AULA PRÁTICA Métodos de contagem pourt plate, spread plate e diluições seriadas em placa

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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
1. IDENTIFICAÇÃO 
PROFESSOR (A): Kamila Leal Correa 
EXPERIMENTO: Métodos de contagem: pourt 
plate, spread plate e diluição em placas 
DISCIPLINA: Controle de qualidade microbiológico 
 
2. PROTOCOLO DO EXPERIMENTO 
OBJETIVO: 
- Obter colônias isoladas (estudo qualitativo) ou para realizar a contagem de colônias em placa (estudo 
quantitativo); 
- Reconhecer e diferenciar as técnicas pourt plate (profundidade) e spread plate (superfície). 
- Realizar diluições a partir da suspensão inicial do MO. 
 
MATERIAIS: 
Autoclave. Placas de petri, Tubo de ensaio. Alça de platina. Câmara de fluxo laminar. Banho-maria, 
Bico de Bunsen. 
 
TÉCNICA: 
➢ Cultivo em placa pour-plate (semeadura em profundidade) 
O método baseia-se na premissa de que cada célula microbiana presente em uma amostra, 
quando fixada em um meio de cultura sólido adequado, após a sua multiplicação forma uma colônia isolada 
e visível para ser contada a olho nu ou usando contador de colônia. 
- A partir da suspensão inicial, fazer sucessivas diluições e adicionar (geralmente) 1mL do inóculo 
ao fundo da placa vazia estéril, em seguida adicionar o meio de cultura fundido; 
- Fazer movimentos rotacionais suaves para a homogeneização do inóculo; 
- Após incubação observar colônias crescidas tanto na superfície como no interior do meio e 
realizar a contagem com auxilio de um contador de colônias. 
- O cálculo do número de unidades formadoras de colônias (UFC) por ml da amostra será a 
multiplicação do número de colônias contados pela diluição correspondente da placa e pelo volume 
inoculado; 
UFC/ml = nº de colônias x diluição x volume inoculado 
- Para a contagem de colônias e cálculo dos resultados em situações não usuais, serão seguidas 
as orientações descritas no material de apoio 2. 
 
Figura 1: Método Pourt Plate 
 
 
 
➢ Cultivo em placa spread plate (semeadura em superfície) 
O método baseia-se no crescimento de células individuais, formando colônias visíveis 
semelhantes à técnica de semeadura em profundidade. Neste método, a diferença é que a amostra (ou 
diluições) é semeada diretamente em placas contendo meio de cultura sólido. 
- A partir da suspensão inicial fazer sucessivas diluições e adicionar (geralmente) 0,1 a 1mL do 
inóculo na superfície do meio já solidificado em placa; 
- Com auxílio da alça de Drigalsky espalhar o inóculo por toda superfície, de modo a separar ao 
máximo as células microbianas presentes; 
- Após incubação observar colônias crescidas na superfície do meio e realizar a contagem com 
auxílio de um contador de colônias 
- O cálculo do número de unidades formadoras de colônias (UFC) por ml da amostra será a 
multiplicação do número de colônias contados pela diluição correspondente da placa e pelo volume 
inoculado; 
UFC/ml = nº de colônias x diluição x volume inoculado 
- Para a contagem de colônias e cálculo dos resultados em situações não usuais, serão seguidas 
as orientações descritas no material de apoio 2. 
 
 
 
 
 
Figura 2: Método Spread plate 
 
 
 
 
 
➢ Diluições Seriadas 
Técnica que permite a contagem do número de microrganismos em amostras com concentrações 
muito elevadas. 
Considerando-se que cada colônia de bactérias formada sobre um meio de cultivo se origine de 
uma unidade formadora de colônia (cadeia ou grumo de bactéria), quando a concentração de 
microrganismos inoculados é muito grande, haverá o crescimento de colônias de maneira sobreposta 
impossibilitando a contagem. 
A amostra deve então ser diluída seriadamente para que a concentração de microrganismos 
diminua, dando origem a colônias suficientemente separadas, possibilitando assim a contagem. 
- A partir da suspensão inicial realizar sucessivas diluições, de 10-1 até 10-6, transferindo 1 mL da 
suspensão original contendo 9 mL de solução salina estéril, homogeneizar em agitador vortex, 
obtendo-se a diluição 10-1; 
- A partir desse tubo repetir o procedimento para obter os tubos com as diluições posteriores, até 
a diluição 10-6. 
- Em seguida, realizar a inoculação de 0,1 à 1 mL das diluições em cada placa de petri contendo 
meio ágar, devidamente identificadas. 
- Após incubação observar colônias crescidas e realizar a contagem com auxilio de um contador 
de colônias. 
- Para a determinação do número de microrganismos da amostra original multiplica-se o número 
de colônias contados pela diluição correspondente da placa e pelo volume inoculado; 
 
UFC/ml = nº de colônias x diluição x volume inoculado 
 
Figura 3: Diluições seriadas 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
3. REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS 
• Vermelho, Alane Beatriz., Pereira, Antônio Ferreira., Coelho, Rosalie Reed Rodigues., Soares, 
Thais Cristina Baeta. Práticas de Microbiologia. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2014. 
• Guia ABC de Microbiologia. Controle microbiológico na indústria de produtos de higiene 
pessoal, cosméticos e perfumes. 5ª edição. Associação Brasileira de Cosmetologia. São Paulo: 
Phamabooks, 2017. 
 
 
 
 
 
Figura 4: Método das diluições em placas 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura