PRÁTICA LABORATÓRIO VIRTUAL - PREPARAÇÃO DE ESFREGAÇO E COLORAÇÃO DE GRAM - PÓS-TESTE

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1- A coloração de Gram diferencia as bactérias pelas propriedades químicas e físicas 
de suas paredes celulares. As bactérias Gram-positivas têm uma camada espessa de 
peptideoglicano na parede celular que retém a coloração primária (cristal violeta). As 
bactérias Gram-negativas têm uma camada mais fina de peptideoglicano que permite 
que o cristal violeta seja removido com a adição de etanol. 
Com base na sua aprendizagem prática no laboratório virtual, assine a alternativa que 
responda corretamente qual etapa deve ser realizada antes da adição do etanol. 
Você acertou! 
A. 
Após a coloração com cristal violeta, a próxima etapa é a adição de lugol com a função de 
se ligar ao cristal violeta, aumentando sua afinidade pela parede celular e formando um 
complexo insolúvel (CV-I); 
O lugol age como mordente e agente de aprisionamento, para reter o corante na parede 
celular bacteriana por meio da formação de um complexo formado entre cristal violeta e 
iodo. 
 
Resposta incorreta. 
B. 
A adição do lugol após a primeira coloração é importante para formar um complexo insolúvel 
(CV-I) e aprisioná-lo na parede celular de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. No 
entanto, apenas as bactérias Gram-positivas permanecem com a coloração roxa/violeta; 
O uso do lugol possibilita o aprisionamento do corante cristal violeta em todas as bactérias 
Gram-positivas e Gram-negativas, e ambas permanecem com a cor roxa/violeta. 
 
Resposta incorreta. 
C. 
Logo após a coloração com cristal violeta, utiliza-se o álcool. O álcool age diluindo a 
membrana lipídica externa de bactérias Gram-negativas, permitindo que a coloração 
roxa/violeta seja perdida e que apenas as Gram-positivas apresentem essa cor. 
Logo após a coloração com cristal violeta, utiliza-se o lugol. Apenas depois que é utilizado 
o álcool. 
 
2. 
Você foi responsável por analisar, por meio da metodologia de Gram, duas amostras 
recebidas no laboratório. Logo após a realização dos procedimentos, você observou 
as seguintes imagens: 
 
De acordo com seu conhecimento adquirido por meio do laboratório virtual, marque 
a alternativa que representa o seu diagnóstico preliminar desse teste. 
Você não acertou! 
A. 
A primeira imagem representa, com certeza, a presença de S. aureus, uma vez que ela é 
Gram-positiva e está corretamente corada em roxo/violeta por meio do cristal violeta; 
A coloração de Gram não define com precisão qual é a linhagem específica visualizada na 
imagem; portanto, é incorreto dizer que a amostra visualizada representa a bactéria S. 
aureus 
 
Resposta incorreta. 
B. 
A imagem corada em roxo/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na 
amostra analisada. Por sua vez, a imagem corada em vermelho/rosa representa a presença 
fiel da bactéria E. coli, pertencente ao grupo das bactérias Gram-negativas; 
Em um diagnóstico preliminar, não se pode garantir a presença de uma linhagem específica 
utilizando-se apenas a metodologia de Gram. 
 
Resposta correta. 
C. 
As amostras recebidas em laboratório passaram por quatro etapas – coloração primária, 
adição de lugol, descoloração com álcool e contracoloração – até se chegar à obtenção 
dessas imagens. A cor roxa/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na 
amostra, enquanto a cor vermelha/rosa representa a presença de bactérias Gram-negativas. 
Após as quatro etapas da coloração de Gram, o diagnóstico preliminar obtido é de que a cor 
roxa/violeta representa o grupo de bactérias Gram-positivas, e a cor vermelha/rosa, Gram-
negativas. 
3. 
Antes de utilizar os reagentes para a metodologia de Gram com a finalidade de corar 
as bactérias, há a necessidade de primeiro fixar a amostra por meio do calor. Esse 
procedimento é realizado passando a lâmina por cima da chama azul em um bico de 
Bunsen algumas vezes. 
No laboratório virtual você realizou esse procedimento. Mas, afinal, por que você faz 
isso? 
Resposta incorreta. 
A. 
Para que ocorra alteração na morfologia bacteriana; 
A coloração de Gram é dependente da viabilidade bacteriana. Caso ocorra a perda da 
integridade morfológica (alteração), essa ocorrência levará à perda da viabilidade. Se a 
bactéria não é viável, não ocorrerá a coloração. 
 
Resposta incorreta. 
B. 
Para que a bactéria reaja à coloração com mais facilidade; 
De forma alguma a temperatura vai influenciar no processo de coloração das bactérias por 
meio do método de Gram. 
 
Você acertou! 
C. 
Para que as bactérias não sejam eliminadas durante as etapas de coloração. 
Caso as bactérias não sejam fixadas por meio do esfregaço em lâmina, quando ocorrer a 
adição do corante cristal violeta, do lugol, do álcool e da safranina e retirada dos excessos, 
não haverá mais amostras na lâmina. 
 
4. 
A coloração de Gram apresenta diversas etapas, que se iniciam com o esfregaço. 
Após a amostra estar fixada na lâmina, iniciam-se as etapas de coloração primária, 
adição de lugol, descoloração e contracoloração. Todo o procedimento é finalizado 
com a visualização da lâmina com o auxílio de um microscópio óptico. 
No experimento realizado no laboratório virtual, você percorreu todas as etapas. 
Levando em consideração o seu conhecimento prático e teórico adquirido, qual etapa 
é crucial na coloração de Gram? 
Você acertou! 
A. 
O esfregaço bacteriano; 
O esfregaço é a primeira etapa; se não for realizado de forma correta, não terá como realizar 
as demais etapas e obter um diagnóstico preliminar correto. 
 
Resposta incorreta. 
B. 
A adição do lugol; 
A adição do lugol é extremamente importante, mas apenas poderá ser realizada caso já se 
tenha feito o esfregaço e a coloração primária com o cristal violeta. 
 
Resposta incorreta. 
C. 
A coloração primária com cristal violeta. 
A primeira coloração só será bem-sucedida se a amostra estiver fixada na superfície da 
lâmina microscópica. Caso contrário, as bactérias não aderidas irão se dispersar e serão 
removidas quando houver a lavagem delicada com água destilada. 
 
5. 
Cada reagente utilizado na coloração de Gram apresenta uma função definida. O 
cristal violeta age como um corante primário, corando todas as bactérias. O iodo 
(presente no lugol) age formando um complexo com o cristal violeta, prendendo-o no 
interior das bactérias. O álcool age diluindo a membrana lipídica de bactérias Gram-
negativas, liberando o cristal violeta para fora delas. A contracoloração com safranina 
age corando as bactérias Gram-negativas de vermelho/rosa. 
Após a realização desse procedimento experimental no laboratório virtual, qual a 
função do mordente na reação de Gram? 
Você acertou! 
A. 
Fixar o corante primário (cristal violetna parede celular de bactérias Gram-positivas e Gram-
negativas; 
O lugol age como um agente mordente e aprisionador. Isso ocorre com a formação de um 
complexo insolúvel entre iodo e cristal violeta, ficando retido na parede celular das bactérias. 
 
Resposta incorreta. 
B. 
Fixar o contracorante safranina nas bactérias Gram-negativas; 
A safranina fixa-se na parede de bactérias Gram-negativas sem a presença/necessidade de 
um agente mordente. 
 
Resposta incorreta. 
C. 
O agente mordente é o álcool, o qual promove a remoção do corante primário de bactérias 
Gram-negativas pela diluição da membrana lipídica externa. Por sua vez, não promove a 
remoção do corante primário de bactérias Gram-positivas. 
Embora o álcool promova a descoloração de bactérias Gram-negativas, e não de Gram-
positivas, ele não é considerado um agente mordente, e sim um agente descolorante.