Amplificação In Vitro Exercício

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A curva padrão desempenha um papel essencial na quantificação absoluta de um DNA alvo em uma amostra.
Qual é a finalidade da curva padrão em quantificação absoluta de DNA alvo?
SNPs são empregados amplamente para a identificação humana e possuem diferenças
relevantes. A análise dos SNPs também pode estar associada aos fenótipos individuais,
havendo uma possibilidade futura de identificação de traços físicos como, por exemplo, a cor da
íris. Os SNPs são:
No âmbito da replicação do DNA in vitro, a enzima polimerase assume um papel de extrema importância e
centralidade. Qual é a principal função desempenhada pela enzima polimerase durante a replicação do DNA em
ambiente controlado?
Em algumas situações, a obtenção de DNA a partir de RNA transcrito é importante, como, por
exemplo, na construção de bibliotecas.
Considerando os conceitos relacionados a essa estratégia e a figura acima, que mostra uma das
possíveis estratégias para síntese de DNA a partir de RNA, assinale a opção correta.
 
No diagnóstico clínico-molecular, a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real pode ser
utilizada para a avaliação da carga viral ou bacteriana, para a determinação da resistência a antibióticos
e, até mesmo, para o prognóstico de tumores malignos. A figura abaixo apresenta ciclos de amplificação
de amostras por PCR em tempo real, sendo (A) uma amplificação de um determinado segmento gênico
que identifica um determinado marcador tumoral em células neoplásicas e (B) uma amplificação do
mesmo segmento gênico em células não neoplásicas.
A partir das informações apresentadas, conclui-se que:
Ao se analisar a evolução das estratégias para determinação de identidade genética, que se
tornaram um procedimento sensível e informativo, pode-se notar três fases: uma inicial, após a
descrição de um marcador voltado ao polimorfismo genético em 1980, que deu origem às
impressões digitais de DNA, com a aplicação de técnicas de polimorfismo de tamanho dos
fragmentos de restrição - restriction fragment length polymorphism (RFLP) -; uma segunda fase
de incorporação de novas técnicas, no final da década de 80 do século XX, como a reação em
cadeia da polimerase (PCR), que permitiu um significativo aumento na sensibilidade dos
métodos e a consequente identificação de indivíduos com amostras colhidas de fragmentos de
unhas, goma de mascar etc.; e uma terceira etapa, mais recente, cuja ênfase foi a padronização
metodológica e estatística e a geração de bancos de dados.
Considerando as aplicações da PCR, assinale a opção correta.
Dentro do complexo processo de replicação do DNA em uma célula, duas enzimas assumem funções de
extrema importância: as helicases e a primase. Qual é o papel desempenhado pelas helicases e pela primase na
replicação do DNA em uma célula?
A principal função do PCR multiplex é permitir a detecção simultânea de múltiplos alvos de DNA em uma única
reação. Qual é a principal função da técnica de PCR multiplex no diagnóstico de doenças genéticas?
A importância primordial da sensibilidade da PCR transcende diversos cenários biomoleculares, incluindo
diagnósticos clínicos, pesquisas genéticas e análises de patógenos. Nesse contexto, qual é exatamente o
conceito subjacente à sensibilidade da PCR?
A Biotecnologia trabalha predominantemente manipulando material genético de seres vivos;
para a maioria dos organismos, o material genético é a molécula de DNA. Acerca da estrutura
da molécula de DNA, assinale a opção correta.
BIOLOGIA MOLECULAR E FARMACOGENÉTICABIOLOGIA MOLECULAR E FARMACOGENÉTICA
 
BIANCA DA COSTA E SILVA DO NASCIMENTOBIANCA DA COSTA E SILVA DO NASCIMENTO 202203265199202203265199
BIO MOL E FARMACBIO MOL E FARMAC  2023.2 (G)2023.2 (G) / EX EX
Prezado (a) Aluno(a),
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avaliação. O mesmo será composto de questões de múltipla escolha.
Após responde cada questão, você terá acesso ao gabarito comentado e/ou à explicação da mesma. Aproveite para
se familiarizar com este modelo de questões que será usado na sua AV e AVS.
AMPLIFICAÇÃO IN VITRO DE DNAAMPLIFICAÇÃO IN VITRO DE DNA
 
1.1.
Calibrar a concentração de reagentes na reação de amplificação.
Estabelecer a linearidade e eficiência da amplificação para cálculos precisos.
Determinar a temperatura ótima de amplificação do DNA alvo.
Identificar a sequência específica do DNA alvo.
Avaliar a presença de contaminantes na amostra.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:04
Explicação:
A curva padrão é essencial para a quantificação absoluta de DNA alvo, permitindo relacionar o ciclo de limiar
(Ct) de uma amostra desconhecida com a quantidade de DNA presente nela. Através da linearidade da curva
e da eficiência de amplificação, podemos calcular com precisão a concentração de DNA nas amostras,
garantindo resultados confiáveis.
 
2.2.
Homozigotos
Sequências presentes somente no DNA mitocondrial
Polimorfismos de nucleotídeo único; uma variação na sequência de DNA
Heterozigotos
Elementos repetitivos do genoma nuclear
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:11
Explicação:
A resposta correta é: Polimorfismos de nucleotídeo único; uma variação na sequência de
DNA.
 
3.3.
Adicionar os primeiros nucleotídeos à fita sintetizada.
Quebrar as pontes de hidrogênio entre as bases.
Realizar a complementação das bases nitrogenadas.
Neutralizar a carga elétrica das bases nitrogenadas.
Abrir a fita dupla de DNA em fitas simples.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:15
Explicação:
A enzima polimerase é responsável por ler cada base nitrogenada da fita molde (simples) e adicionar a base
nitrogenada complementar na fita que está sendo sintetizada, formando a nova fita de DNA. Essa
complementação das bases nitrogenadas (A com T e C com G) é fundamental para a replicação precisa da
informação genética.
 
4.4.
A reação mostrada na etapa demonstra a desnaturação da fita de mRNA.
O DNA obtido pelo método ilustrado é denominado tDNA.
Na etapa 4, para que ocorra a reação, é suficiente a adição dos nucleosídios representados
por A, U, C, G.
A reação mostrada na etapa 3 ilustra a atividade da enzima transcriptase reversa.
A reação mostrada na etapa 4 ilustra a atividade da enzima DNA polimerase.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:25
Explicação:
A resposta correta é: A reação mostrada na etapa 4 ilustra a atividade da enzima DNA
polimerase.
 
5.5.
O maior Ct (26) é observado no início da fase exponencial de amplificação em células não
neoplásicas ( B ), e indica maior expressão comparativamente às células neoplásicas ( B ),
que apresentam Ct = 17, não sendo esta sequência-alvo um bom marcador tumoral.
o Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do limiar de detecção
da reação threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra.
O aumento da fluorescência indica que a amplificação da sequência-alvo está ocorrendo,
pois a cada ciclo, durante a desnaturação da dupla fita, ocorre liberação da fluorescência.
A linha paralela ao eixo referente ao número de ciclos, na altura em que se inicia a fase
exponencial da amplificação gênica, denominado threshold, representa falsos sinais
positivos por contaminação das amostras por DNA genômico.
A análise comparativa das duas amostras deve ser realizada a partir da estabilização da
amplificação, que ocorre na fase platô, sendo alcançada no ciclo 28 para a amostra A, e no
ciclo 40, para a amostra B.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:31
Explicação:
A resposta correta é: o Ct (ciclo threshold) pode ser determinado pela intersecção da linha do
limiar de detecção da reação threshold, com a linha da amplificação gênica de cada amostra.
 
6.6.
O uso correto da PCR requer cuidados para evitar a desnaturação do DNA na etapa em que
as fitas são separadas.
Uma das limitações da PCR é a impossibilidade de se amplificar diferentes sequências
simultaneamente.
Amplificação de conjuntos de repetições em tandem curtas (shorttandem repeats) facilita
a identificação de indivíduos.
A RT-qPCR permite a amplificação por meio da adição de aminoácidos a novas fitas de
polímero sintetizadas.
Ao se planejar um experimento para identificação de indivíduos, deve-se ter  o cuidado de
escolher sondas para qPCR em regiões que não contenham mutações.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:40
Explicação:
A resposta correta é: Amplificação de conjuntos de repetições em tandem curtas (short
tandem repeats) facilita a identificação de indivíduos.
 
7.7.
Ler as sequências de bases nitrogenadas do DNA.
Fechar a fita dupla de DNA após a replicação.
Adicionar nucleotídeos complementares à fita de DNA.
Abrir a fita dupla de DNA e iniciar a síntese.
Realizar a complementação das bases nitrogenadas.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:46
Explicação:
As helicases são enzimas responsáveis por abrir a fita dupla de DNA, separando as duas fitas
complementares, para permitir que a replicação ocorra. A primase é uma enzima que adiciona os primeiros
nucleotídeos na fita molde, criando um pequeno segmento de RNA chamado de primer, que serve como
ponto de partida para a ação da DNA polimerase durante a replicação. Portanto, as helicases e a primase
desempenham papéis essenciais na preparação e início do processo de replicação do DNA.
 
8.8.
Determinar a estrutura tridimensional de proteínas.
Identificar a presença de infecções virais.
Avaliar a expressão gênica em diferentes tecidos.
Amplificar regiões próximas de repetições de DNA.
Detectar pequenas mutações em alelos distintos.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:50
Explicação:
A técnica de PCR multiplex é utilizada para detectar pequenas mutações em alelos distintos em uma mesma
reação. Isso é especialmente útil para reconhecer mutações que poderiam levar ao desenvolvimento de
doenças genéticas, como no caso de alelos mutantes associados a doenças hereditárias.
 
9.9.
Sensibilidade da PCR é a velocidade com que os produtos de amplificação são gerados.
Sensibilidade da PCR é a capacidade de detectar o sinal do DNA-alvo em amostras contendo-o na
realidade.
Sensibilidade da PCR representa a habilidade da enzima Taq polimerase em se ligar ao DNA-alvo.
Sensibilidade da PCR refere-se à capacidade de amplificar DNA em altas temperaturas, o que facilita a
detecção.
Sensibilidade da PCR é a quantidade máxima de DNA que pode ser amplificada em uma reação.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:53
Explicação:
A sensibilidade da PCR se refere à capacidade de identificar e amplificar com precisão sequências de DNA-
alvo presentes em baixas concentrações nas amostras. É importante para a detecção confiável de alvos
moleculares mesmo quando estão presentes em quantidades mínimas.
 
10.10.
As duas fitas que compõem a molécula de DNA são ligadas por pontes de hidrogênio entre
suas bases nitrogenadas.
O açúcar contido na molécula de DNA é a ribose.
Em uma cadeia de DNA, os nucleotídeos se ligam aos açúcares e fosfatos por pontes de
hidrogênio.
Há complementaridade entre as bases nitrogenadas adenina e timina e entre guanina e
uracila.
O DNA é composto por quatro tipos de bases nitrogenadas: adenina, citosina, timina e
uracila.
Data Resp.: 03/11/2023 04:49:56
Explicação:
A resposta correta é: As duas fitas que compõem a molécula de DNA são ligadas por pontes
de hidrogênio entre suas bases nitrogenadas.
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Exercício por Temas inciado em 03/11/2023 04:48:57. 
03/11/2023 04:50
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