Diagnostico e seguimento de uma doenca infecciosa 3

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Diagnostico e segmento 
de uma doenca infecciosa 
✔ RETROVÍRUS DA FAMÍLIA LENTIVIRIDAE, 
✔ GENOMA: ssRNA+ 
 
 CICLO HIV.
✓Afinidade por células que possuem receptores CD4, 
co-receptores CCR5, CCX4, Linfócito T auxiliares 
(TH- T Hélder), macrófagos/ monócitos 
transmissao:
✓Fluidos corpóreos 
✓Sangue 
✓Leite materno 
✓Semen e secreções 
✓Parto (vertical 
fases da doenca
FASE AGUDA: 
✓ASSINTOMÁTICA 
✓SUBCLINICA/ SÍNDROME RETROVIRAL AGUDA 
FASE CRÔNICA/LATENTE 
✓ Portador assintomático 
✓Infecção sintomática/infecções oportunistas (AIDS) 
MaRCADORES DE INFECCAO:
TESTE MOLECULAR 
✓Detecção de RNA-HIV: 7-10 dias (qPCR) 
IMUNOENSAIOS 
✓Teste inicial/triagem 
✓Detecção de antígeno p24: 15-17 dias (ELISA 4 
geração) 
✓ Detecção de anticorpos IgM: 22 dias (ELISA- 3 ou 4 
geração) 
✓ Detecção de anticorpos IgG: 30 dias (ELISA- 3 ou 4 
geração) 
✓Teste confirmatório: 30 dias (Western Blot, 
Imunoblot 
pcr
✓Polimerase Chain Reaction 
✓Reação em cadeia da polimerase 
✓Técnica que permite a amplificação da quantidade 
de cDNA/DNA específico utilizando a enzima Taq 
DNA polimerase, dNTP, sequências iniciadoras 
específicas (primers) e variações de temperatura 
controladas. 
1 CAROLINE CARVALHO
HIV
 
teste molecula hiv
✓ Estima o número de cópias do genoma viral 
circulando no paciente; 
✓ Expresso em número de cópias do RNA de HIV/mL; 
✓ Há vários métodos - PCR quantitativo (qPCR); 
✓ >= 5.000 cópias/mL: Reagente (positivo) 
✓ < 5.000 cópias/mL: Indeterminado 
✓ Limite de detecção/quantificação: <= 20-50 cópias/
mL (negativo ou não detectável) 
✓ qPCR – Diagnóstico Molecular para HIV em Banco 
de Sangue (Obrigatório) 
imunoensaios; 
✓ Pesquisa por anticorpos 
✓Testes para detecção de antígenos (Ag) ou 
anticorpos (Ac) específicos: a partir de 15 a 30 dias; 
✓ Alvo: sequências antigênicas virais/bacterianas/
fúngicas; 
✓ Diversas aplicações: infecções, alergias, marcadores 
tumorais, doenças auto-imunes, hormônios; 
 
aglutinacao 
✓REAGENTE: quando a hemaglutinação, forma-se 
uma rede ou “tapete”de hemácias (ou de partículas 
de gelatina) unidas aos anticorpos, a qual se espalha 
por toda a superfície do poço da placa em que foi 
realizada a reação; 
✓NÃO REAGENTE: quando não há hamaglutinação, 
as hemácias (ou as partículas de gelatina) se 
depositam e formam um botão compacto no fundo 
do poço da placa em que a reação foi realizada 
✓INCONCLUSIVA: nesse caso, n ao há formação 
completa da hemaglutinação nem do botão, por 
isso se observa um misto dos dois, não sendo 
possível definir se a amostra é reagente ou nao. 
Quando isso ocorre, deve ser repetido o exame. 
✓AGLUTINAÇÃO INDIRETA: O Ag é absorvido a uma 
partícula que servira de fase sólida da reação. EX: 
Látex, hemácias (hemaglutinação) 
Diagnostico: ex TTPA (partículas de gelatina), MHA-TP 
(hemácias) 
✓ AGLUTINAÇÃO DIRETA: O ag esta presente 
naturalmente na partícula que esta servindo de base 
sólida da reação. 
✓EX: Bactérias, protozoários, hemácias (tipagem 
sanguínea) 
2 CAROLINE CARVALHO
elisa ou imunoensaio calorimetrico 
✓ ELISA(“EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay”). 
✓ Realizado em placas de microtitulação, que indica a 
presença/ausência e quantifica os antígenos ou 
anticorpos na amostra; 
✓ Produto final(cor): 
 substrato incolor > enzima > 
 produto colorido 
 (leitura em espectrofotômetro); 
✓ A atividade enzimática (cor) pode ser proporcional à 
concentração de Ag ou Ac da amostra. 
ELISA HIV: 
 
hiv: falso-reagentes 
 
✓ FALSO POSITIVO 
- -Doenças autoimunes; 
- Hepatopatias; 
- Medicamentos (ex. interferon, imunoterápicos); 
- Múltiplas transfusões recentes; 
- Vacinação recente para A-H1N1; - Aquisição passiva 
de Ac anti-HIV (mãe para filho). 
✓ FALSO NEGATIVO 
- Uso de terapia antirretroviral; 
- Infecção aguda pelo HIV; 
- Realização do teste anteriormente à soroconversão 
- Sistema imunológico comprometido 
WESTERN BLOT/ IMUNOBLOT 
- POSITIVO: pelo 
menos 2 bandas 
fortes entre as 
três bandas p24, 
gp41, gp120/160 
3 CAROLINE CARVALHO
ENSAIO HIV: 1 e 2 geração 
-Indireto: detecta IgG 
ENSAIO HIV: 4 geração 
-Indireto: detecta IgM e IgG 
-Direto: detecta Ag p24 
ENSAIO HIV: 3 geração 
-Indireto: detecta IgM e IgG 
 
IMUNOcromatografia 
✓ TESTES RÁPIDOS: 
- Resultado em 30 
minutos; 
- Presencial; 
- Amost ra : Sa l iva , 
Sangue, Soro/Plasma ; 
- S>99,5%eE>99% 
- Janela 1-3 meses 
- U s o r e s t r i t o : 
situações em que o 
diagnóstico é essencial 
p a r a a c o n d u t a 
imediata (parturientes, 
acidente ocupacional, mutirões); 
- Regiões sem infraestrutura laboratorial ou de difícil 
acesso; 
DIAGNOSTICO DO HIV/AIDS
✓ O diagnóstico sorológico da infecção pelo HIV é 
realizado com pelo menos 2 testes: 
✓O primeiro para Triagem com máxima Sensibilidade 
Ex. ELISA de 4a geração 
✓ O segundo Confirmatório com máxima 
Especificidade Ex. Western Blot/PCR em termpo real 
(qPCR) 
✓Os testes Confirmatórios utilizam diferentes 
formatos e princípios. A combinação de 2 ou mais 
testes, formando um Fluxograma, tem como 
objetivo aumentar o Valor Preditivo Positivo (VPP). 
✓ELISA - TESTE DE TRIAGEM: 
- Método Colorimétrico Marcado que emprega 
anticorpos conjugados ou peptídeos conjugados 
com enzimas. 
- A produção de cor é proporcional ao analito 
encontrado na amostra analisada. 
✓IMUNOENSAIO HIV 
- Q: EMISSÃO DE LUZ PRODUZIDA DURANTE UMA 
REAÇÃO QUÍMICA 
- EQ: QUIMIOLUMINESCENCIA GERADA POR 
REAÇÃO ELETROQUÍMICA 
* o sinal emitido é diretamente proporcional a 
concentração do análito da amostra 
4 CAROLINE CARVALHO
Quimioluminescência/
eletroquimioluminescencia 
DIAGNOSTICO DO HIV/AIDS
✓ Crianças menores de 18 meses, considerar infectada a 
criança: 
✓ 2 resultados positivos em 2 amostras diferentes, com 
intervalo de 30 dias e testadas pelo mesmo método, e 
que demonstrem a presença do vírus. 
✓ Carga Viral (qPCR) 
✓ OBS: IgG ultrapassa a placenta 
✓ Crianças maiores de 18 meses: 
✓ 2 resultados positivos em 2 amostras diferentes, com 
intervalo de 30 dias. 
✓ Métodos Sorológicos (triagem e confirmatório). 
✓ Portaria no. 29/13 do Ministério da Saúde. 
Monitoramento hiv
 
✓CONTAGEM CD4/CD8: 
✓Função: monitorar a eficácia do tratamento 
antiretroviral. 
✓ Periodicidade: Em média 3x / ano 
✓ Metodologia: Citometria de Fluxo 
✓ Diferenciação das populações de linfócitos T 
através da identificação de moléculas expressas na 
superfície (CD), com uso de anticorpos monoclonais 
conjugados a fluorocromo. 
✓ IMUNOENSAIO MARCADO: 
✓Técnica que permite a detecção de antígenos em 
células/beads ou anticorpos do sangue, a partir de 
uma marcação com anticorpos conjugados a uma 
molécula fluorescente (fluorocromos). 
- CITOMETRIA DE FLUXO (imunofluorescência) 
✓Citômetro de fluxo – permite a análise simultânea de 
diversas células que, uma vez marcadas pelos 
monoclonais conjugados com os fluorocromos, 
passam por um feixe de laser e são identificadas. 
✓CONTAGEM CD4/CD8 
DOENCAS OPORTUNISTAS
- AMOSTRA: Escarro, lavado broncoalveolar, 
liquor (LCR) 
- Pesquisas diretas (microscopia): fungos 
(coloração de prata), bactérias (Gram), BAAR 
(Ziehl-Neelsen) 
- Cultura (meios de cultura apropriados) 
- qPCR 
- Primers específicos (ex. Mycobacterium 
tuberculosis, Toxoplasma gondii, vírus Herpes) 
5 CAROLINE CARVALHO
DOENÇAS OPOSTUNISTAS 
Caso clinico: paciente do sexo masculino, 28 anos, com diagnostico 
prévio de infecção pelo HIV, sem tratamento, procura serviço de 
emergência do hospital com febre, emagrecimento, tosse, diarreia 
aquosa e cefaleia holocraniana. Ao exame, apresenta candidíase oral, 
múltiplas adenomegalias palpáveis e sinais de irritação meningea. 
Como o laboratório pode ajudar na avaliação desse paciente? 
Em pacientes infectados pelo HIV sem tratamento, o risco de 
doenças oportunistas aumenta proporcionalmente ao declinio da 
contagem de linfócitos TCD4+, sobretudo quando esse numero é 
inferior a 200. As doenças oportunistas podemcomprometer 
qualquer órgão ou sistema, e a investigação diagnostica éguiada pela 
apresentação clinica. O paciente em questão possui uma doença 
disseminada, com manifestações pulmonares, neurológicas e 
digestivas 
- MICROSCOPIA DIRETA 
- CULTURA: 
- ESPECTROMETRIA DE MASSAS: 
- Dosagens hormonais e vitaminas 
- Doenças metabólicas congênitas 
- Toxicologia: detectar/quantificar drogas e 
medicamentos 
- Microbiologia: identificação de micro-
organismos
6 CAROLINE CARVALHO