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Hematopoiese & Funções do Sangue Prof. Rafaella Cardoso Análises Clínicas III Rafaella.cardoso@ulife.com.br Uma Breve História do Sangue • 3000 A.C. registram as primeiras inscrições cuneiformes com possível significado de sangue; • Antigos hebreus definiam o sangue como princípio vital (alma); • 1628: circulação do sangue descrita por Harvey; • 1678: glóbulos vermelhos desenhados por Swammerdam; • 1770-1777: descrição dos leucócitos e alguns fatores de coagulação por Hewson. Hematopoiese • Todas as células circulantes derivam de células-tronco pluripotentes na medula óssea; • Três tipos principais: • Eritrócitos (glóbulos vermelhos) • Leucócitos (glóbulos brancos) • Plaquetas Hematopoiese embrionária e fetal • Primeiro mês de vida pré-natal: primeiras células sanguíneas surgem externamente ao embrião ➔ ilhas de sangue; • Na sexta semana, hematopoiese se inicia no fígado; • Fase intermediária da vida fetal: baço e linfonodos exercem papel minoritário, enquanto o fígado domina o processo; • Segunda metade da vida fetal: medula óssea vai se tornando mais importante na produção de células sanguíneas. Pró-normoblasto H e m a to p o ie se ( o ri g e m e M A T U R A Ç Ã O d e c é lu la s d o s a n g u e ) Sangue • Tecido fluido; • Parte celular e parte líquida; • 45% de células (hematócrito); • 55% de líquido (plasma); • Um adulto pode ter de 4 a 6 litros de sangue. Elementos Celulares Plasma • Eritrócitos • Leucócitos • Plaquetas • Água • Proteínas • Eletrólitos • Lipídios • Glicose • Hormônios O que é sangue? • Formado por líquido plasmático e elementos figurados • Volume: ~70 mL / Kg (5-6L homens e 4-5L mulheres) No plasma → Proteínas da coagulação, anticorpos, nutrientes, metabólitos, ... Leucócitos→ neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos Sangue Hematócrito • Volume de massa eritrocitária circulante; • Manutenção dos níveis normais; • Mantém viscosidade normal; • Condição excelente para trocas gasosas; • Entre 40-45% ➔ melhor oxigenação dos eritrócitos e oferta de oxigênio para os tecidos. Hct Células Sanguíneas (Maduras) Neutrófilo segmentado Eosinófilo Basófilo Linfócito Monócito Plaquetas Eritrócito Plasma • Composto por 92% de água; • 8% de proteínas, sais e substâncias orgânicas; • Varia: altura, peso e sexo; • 1,2x mais viscoso que a água. Plasma Proteínas Plasmáticas • Um dos componentes mais importantes; • 100 tipos diferentes; • Albumina; • Pressão osmótica coloidal (pressão oncótica); • A maioria é produzida nos hepatócitos; • Exceção: imunoglobulinas (linfócitos B/plasmócitos). Principais Proteínas Plasmáticas Albumina Ceruloplasmina Imunoglobulinas (anticorpos) Lipoproteínas Fatores de coagulação α-1-antitripsina Fibrinogênio Transcobalamina Proteínas do sistema complemento α-1-glicoproteína Transferrina Haptoglobina Plasminogênio Eletroforese de Proteínas Séricas Paciente saudável Funções do Sangue • Transporte: • Oxigênio e Dióxido de Carbono; • Nutrientes, proteínas, hormônios; • Regulação: • Temperatura; • pH; • Proteção: • Hemostasia; • Sistema imunológico. Eritrócitos • Representam cerca de 45% do sangue total; • Não é uma célula verdadeira (não tem núcleo); • Tempo médio de vida ➔ 120 dias. Hct HEMÁCIAS (eritrócitos ou glóbulos vermelhos) • Células anucleadas • Hemoglobina - Hb • Hemocatérese – Degradação após 120 dias, por macrófagos residentes no baço e fígado. Quantidade de Eritrócitos • Hemácias • Mulher: 4.000.000 – 5.400.000 por µL de sangue; • Homem: 4.500.000 – 6.100.00 por µL de sangue. • Hematócrito • Mulher: 36-45%; • Homem: 41-50%. Função dos Eritrócitos • Trocar dióxido de carbono por oxigênio na circulação pulmonar; • Trocar oxigênio por dióxido de carbono nos tecidos periféricos e transportar dióxido de carbono de volta para os pulmões. Eritropoiese • Formação dos eritrócitos; • Maior parte acontece na medula óssea; • Pequena parte no sangue periférico; • Estimulada pela eritropoetina; • A cada dia são produzidos 1 trilhão de novas hemácias. Eritropoiese Proeritroblasto Eritroblastos ini ciais Eritroblastos policromáticos Eritroblastos or tocromáticos Reticulócitos Eritrócitos Eritrócitos • Cada proeritroblasto origina 16 eritrócitos maduros; • Reticulócitos ➔ resíduos de RNA • Disco bicôncavo. Regulação da Produção de Eritrócitos • Hormônio: eritropoetina; • Produzida pelos rins; • Estimula a produção de mais eritrócitos. • Aumentada na anemia; HIF = Fator indutor de Hipóxia Hemocatérese • Processo de destruição fisiológica • Tempo médio de vida ➔ 120 dias; • Percorrem todos os vasos do corpo ➔ sofrem agressões; • Envelhecem ➔ membrana rígida e deformável; • Removidas pelos macrófagos do baço e fígado. Hemoglobina • Formada por duas partes: • Heme ➔ Ferro; • Globina ➔ Porção proteica. 640 milhões de moléculas de hemoglobina Em UM eritrócito... Heme • Síntese ➔ mitocôndrias; • Série de reações bioquímicas; • Formado por 4 anéis pirrólicos e 1 átomo de ferro Globina • Maior porção da molécula de Hb; • Síntese ➔ ribossomos citoplasmáticos; • 4 tipos: • Alfa; • Beta; • Gama; • Delta Heme + Globina = Hemoglobina • 4 grupos Heme; • 4 globinas; • Pares Tetrâmero Tipos de Hemoglobina Hemoglobina Composição A 2 globinas α + 2 globinas β A2 2 globinas α + 2 globinas δ F 2 globinas α + 2 globinas γ • Hb A ➔ 95 – 98% • Hb A2 ➔ 1,5 – 3% • Hb F ➔ 0 – 1 % Introdução ao Hemograma • O hemograma é a semiologia das células do sangue; • Para uma exata contagem de glóbulos e uma correta interpretação da microscopia, é necessário que o sangue seja coletado com a quantidade correta de anticoagulante adequado e entregue sem demora ao laboratório, a fim de que não ocorram alterações artefatuais; • Coleta ruim = Hemograma ruim. Introdução ao Hemograma • A avaliação quantitativa é totalmente automatizada, feita em contadores eletrônicos; • A avaliação qualitativa – identificação dos subtipos celulares e das anormalidades morfológicas relevantes, especialmente da série vermelha – ainda não chega à perfeição da tecnologia numérica; • O hemograma é o exame complementar mais requerido nas consultas. Fases dos Exames Laboratoriais • Diferentes processos, alguns de difícil controle (ex: preparo do paciente); • Cuidado para garantir a amostra biológica nas melhores condições possíveis. • Análise das amostras; • Fase em que há maiores chances de aplicação de controles. • Verificação dos resultados; • Comunicação do laudo; • Análise e tomada de decisão médica/terapêutica. Pré-Analítica Analítica Pós-Analítica Fases dos Exames Laboratoriais Estrutura Física do Local de Coleta Espaço Físico (RDC/ANVISA Nº 50, 02/2002) • Área mínima – 1,50 m2 / Box – 1 para cada 15 coletas/hora. Um dos boxes deve ser destinado à maca e com dimensão para tal. • Piso – Liso (sem frestas) resistentes ao higienização, e resistente aos processos desgaste, lavável, impermeável de fácil de limpeza, desinfecção e descontaminação. • Paredes - Superfície lisa e uniforme de fácil higienização e resistente aos processos de limpeza, descontaminação e desinfecção. • Teto - Contínuo, de fácil higienização, sendo proibido o uso de forros removíveis e resistente aos processos de limpeza, descontaminação e desinfecção. • Porta - Revestida com material lavável. Vão mínimo de 0,80m. Equipamentos e Acessórios Cadeiras de Coleta As cadeiras de coleta devem proporcionar o máximo de conforto e segurança aos pacientes. O conforto ergonômico e acessibilidade do paciente e do flebotomista devem ser considerados. A cadeira deve possuir braços ajustáveis em ambos os lados de apoio tanto para facilitar a coleta como para prevenir a queda do paciente em caso de desmaio. Equipamentos e Acessórios O carro ou mesa auxiliar de coleta deve ser de fácil higienização e resistente aos processos de limpeza, descontaminação e desinfecção. É desejável que seja capaz de armazenar os materiais necessários à coleta. Móvel Auxiliar Equipamentos e Acessórios Suprimentos • Antissépticos; • Compressas algodão; • Seringas e vácuo; de gaze ou dispositivos de • Agulhas e scalps; • Tubos de coleta; • Dispositivo de torniquete; • Curativo adesivo; • Luvas de látex. Antissépticos Álcool etílico ou isopropílico 70% Iodeto de povidona 1 a 10% Gliconato de Clorexedina Seringas e Agulhas Tubos de Coleta Aditivos Cor Descrição Citrato de Sódio Azul O Citrato de Sódio Tamponado é utilizado para prova de coagulação em amostras. Diferentes concentrações de Citrato de Sódio podem ter efeitos significativos nas análises terapias anti-trombóticas, Tempo de Protombina (TP) e Tempo de Tromboplastina ativada (TTPa). Ativador de Coágulo Vermelho Possui ativador de coágulo (sílica) jateado na parede do tubo, fazendo com que o processo de coagulação da amostra seja acelerado. Utilizados para determinação em soro nas áreas de Bioquímica e Sorologia. Podem ser utilizados para tipagem ABO, RH, pesquisa de anticorpos, fenotipagem eritrocitária e teste de antiglobulina direta. Ativador de Coágulo + Gel Amarelo Contém ativador de coágulo jateado na parede do tubo que faz com que o processo de coagulação seja acelerado e gel separador, para obtenção de um soro com melhor qualidade. Utilizados em rotinas de bioquímica, sorologia, imunologia, marcadores cardíacos e tumorais. EDTA Roxo Possui EDTA jateado na parede do tubo e são utilizados em bancos de sangue. O EDTA é o anticoagulante recomendado para rotinas de hematologia por ser o melhor anticoagulante para a preservação da morfologia celular. Heparina de Lítio Verde Possuem Heparina de Lítio jateada na parede do tubo. São utilizados quando é necessário o uso de plasma para determinações Bioquímicas. Estes aditivos são anticoagulantes que ativam as enzimas antiplaquetárias, bloqueando a cascata de coagulação. Fluoreto de Sódio + EDTA Cinza Utilizados na dosagem de glicose, lactato e hemoglobina glicada no plasma. O Fluoreto de Sódio é utilizado como inibidor glicolítico e o EDTA como anticoagulante, preservando a morfologia celular. Tubos de Coleta Ordem correta: 1. Azul (citrato de sódio) 2. Amarelo/vermelho (ativador de coágulo) 3. Verde (heparina) 4. Lilás/roxo (EDTA) 5. Cinza (fluoreto de sódio/EDTA). O QUE ACONTECE SE ALTERAR A SEQUÊNCIA DOS TUBOS? Contaminação do tubo subsequente e geração de resultados alterados nos analíticos sensíveis a este tipo de interferência Exemplo: coletar um tubo contendo aditivo de heparina (anticoagulante natural) antes do aditivo citrato de sódio (utilizado para coagulação) pode levar a heparina para dentro do tubo de citrato de sódio. Isso poderá interferir nos resultados dos fatores de coagulação . Procedimento de Coleta 1. Reunir o equipamento e incluir agulha e seringa ou tubo para coleta a vácuo, dependendo do que tenha de ser usado. 2. Faça a higiene das mãos (se usar sabão e água, enxugue as mãos com toalhas de uso único). 3. Identifique e prepare o paciente. Procedimento de Coleta 4. Escolha o local, de preferência na área antecubital (ou seja, na curvatura do cotovelo). Apalpe a área para localizar os marcos anatômicos. NÃO toque o local uma vez aplicado álcool ou outro antisséptico. 5. Aplique um torniquete cerca de 4–5 dedos acima do sítio escolhido para a punção. Procedimento de Coleta 6. Peça ao paciente que feche a mão para que as veias se tornem mais proeminentes. 7. Calce luvas não estéreis bem ajustadas. 8. Limpe o sítio usando álcool isopropílico de 70% por 30 segundos e deixe secar completamente (30 segundos). Procedimento de Coleta 9. Firme a veia segurando o braço do paciente e coloque um polegar ABAIXO do sítio da venopunção. 10. Penetre na veia rapidamente, num ângulo de 30°. 11. Uma vez colhido sangue suficiente, afrouxe o torniquete ANTES DE retirar a agulha. Procedimento de Coleta 12. Retire delicadamente a agulha e dê o paciente uma gaze limpa ou bola de algodão seca para aplicar ao local com pressão suave. 13. Descarte a agulha e seringa usada ou o dispositivo de coleta de amostra num recipiente resistente a punção. 14. Verifique a exatidão da etiqueta e dos formulários. Procedimento de Coleta Coleta de Sangue Venoso à Vacuo O que é avaliado em um Hemograma? • Eritrograma • Hemácias • Hemoglobina (Hb) • Hematócrito (Hct) • Índices Hematimétricos • Volume Corpuscular Médio (VCM) • Hemoglobina Corpuscular Média (HCM) • Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM) • Índice de Anisocitose Eritrocitária (RDW) • Descrição Morfológica • Leucograma • Contagem global • Contagem diferencial • Descrição morfológica • Plaquetograma • Contagem do número de plaquetas • Índices plaquetários: • Plaquetócrito (Ptc) • Volume plaquetário médio (VPM) • Índice de anisocitose plaquetária (PDW) • Descrição morfológica O que é avaliado em um Hemograma? Hematócrito • Hematócrito • % do sangue total composta pelos eritrócitos ➔ razão entre o volume da massa de eritrócitos e o volume de sangue total; • Varia com o número de hemácias e com o volume celular; • O resultado em % exprime a concentração de eritrócitos obtidos por centrifugação do sangue não coagulado. Hematócrito Hematócrito • Valores falsamente diminuídos • Longo período de centrifugação; • Microcentrífuga descalibrada; • Diluição com anticoagulante; • Armazenamento da amostra; • Microcitose; • Valores falsamente aumentados • Garroteamento excessivo; • Curto período de centrifugação; • Desidratação. Dosagem de Hb • Principal componente eritrocitário; • Dosagem realizada por métodos colorimétricos (hemoglobinometria) após conversão da hemoglobina em cianometamoglobina expressa em g/dL; • A dosagem de Hb está diretamente relacionada com o conteúdo e coloração do eritrócito, de grande valia no diagnóstico das anemias; Eritrograma: Valores de Referência* Índice Mulher Homem Eritrócitos 4,7 ± 0,6 M/µL 5,3 ± 0,6 M/µL Hematócrito 42,0 ± 6,0 % 47,0 ± 7,0 % Hemoglobina 13,6 ± 2,4 g/dL 15,3 ± 1,6 g/dL * em adultos Índices Hematimétricos: VCM • Volume corpuscular médio (VCM) • medida do volume médio dos eritrócitos; • VCM (fL) = Hct (%) x 10/nº de hemácias; • Através do VCM, classifica-se as anemias Macrocíticas, Microcíticas e Normocíticas como: Índices Hematimétricos: VCM Índices Hematimétricos: VCM • Microcitose • Hemácias abaixo de 80 fL; • Associada à deficiência de ferro e talassemias; • Macrocitose • Hemácias acima de 100 fL; • Associada à deficiência de vitamina B12, quimioterapia, doença hepática, hipotireoidismo e mieloma Índices Hematimétricos: HCM • Hemoglobina corpuscular média (HCM) • quantidade média de hemoglobina por eritrócito; • HCM = Hg (g/dL) x 10/hemácias (milhões); • Pouca utilidade. • Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM) • concentração média (massa/volume) da hemoglobina nos eritrócitos; • VR: 32-36%; • CHCM: Hg (g/Dl) x 100 / Hct (%); • Hipocrômica; • Normocrômica; Índices Hematimétricos: CHCM Histograma de Série Vermelha • É a curva de frequência da distribuição e tamanho dos eritrócitos; • Quando a curva situa-se à esquerda, denota-se microcitose e à direita, macrocitose. Índices Hematimétricos Índices Hematimétricos RDW (Red blood cell Distribution Width) • É a expressão numérica da ANISOCITOSE (diferentes tamanhos de hemácias), inversamente proporcional a homogeneidade da população eritróide. • VR: 11-14,5% Caso Clínico (O Primeiro de Muitos!) Anemia microcítica hipocrômica.