Aula 02 - Testes Sorológicos

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Imunologia Clínica
Prof Robson Vasconcelos
Testes 
Sorológicos
Relembrando…
Anticorpos são moléculas
secretadas pelas células B
em resposta a um agente
imunogênico
Relembrando…
Antígenos- moléculas reconhecidas
sistema imune. pelo
Epítopos ou determinantes
antigênicos- são sítios nos antígenos
aos quais os receptores de antígenos
reconhecem/ligam.
Relembrando…
Interação Ag-Ac
É uma associação bimolecular semelhante à interação de enzimas com
seus substratos ou de hormônios com seus receptores, com uma distinção
bem evidente o Ac não provoca nenhuma alteração química irreversível na
molécula de Ag, portanto, o produto formado (Ag-Ac) se dissociar nos seus
2 componentes
Interação Ag-Ac
Devido a interação Ag-Ac:
• Possibilidade de desenvolvimento de uma variedade de ensaios;
• Podem detectar e mensurar Ags e Acs
• Podem ser utilizadas no diagnóstico de infecções
• Monitoramento de intensidade de respostas humorais após a vacinação
• Ensaios podem diferir em limiar de detecção, sensibilidade,
especificidade e reprodutibilidade
• Podem ser qualitativos e quantitativos
O que procuramos em
testes sorológicos?
Afinidade
Refere-se à força da interação entre um determinante antigênico (epítopo)
e o parátopo de um Ac homólogo.
Avidez
A força total de ligações entre um Ag com vários determinantes antigênicos
(epítopos) e Acs multivalentes.
Especificidade
É a habilidade do anticorpo em distinguir seu imunógeno de outros
antígenos. Conceito de chave e fechadura
Reatividade Cruzada
É a habilidade de um Ac reagir através de seu parátopo com mais que um
determinante antigênico.
É a habilidade de uma população de moléculas de Acs reagirem com mais
de um Ag
Imunodiagnóstico
• Diagnóstico laboratorial realizado por meio de técnicas imunológicas.
• Busca: Anticorpo ou Antígeno no organismo vertebrado suspeito de
sorológicas.
• Primários  detectam a interação direta entre antígeno e anticorpo.
Ensaios marcados. Ex.: Imunoensaios (Imunofluorescência e ELISA).
• Secundários  detectam consequências da interação entre antígeno e
anticorpo  mudanças no estado físico do antígeno. Ensaios não
marcados. Ex.: Aglutinação e precipitação.
Imunodiagnóstico
IMUNOENSAIOS
• ELISA
• Imunofluorescência
PRECIPITAÇÃO
• Imunodifusão dupla
• Imunodifusão radial
AGLUTINAÇÃO
• Aglutinação direta e indireta
• Inibição da aglutinação
• Teste de Coombs*
Imunodiagnóstico
• Todos os testes baseados nas reações Ag/Ac dependerão da formação
de rede ou eles terão de utilizar outras vias para detectar pequenos
complexos imunes
• Todos testes baseados nas reações Ag/Ac podem ser usados para
detectar o Ag ou Ac
Existe um limiar para
detecção?
Quais os principais
imunoensaios?
Aglutinação
• Formação de rede
• Simples, barato e um pouco sensível
• Ac + Ag (partículas)
• Qualitativo
• Título: maior diluição que ainda causa
aglutinação (semi-quantitativo)
• Existem vários tipo:
- Aglutinação direta e indireta
- Inibição da aglutinação
Corresponde ao percentual de 
resultados positivos dentre as 
pessoas que tem uma determinada 
doença ou condição clínica
Aglutinação Direta
• Células ou partículas insolúveis + AC  Aglutinação
• Exemplo: Sistema ABO
Aglutinação Indireta (passiva)
• Ag associado com outras superfícies + AC  Aglutinação
• Exemplo: Aglutinação por partículas de látex
Inibição da Aglutinação
Precipitação – Imunodifusão Dupla
• Qualitativo e semiquantitativo*
• Coloca-se agarose sobre uma lâmina
• Em seguida, faz-se pequenos orifícios no gel e são adicionados as
soluções testes de Ag e Ac
Precipitação – Imunodifusão Dupla
• As soluções sofrem difusão e, quando o Ag e o Ac se encontram em
zona de equivalência, se observa a reação pela formação de uma linha
de precipitação:
Precipitação – Imunodifusão Radial
• Coloca-se agarose que
contém Ac incorporado na
sua constituição em uma
lâmina
• Em seguida, faz-se
pequenos orifícios no gel e
são adicionados as soluções
testes de Ag
Testes Fluorescentes
Reação de Imunofluorescência Direta
• É a detecção direta de antígenos usando anticorpo antígeno-específico
marcado com substância fluorescente
• Utilizado para detectar antígenos em tecidos biológicos (material de
biópsias,vírus, bactérias, células etc.).
• Utilizamos microscópio de fluorescência
• Qualitativo
Testes Fluorescentes
Reação de Imunofluorescência Indireta
• O anticorpo presente na amostra do paciente reage com um antígeno
específico fixado em uma lâmina de microscopia
• Após lavagem, é adicionado um anticorpo anti-humano (conjugado)
marcado com substância fluorescente
• Após um segundo passo de lavagem, a observação de fluorescência é
feita ao microscópio fluorescente em câmara escura.
• Qualitativo
Direta Indireta
Como mensurar os
níveis de anticorpos?
Mensuramos os níveis
de antígenos?
Elisa
• O teste detecta, identifica e quantifica Ag
ou Ac, utilizando conjugados com
enzimas.
• O produto final corado surge por ação da
enzima que converte um substrato incolor
em um produto colorido (ou o substrato
alterado pela enzima induz mudança de
cor de uma substância indicadora).
• A quantidade de Ag ou Ac  produto final
corado, através de leitura em
fotocolorímetro
Até a próxima