PREPARO DE ESFREGAÇO E COLORAÇÃO DE GRAM - Laboratório Virtual

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Pré Teste
1) 
O procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor dos 
corantes, com base nas diferenças das propriedades químicas e físicas de sua estrutura. 
De acordo com as cargas positivas e negativas relacionadas às estruturas bacterianas e aos 
corantes utilizados na coloração de Gram, marque a alternativa correta: 
A) Bactérias Gram-negativas apresentam em sua estrutura elementos com cargas negativas e, 
por isso, coram definitivamente com o corante cristal violeta, que apresenta carga positiva, 
não havendo descoloração após o uso de álcool;
B) Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas apresentam carga positiva e negativa, 
respectivamente. Mesmo apresentando cargas diferentes, o cristal violeta penetra ambas as 
paredes celulares;
C) A safranina é um corante que apresenta carga positiva; por isso, cora apenas bactérias Gram-
negativas (que apresentam carga negativa).
2) 
As bactérias apresentam diversas estruturas que as diferenciam entre Gram-positivas e 
Gram-negativas. Marque a alternativa que mais descreve essas diferenças:
A) As bactérias Gram-positivas apresentam uma espessa camada de parede celular composta de 
peptideoglicano (50-90%) coberta por uma fina membrana lipídica externa;
B) Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas apresentam parece celular composta de 
peptideoglicano em proporções similares;
C) As bactérias Gram-negativas apresentam uma estrutura mais complexa, com uma parede 
celular mais fina, porém envolta por uma membrana lipídica externa e um espaço 
periplasmático.
3) 
As bactérias são microrganismos unicelulares procarióticos. A estrutura da célula é mais 
simples do que a de outros organismos, pois não há um núcleo definido, nem a presença de 
organelas membranosas. Existem muitos tipos diferentes de bactérias. Uma forma preliminar 
de classificá-las é pela morfologia e pelo arranjo formado. 
De acordo com seus conhecimentos teóricos de microbiologia, qual alternativa melhor 
responde sobre os tipos morfológicos bacterianos existentes, bem como sobre seus arranjos 
formados?
A) O formato bacteriano mais comum são os cocos (esferas), que agrupam formando arranjos de 
dois cocos (diplococos), quatro cocos (tétrades), oito cocos (sarcina), os cocobacilos (cocos 
compridos), os estreptococos (cocos em cadeia) e, por fim, os estafilococos (agrupamento 
irregular de cocos);
B) Os bacilos são estruturas longas e delgadas que formam arranjos com dois bacilos 
(diplobacilos) ou que se agrupam formando cadeias (estreptobacilos) ou apenas se alinhando 
lado a lado (paliçada);
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C) As bactérias apresentam diversas morfologias, como os cocos (esferas), os bacilos 
(bastonetes), o vibrião (formato de vírgula), os espirilos (bastonetes encurvados), as 
espiroquetas (espiraladas), as apendiculadas (com extensões celulares na forma de longos 
tubos ou pedúnculos) e as filamentosas (com células curtas e cadeias celulares incomuns).
4) 
A coloração é uma técnica auxiliar largamente utilizada em microscopia. As colorações são 
amplamente utilizadas no campo científico para destacar a estrutura das amostras 
biológicas, de células, tecidos, etc. O procedimento de coloração mais amplamente utilizado 
em microbiologia é a coloração de Gram, descoberta pelo cientista e médico dinamarquês 
Hans Christian Joachim Gram, em 1884. 
Com base em seus estudos, marque a alternativa que melhor justifica os objetivos e as 
funcionalidades da coloração de Gram:
A) A coloração de Gram auxilia na categorização das bactérias em Gram-positivas ou Gram-
negativas e na observação da morfologia bacteriana (coco, bacilo, vibrião, espirilo), bem como 
nos arranjos formados por elas;
B) A coloração de Gram é um método mais rápido e simples, podendo ser aplicado diretamente 
às amostras enviadas para exames microbiológicos em casos de infecção, por exemplo, 
líquido cerebrospinal e líquido sinovial para diagnosticar, imediatamente, a meningite e a 
artrite séptica, respectivamente;
C) A coloração de Gram é utilizada para avaliar a qualidade das amostras enviadas aos 
laboratórios de microbiologia clínica para cultura. O objetivo é determinar se as amostras são 
suscetíveis de fornecer informações clinicamente úteis, se devem ser processadas 
(cultivadas), e determinam a espécie bacteriana presente na amostra com precisão.
5) 
O cultivo bacteriano pode ser realizado em meio líquido e em meio sólido. Alguns meios são 
seletivos e são utilizados para selecionar espécies que serão isoladas. Há também os meios 
diferenciais, os quais promovem mudança na coloração das colônias de bactérias, 
possibilitando a distinção de vários gêneros e espécies de microrganismos. 
Com base em seus conhecimentos, marque a alternativa que melhor define o ágar manitol e 
o ágar MacConkey:
A) O ágar manitol é um meio seletivo e diferencial indicado para o isolamento de Staphylococcus;
B) O ágar MacConkey é um meio seletivo para bactérias Gram-negativas e diferencial para 
fermentadores de glicose;
C) O ágar manitol e o ágar MacConkey são meios diferenciais, ou seja, apresentam a finalidade 
de diferenciar as bactérias em dois grupos: Gram-positivas e Gram-negativas, 
respectivamente.
Emily
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Pós Teste
1) 
A coloração de Gram diferencia as bactérias pelas propriedades químicas e físicas de suas 
paredes celulares. As bactérias Gram-positivas têm uma camada espessa de peptideoglicano 
na parede celular que retém a coloração primária (cristal violeta). As bactérias Gram-
negativas têm uma camada mais fina de peptideoglicano que permite que o cristal violeta 
seja removido com a adição de etanol. 
Com base na sua aprendizagem prática no laboratório virtual, assine a alternativa que 
responda corretamente qual etapa deve ser realizada antes da adição do etanol.
A) Após a coloração com cristal violeta, a próxima etapa é a adição de lugol com a função de se 
ligar ao cristal violeta, aumentando sua afinidade pela parede celular e formando um 
complexo insolúvel (CV-I);
B) A adição do lugol após a primeira coloração é importante para formar um complexo insolúvel 
(CV-I) e aprisioná-lo na parede celular de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. No 
entanto, apenas as bactérias Gram-positivas permanecem com a coloração roxa/violeta;
C) Logo após a coloração com cristal violeta, utiliza-se o álcool. O álcool age diluindo a 
membrana lipídica externa de bactérias Gram-negativas, permitindo que a coloração 
roxa/violeta seja perdida e que apenas as Gram-positivas apresentem essa cor.
2) 
Você foi responsável por analisar, por meio da metodologia de Gram, duas amostras recebidas no 
laboratório. Logo após a realização dos procedimentos, você observou as seguintes imagens: 
De acordo com seu conhecimento adquirido por meio do laboratório virtual, marque a alternativa 
que representa o seu diagnóstico preliminar desse teste.
Emily
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A) A primeira imagem representa, com certeza, a presença de S. aureus, uma vez que ela é Gram-
positiva e está corretamente corada em roxo/violeta por meio do cristal violeta;
B) A imagem corada em roxo/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na 
amostra analisada. Por sua vez, a imagem corada em vermelho/rosa representa a presença fiel 
da bactéria E. coli, pertencente ao grupo das bactérias Gram-negativas;
C) As amostras recebidas em laboratório passaram por quatro etapas – coloração primária, 
adição de lugol, descoloração com álcool e contracoloração – até se chegar à obtenção dessas 
imagens. A cor roxa/violeta representa a presença de bactérias Gram-positivas na amostra, 
enquanto a cor vermelha/rosa representa a presença de bactérias Gram-negativas.
3) 
Antes de utilizar os reagentes para a metodologia de Gram com a finalidade de corar as 
bactérias, há a necessidade de primeiro fixar a amostra por meio do calor. Esse 
procedimento é realizado passando a lâmina por cima da chama azul em um bico de Bunsen 
algumas vezes. 
No laboratório virtual você realizou esseprocedimento. Mas, afinal, por que você faz isso?
A) Para que ocorra alteração na morfologia bacteriana;
B) Para que a bactéria reaja à coloração com mais facilidade;
C) Para que as bactérias não sejam eliminadas durante as etapas de coloração.
4) 
A coloração de Gram apresenta diversas etapas, que se iniciam com o esfregaço. Após a 
amostra estar fixada na lâmina, iniciam-se as etapas de coloração primária, adição de lugol, 
descoloração e contracoloração. Todo o procedimento é finalizado com a visualização da 
lâmina com o auxílio de um microscópio óptico. 
No experimento realizado no laboratório virtual, você percorreu todas as etapas. Levando 
em consideração o seu conhecimento prático e teórico adquirido, qual etapa é crucial na 
coloração de Gram?
A) O esfregaço bacteriano;
B) A adição do lugol;
C) A coloração primária com cristal violeta.
Cada reagente utilizado na coloração de Gram apresenta uma função definida. O cristal 
violeta age como um corante primário, corando todas as bactérias. O iodo (presente no 
lugol) age formando um complexo com o cristal violeta, prendendo-o no interior das 
bactérias. O álcool age diluindo a membrana lipídica de bactérias Gram-negativas, liberando 
o cristal violeta para fora delas. A contracoloração com safranina age corando as bactérias 
5) 
Emily
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Emily
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Gram-negativas de vermelho/rosa. 
Após a realização desse procedimento experimental no laboratório virtual, qual a função do 
mordente na reação de Gram?
A) Fixar o corante primário (cristal violeta) na parede celular de bactérias Gram-positivas e 
Gram-negativas;
B) Fixar o contracorante safranina nas bactérias Gram-negativas;
C) O agente mordente é o álcool, o qual promove a remoção do corante primário de bactérias 
Gram-negativas pela diluição da membrana lipídica externa. Por sua vez, não promove a 
remoção do corante primário de bactérias Gram-positivas.
Emily
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