Fixação do Complemento

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Fixação do Complemento
Sistema complemento
- Conjunto de proteínas inativas (zimógenos) presentes no soro, que
são ativadas numa exposição a patógenos e outros antígenos;
- Mecanismos efetores presente na imunidade inata e adaptativa
- Sua ativação resulta em uma funçãonlítica à membranade patógenos
- Outras funções:
● Quimiotaxia
● Opsonização
● Inflamação
Abbas Abul K.
Imunologia celular e molecular
Fixação do Complemento
- Trata-se de um teste sorológico para determinar a presença e/ou
semiquantificar antígenos ou anticorpos por meio do sistema
complemento
- Quando há ligação de anticorpos aos anticorpos (imunocomplexos) os
sítios da região Fc ficam livres para ligação às proteínas do
complemento
Princípio da técnica
- A ligação de Ag e Ac (imunocomplexo) ativa o complemento e
resulta no complexo de ataque à membrana (MAC)
- Se esse o anticorpo é ligado ao antígeno adsorvidos à hemácias =
ocorrerá a hemólise
- Pode ser qualitativo ou semi-quantitativo, quanto é realizada uma
diluição, observando a máxima diluição que ocorre a positividade
(hemólise).
Elementos necessários para o ensaio:
- Soro (teste)
- Sistema complemento
- Sistema hemolítico (hemácias com antígenos)
- Estufa para incubação
- Centrífuga
- Antígeno purificado (para inibição)
Passo a passo
1. Soro teste é incubado para inativação do complemento (existente)
2. O soro inativado é incubado com eritrócitos recobertos com
antígenos ao qual deseja-se pesquisar
3. Caso anticorpos (soro teste) presentes, estes se ligarão à hemácias
recobertas = formação de imunocomplexo
4. O complemento (fabricante) é adicionado e então se ligara ou não
ao imunocomplexo
5. Se positivar ocorrerá a lise da hemácia
6. Realiza-se uma centrifugação e há observação da solução
resultante.
Interpretação
- Com a formação da hemólise há liberação da hemoglobina na solução
= resultado positivo. Após a centrifugação vê uma mistura homogênea
- Sem a formação da hemólise não há liberação da hemoglobina =
resultado negativo. Após a centrifugação vê um precipitado no tubo.
Inibição do complemento
Passo a passo
1. Soro teste é incubado para inativação do complemento (existente);
2. O soro inativado é incubado um monoclonal contra o antígeno
pesquisado
3. O monoclonal se liga ao antígeno pesquisado (soro)
4. Há incubação da solução (monoclonal - soro) juntamente com sistema
complemento e as hemácias adsorvidas com anticorpos.
5. Como os antígenos ja estarão ligados ao monoclonais. A hemácia
adsorvida não se ligará ao antígeno - não havendo ligação com
complemento;
6. A hemólise não ocorrerá.
Interpretação:
1. Se não houver antígeno no soro, o monoclonal não se ligará.
Haverá ligação do complemento com imunocomplexo das hemácias
adsorvidas = solução homogênea - negativo
2. Se houver antígeno no soro, o monoclonal se ligará e haverá uma
competição com o sítio do antígeno.
Não haverá ligação do complemento com as hemácias adsorvidas com
anticorpos = precipitação no tubo - positivo.
Vantagens:
- Baixo custo
- Alta sensibilidade
- Alta especificidade.
Desvantagens:
- Falso-negativo:
● Perda da atividade do complemento
● Sensibilização ineficiente das hemácias
- Falso-positivo:
● Hemácias fragilizadas (velhas);
● Soro não inativado
● Baixa especificidade - hemácia não adsorvida completamente.