Práctica 10

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Universidad Veracruzana 
Facultad de Bioanálisis – Xalapa 
 
Bioquímica Básica 
Ricardo Vázquez Ballona 
 
Alicia de los Ángeles Zamudio Sánchez 
 
PRACTICA DE LABORATORIO. 
 
29 de octubre de 2021 
 
Práctica 10 
Determinación de proteínas en alimentos con 
reactivo de Biuret. 
Objetivo 
- Manejar en el laboratorio el método de Biuret para identificar aminoácidos y 
proteínas. 
 
Generalidades 
Las proteínas son moléculas formadas por cadenas de aminoácidos que están 
unidos por un tipo de enlace conocido como enlace peptídico. Por sus propiedades 
fisicoquímicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples, formadas 
sólo por aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas, formadas por 
aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas 
sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. 
La reacción o prueba de Biuret es un método que detecta la presencia de 
compuestos de tres o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las 
proteínas y péptidos cortos. El reactivo de Biuret consiste en una solución acuosa 
de sulfato cúprico (CuSO4) en medio alcalino (NaOH). Este reactivo da un ensayo 
positivo con los enlaces peptídicos entre aminoácidos, cuando la solución queda de 
color violeta. Esto se debe a que el cobre tiene la propiedad de formar iones 
complejos, especialmente entre los enlaces peptídicos. 
Se usa un método colorimétrico que permite determinar la concentración de 
proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una 
longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+). 
La prueba de Biuret será positiva en la clara de huevo, la leche y la milanesa, estos 
tres alimentos se encuentran formados por proteínas de gran complejidad, como la 
albúmina y la caseína. Sin embargo, al calentarse, las proteínas se desnaturalizan, 
por lo tanto, la reacción podría no llevarse a cabo. 
 
Procedimiento. 
1. Enumerar 3 tubos de ensayo. 
2. En el tubo número uno colocar 2 mL de agua destilada (blanco) 
3. En el tubo número dos colocar 2 mL de solución de fenilalanina al 1% (u otro 
aminoácido) 
4. En el tubo número tres colocar 2 mL de albúmina de huevo al 1% 
5. Añadir a cada tubo 1 mL del reactivo de Biuret. 
6. Mezclar y observar. 
 
 
Materiales y equipo. 
Material por equipo: 
3 tubos de ensayo de 15 
x 150 Gradilla para tubos 
de ensayo 2 pipetas 
graduadas de 5 mL 
Perilla 
Piseta con agua destilada 
100 mL Agitador de vidrio 
Reactivos por equipo: 
6 mL solución de fenilalanina 
al 1% 100 mL reactivo de 
Biuret 
Material por grupo: 
1 vaso de precipitados de 
250 mL 1 agitador de vidrio 
 
Material traído por el grupo: 
1 huevo 
 
 
 
 
 
Precauciones. 
- Colocarse la respectiva bata de laboratorio, abotonada. 
- Colocarse los accesorios de protección individual (cubrebocas, lentes de 
protección, guantes). 
- Tener bien tapados los tubos de ensayo. 
- Mantener los tubos de ensayo en la gradilla. 
- Rotular los tubos de ensayo. 
- Cambiar las puntillas de las pipetas automáticas al momento que se deban 
cambiar. 
 
 Resultados. 
Tubo 
Leche en 
polvo 
Grenetina Ovoalbúmina 
Reactivo de 
Biuret 
Resultado 
1 2 mL - - 2 mL 
Un poco violeta. 
Poca presencia de 
proteína. 
2 - 2 mL - 2 mL 
Violeta. Proteína. Se 
forma el enlace 
peptídico. 
3 - - 
2 
mL 
1 mL 
Violeta. Proteína. Se 
forma el enlace 
peptídico. 
 
 
 
 
 
 
Leche en polvo Grenetina Ovoalbúmina 
 
 
 
Conclusiones 
Las cadenas de proteínas presentes en la clara de huevo, la leche y la milanesa, 
cuando fueron sometidas al reactivo de Biuret, que en su composición tiene NaOH 
(el cual no participa de la reacción, pero es de fundamental importancia su presencia 
ya que proporciona el medio básico necesario) junto con el CuSO4, reaccionan con 
el sulfato cúprico y se tornan de color violeta lo que nos indica que la reacción fue 
positiva.
Referencias. 
RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS [Internet]. Gob.ar. [citado el 29 de octubre de 
2021]. Disponible en: 
http://lcve.mincyt.gob.ar/downloads/Santiago_del_Estero_TPC2016_par3.p
df 
Ucv.cl. [citado el 29 de octubre de 2021]. Disponible en: 
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/Bioquimica%20experimental%
201/Guia%20laboratorio%20bioquimica.pdf 
Reyes y Aurora Galván Cejudo EF. 27. Métodos para la cuantificación de proteínas 
[Internet]. Uco.es. [citado el 29 de octubre de 2021]. Disponible en: 
https://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/27%20METODOS%20PARA%20LA%20CUANTIFICACION%20D
E%20PROTEINAS.pdf 
Curso EMA. Determinación de proteínas [Internet]. Edu.uy. [citado el 29 de octubre 
de 2021]. Disponible en: 
http://www.fagro.edu.uy/~nutrical/ensenanza/AVI%20WEB/cursoema/detde
PC.pdf 
Identificación de proteínas con reactivo de Biuret [Internet]. Aprendecontabella.com. 
[citado el 29 de octubre de 2021]. Disponible en: 
https://www.aprencontabella.com/courses/716474/lectures/15511013