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UFRPE - RELATÓRIO SIMPLIFICADO: PRÁTICA DE ELETROFORESE – VSITA AO LABORATÓRIO DE GENOMA - 29/05/2019 UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO DEPARTAMENTO DE AGRONOMIA ELETROFORESE – VISITA AO LABORATÓRIO DE GENOMA RECIFE 2019 UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO ALUNO: FILIPE FRANCISCO DA SILVA Relatório Simplificado de aula prática sobre eletroforese apresentado ao curso de Engrenharia Agronômica, turma SA3 - 2019.1, como requisito parcial para obtenção de nota da 2 ª VA da disciplina de Genética Geral A, ministrada pela professora Luíza Semen. RECIFE 2019 Relatório A eletroforese efetuada no gel, consiste em um método de separação de moléculas onde é feita através de uma diferença de potencial para que venha ocorrer a migração das partículas. Ao utilizar uma ou mais enzima de restrição em uma fita de DNA onde será efetuado o corte. As malhas do gel poliacrilamida funciona como uma peneira molecular onde é possível observar que o deslocamento das partículas menores migrará para mais perto do eletrodo positivo e as partículas maiores, o gel funciona como um retardador de deslocamento, ficando mais próximo do polo negativo. A partícula do DNA possui carga negativa e faz com que ela migre em direção ao elétrodo positivo quando uma tensão é aplicada, e quando o sistema for ativado é necessário saber de tal informação pois caso contrário o trabalho pode ser perdido. É possível calcular o tamanho exato de um dado fragmento com base na sua razão de migração. Após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluorece (torna-se visível) vivamente em contato com a luz ultravioleta. Dessa forma pode-se localizar as bandas que correspondem ao DNA. Os fragmentos de DNA podem, então, ser isolados e purificados a partir dos géis de agarose. De acordo com a enumeração de pesos moleculares é possível saber aproximadamente quantos pares de bases tem em cada fragmento como mostra no esquema a seguir na imagem 1 e 2 respectivamente: Imagem 1. Imagem 2. No dia foi efetuada uma visita ao laboratório de genoma, onde foi falado um pouco da história do laboratório e foi possível a vistoria e conceituação de vários materiais usados na elaboração da eletroforese. Alguns equipamentos vistos no laboratório foram: Freezers, estufas, sequenciador de DNA, capela, termociclador, centrifuga, gel compostos químicos, destilador de água, micro centrífuga, autoclave, Balanças eletrônicas digitais, banhos Maria analógicos e/ou digitais, estufa de secagem e esterilização, kits de pipetadores automáticos e alguma vidrarias. 7
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