pre teste reacao em cadeia da polimerase PCR

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1. A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), a 
mais utilizada para amplificação do DNA in vitro, 
revolucionou o acesso às informações genéticas. 
Com relação a essa técnica, assinale a opção correta. 
Resposta correta. 
@ A. Na PCR, os primers (iniciadores) se hibridizam com 
moléculas de DNA dupla-fita separadas; 
A função dos primers é hibridizar, cada um em uma 
extremidade da molécula de DNA-alvo, permitindo a 
ação da enzima para iniciar a polimerização. 
2. Considere que um projeto de pesquisa em biologia está 
sob análise, para que sejam constatadas sua viabilidade 
e a adequação dos recursos obtidos para sua realização. 
O projeto visa à expressão de determinado gene 
humano em um microrganismo e à purificação da 
proteína de interesse. A metodologia proposta para o 
desenvolvimento do projeto envolve reações catalisadas 
por DNA polimerases termoestáveis, na presença de 
oligonucleotídeos, utilizados como primers, e 
nucleotídeos livres, sendo realizadas em tubos de 
polipropileno. Depois de outras etapas, é proposta a 
inserção dos oligonucleotídeos amplificados em 
microrganismos e a ligação da proteína expressa a um 
anticorpo específico. 
Em relação às reações catalisadas pela DNA polimerase 
mencionadas no texto, assinale a opção correta. 
Resposta incorreta. 
@ A. Para que as reações de amplificação possam ser 
concluídas, é imprescindível a adição de DNA 
ligase; 
Na reação de amplificação, não é necessária a dição 
de DNA ligase, enzima que consegue juntar 
extremidades livres de moléculas de DNA. 
Você acertou! 
@ B. A metodologia descrita no texto é Q, 
compatível com a técnica de PCR; \::./ 
Sim, para haver a amplificação do gene estudado, 
técnica de PCR se encaixa nesse procedimento. 
3. Por meio da PCR, uma sequência de DNA pode ser 
amplificada milhões ou bilhões de vezes, produzindo 
cópias suficientes de DNA para serem analisadas por 
outras técnicas, como o sequenciamento, ou digeridas 
por enzimas de restrição e clonadas em um plasmídeo. 
Existem recomendações específicas para a construção 
de primers, tais como: assegurar relação entre bases 
purinas e pirimidinas entre 40% e 60%; procurar 
sequência do primer com maior concentração de bases 
G/ C na extremidade 5' e menor concentração (um C ou 
um G) na porção 3'; evitar trincas de bases repetidas. 
Assinale a alternativa correta. 
Resposta correta. 
@ C. t crucial que as temperaturas de anelamento dos 
dois primers sejam próximas. 
Para ocorrer o anelamento correto dos dois primers 
no DNA-alvo, faz-se necessário que a temperatura de 
ambos seja bem próxima, permitindo que a reação 
subsequente ocorra corretamente. 
4. A PCR é uma técnica com múltiplas aplicações na 
biologia molecular. A partir de uma molécula de DNA 
inicial, têm-se milhões de cópias do fragmento de DNA 
desejado. Em sua primeira etapa, ocorre a desnaturação 
da dupla-fita de DNA em fitas simples, pelo aumento da 
temperatura (9 SºC). Na segunda etapa, a temperatura é 
reduzida, para que os oligonucleotídeos (primers) se 
liguem às regiões complementares. Na terceira etapa, a 
enzima DNA polimerase reconhece os primers ligados e 
catalisa a polimerização das fitas, inserindo os 
nucleotídeos e formando novas fitas de DNA. Esse ciclo 
é repetido de 30 a 40 vezes, de forma que o fragmento 
de DNA é amplificado. Ao aumentar e reduzir a 
temperatura, as ligações entre as fitas da molécula de 
DNA são desfeitas e refeitas, respectivamente. 
Que tipo de ligação presente na molécula de DNA 
permite esse fenômeno? 
Resposta correta. 
@ B. Ligação de hidrogênio; 
As fitas antiparalelas encontradas na molécula de 
DNA têm como base para sua interação as forças 
denominadas de ligação ou interação, ou pontes de 
hidrogênio que ocorrem entre as bases nitrogenadas 
complementares. 
5. Em exames clínicos, a técnica de amplificação de DNA 
pela PCR é muito utilizada. No diagnóstico de infecção 
de um paciente por um determinado vírus com genoma 
de DNA, por exemplo, a técnica permite a amplificação 
específica de material genético do vírus. 
O que garante a especificidade dessa reação? 
Você acertou! 
@ C. Os oligonucleotideos iniciadores, Q, 
complementares à sequência do DNA virai. \;!_/ 
O que dá especificidade e confiança à PCR são os 
primers, que conseguem identificar e anelar nas 
sequências de DNA-alvo do genoma virai.