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14/10/2023 1 Microbiota e líquido ruminal PROFESSORA BIANCA GERARDI O rúmen possui um ecossistema complexo, colonizado por diversos microrganismos. Composto de microrganismos fermentadores: bactérias, protozoários, fungos. Existe uma relação de simbiose de muitas vantagens para ambos: o animal fornece à microbiota substratos e ambiente ideal para o crescimento, enquanto os microrganismos fornecem aos hospedeiros ácidos graxos voláteis, proteína microbiana e vitaminas. Microbiota rumenal 1 2 14/10/2023 2 Microbiota rumenal Confere a capacidade de digerir material vegetal, rico em fibras, carboidratos solúveis e insolúveis, proteínas e lipídeos provenientes da dieta do animal. Dentre os principais grupos de microrganismos no rúmen, as bactérias e os fungos possuem relação direta com a degradação da fibra vegetal, apresentando a capacidade de fermentar carboidratos estruturais (celulose e hemicelulose), devido à produção das enzimas celulase e xilanase 3 4 14/10/2023 3 ▪A fermentação e síntese de nutrientes no rúmen são realizadas pelos diferentes microrganismos existentes no ambiente ruminal. ❖Fatores que afetam o crescimento e a eficiência das bactérias ruminais: ➢Energia e a proteína (os principais), o pH e taxa de passagem* *determinados pelo nível de consumo, sistema de alimentação, tamanho de partícula, qualidade e proporção do volumoso na dieta total, tipo e processamento dos carboidratos dos alimentos ▪pH ❖Diretamente relacionado com os produtos finais da fermentação e também com a taxa de crescimento dos microrganismos ruminais. ❖Dietas ricas em volumoso (permitindo o crescimento de bactérias celulolíticas ) ❖Dietas a base de concentrados (bactérias fermentadoras) 5 6 14/10/2023 4 Tipos diferentes de dietas Dietas ricas em forragens resultam em maior atividade de bactérias celulolíticas e sacarolíticas, aumentando a produção de ácido acético Dietas ricas em amido e/ou proteína, aumentam ação das bactérias amilolíticas e/ou proteolíticas, que são produtoras de ácido propiônico ▪ Granulometria do alimento moagem fina, aumentam a densidade e a ingestão, promovendo rápida passagem do material insolúvel. desaparecimento da estratificação do conteúdo ruminal, que é encontrada normalmente em animais alimentados com forragem, permitindo dessa forma rápida passagem de partículas grosseiras, diminuindo sua degradação e aproveitamento por parte dos microrganismos ruminais. 7 8 14/10/2023 5 Saliva, que é rica em bicarbonato de sódio e possui pH em torno de 8,1. Alimentos ricos em fibra induzem maior secreção de saliva dietas com menos de 40% de forragem, reduzem a produção salivar, diminuindo o crescimento da flora microbiana ❖Importância: Auxílio no diagnóstico de enfermidades ligadas ao aparelho digestivo dos ruminantes. ✓Microbiota é altamente sensível as alterações externas e internas as quais são submetidos os animais. Análise do líquido Rumenal 9 10 14/10/2023 6 ❖Coleta: ❑Sondagem Análise do líquido Rumenal ❖ Acondicionamento: ▪Ideal é fazer a análise logo a após a coleta. ▪Preservar as condições de temperatura e anaerobiose garrafa térmica. ▪Temperatura ambiente: 9 horas. Análise do líquido Rumenal 11 12 14/10/2023 7 ❖Acondicionamento: ▪Refrigerado (4 a 5ºC): 24 horas. ▪Deve-se estar atento para prováveis alterações ocorridas nesse intervalo (perda da atividade dos microorganismos, mudanças no pH). Análise do líquido Rumenal ❖Aspectos físicos: ❑ Cor ❑ Odor ❑ Consistência ❑ Tempo de sedimentação e flotação. Análise do líquido Rumenal 13 14 14/10/2023 8 ❖Características químicas: ❑ pH ❑ Prova de redução do azul de metileno. ❑ Determinação da concentração de cloretos. Análise do líquido Rumenal ❖Parâmetros biológicos: ❑ Bactérias ❑ Protozoários http://www.knowledgescotland.org Análise do líquido Rumenal 15 16 14/10/2023 9 Aspectos físicos: ❖ Cor: ✓Pastejam: verde oliva a verde acastanhado. ✓Grãos ou silagem: Marrom amarelado. ✓Milho: Castanho amarelado. Análise do líquido Rumenal ❖Aspectos físicos: ❑ Coloração anormal: ▪Acinzentado: Bezerros com refluxo abomasal. ▪Amarelado a acinzentado: Acidose rumenal. ▪Preto esverdeado: Putrefação da ingesta. Análise do líquido Rumenal 17 18 14/10/2023 10 ❖Aspectos físicos: ❑ Odor: ✓Aromático (não repulsivo). ✓Sem odor: inatividade microbiana. ✓Ácido: Acidose rumenal, refluxo abomasal. ✓Pútrido: Decomposição alimentar. ✓Amoniacal: Acidose rumenal. Análise do líquido Rumenal Aspectos físicos: ❑Consistência: ❖Levemente viscoso: presença de partículas de nutrientes sobrenadantes e microrganismos em quantidade adequada. Análise do líquido Rumenal 19 20 14/10/2023 11 Análise do líquido Rumenal Aspectos físicos: ❑Consistência: ❖ Muito viscosa: Contaminação com saliva (deve ser feita uma nova coleta) ou timpanismo espumoso. ❖Pouco viscosa: Inatividade microbiana ou jejum prolongado. Aspectos físicos: ❑Tempo de sedimentação e flotação: ▪A prova de sedimentação e flotação consiste em deixar em repouso uma amostra do conteúdo do líquido ruminal e medir o tempo em que aparecem os eventos de sedimentação e flotação. ▪Tempo normal de 4 a 8 minutos. Acima disso, pode estar relacionado a ausência de flotação na acidose ou na indigestão vagal. Análise do líquido Rumenal 21 22 14/10/2023 12 Avaliação química: ❑pH: ▪A regulação do pH dos pré-estômagos é de vital importância para a sobrevivência dos ruminantes. ▪Variações fisiológicas: 5,5 a 7 (periódicas; ingestão de alimentos). Bactérias (digestão) Aumento na [ácidos graxos] pH Análise do líquido Rumenal ❖Avaliação química: ❑pH: ▪ Com passar do tempo e antes que ocorra ingestão de alimentos, novamente, o pH aumenta gradativamente. ▪12 a 24 horas após a última alimentação , esses valores pode chegar a 7 ou mais. Análise do líquido Rumenal 23 24 14/10/2023 13 ❖Avaliação química: ❑pH anormal: ▪ Neutro (6,2 a 7): Timpanismo, inatividade microbiana e indigestão simples. ▪Aumentado (>7): Jejum prolongado, ingestão de ureia e/ou outras fontes nitrogenadas (alcalose). ▪Diminuído (< 5,5): Ingestão excessiva de carboidratos (acidose) e refluxo abomasal (obstrução intestinal, lesão vagal). Análise do líquido Rumenal ❖Avaliação química: ❑pH: ▪Fitas indicadoras de pH. ▪pHmetro ▪Reduzir de 0,3 a 0,5 a unidade do pH saliva. ▪Amostras acondicionadas inadequadamente podem alterar o pH. Análise do líquido Rumenal 25 26 14/10/2023 14 ❖Avaliação química: ❖ Potencial de Redox (azul de metileno): Baseada na redução de azul de metileno da forma corada para sua leucoderivada . Quanto maior quantidade de bactérias, maior taxa de redução e desaparecimento mais rápido da cor azul (SORIANO et al., 2000). Análise do líquido Rumenal ❖Avaliação química: ✓Atividade da microbiota ruminal. ❑Potencial de Redox (azul de metileno): ✓Primeiro tubo com conteúdo rumenal. ✓ Segundo tubo 20 mL LR+ 1 mL de azul de metileno 0,03%. Análise do líquido Rumenal 27 28 14/10/2023 15 ❖Avaliação química: ✓Animais alimentados com grãos e capim com microbiota ativa: redução em < 3 minutos. ✓Animal que se alimenta apenas de capim: redução de 3 a 5 minutos. ✓Animal que só ingere grãos: redução em 1 minuto. Análise do líquido Rumenal ❖Avaliação química: ❑O tempo de 8 minutos ou mais para que ocorra a descoloração parcial ou total alterações. ✓Dietas de difícil digestão. ✓Anorexia prolongada. ✓Acidose metabólica. Espera-se no máximo até 15 minutos, se não houver nenhuma alteração é sinal de inatividade microbiana. Análise do líquido Rumenal 29 30 14/10/2023 16 ❖Parâmetros biológicos: ✓Avaliação da densidade e da atividade dos protozoários. Colocar uma gota de LR fresco em uma lâmina de microscopia. http://www.knowledgescotland.org Análise do líquido Rumenal ❖Parâmetros biológicos: População de protozoáriosciliados e flagelados de tamanhos e formas diferentes. Microorganismos mais sensíveis a alterações abruptas de alimentação alteração no pH. Todos os protozoários podem morrer em um pH < 5. http://www.knowledgescotland.org Análise do líquido Rumenal 31 32 14/10/2023 17 ❖Parâmetros biológicos: ❑Desaparecimento dos protozoários grandes: processo brando! ❑ Desaparecimento dos protozoários grandes e médios: processo moderado! ❑Desaparecimento dos protozoários grandes, médios e pequenos: processo grave! http://www.knowledgescotland.org Análise do líquido Rumenal 33 34 14/10/2023 18 ❖Parâmetros biológicos: ➢Coloração de gram: ➢Esfregaço do liquido ruminal. Coloração de Gram. Bactérias degradadoras de celulose (Gram +) pH alto. Bactérias degradadoras de amido e açúcares (Gram-) pH baixo. Análise do líquido Rumenal 35 Slide 1: Microbiotae líquido ruminal Slide 2 Slide 3: Microbiota rumenal Slide 4 Slide 5 Slide 6 Slide 7 Slide 8 Slide 9 Slide 10: Análise do líquido Rumenal Slide 11: Análise do líquido Rumenal Slide 12: Análise do líquido Rumenal Slide 13: Análise do líquido Rumenal Slide 14: Análise do líquido Rumenal Slide 15: Análise do líquido Rumenal Slide 16: Análise do líquido Rumenal Slide 17: Análise do líquido Rumenal Slide 18: Análise do líquido Rumenal Slide 19: Análise do líquido Rumenal Slide 20: Análise do líquido Rumenal Slide 21: Análise do líquido Rumenal Slide 22 Slide 23: Análise do líquido Rumenal Slide 24: Análise do líquido Rumenal Slide 25: Análise do líquido Rumenal Slide 26: Análise do líquido Rumenal Slide 27: Análise do líquido Rumenal Slide 28: Análise do líquido Rumenal Slide 29: Análise do líquido Rumenal Slide 30 Slide 31: Análise do líquido Rumenal Slide 32: Análise do líquido Rumenal Slide 33: Análise do líquido Rumenal Slide 34 Slide 35: Análise do líquido Rumenal