das amostras. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A III - II - I. B I - II - III. C II - I - III. D I - III - II. O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com essas duas técnicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra. ( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas relativas à quantidade de expressão de um gene. ( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação 8 9 09/06/2023, 14:38 Avaliação I - Individual about:blank 5/5 dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A F - V - F. B F - F - V. C V - V - F. D V - F - F. O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas um vetor. PORQUE II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em uma colônia diferente de crescimento bacteriano. Assinale a alternativa CORRETA: A A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira. B As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. C As asserções I e II são proposições falsas. D As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. 10 Imprimir
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