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RELATÓRIO DE PRÁTICA BIOLOGIA MOLECULAR CURSO: BACHAREL EM FARMÁCIA DISCENTE: MONICA FERREIRA REGIS MATRÍCULA: 01075553 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular DADOS DO(A) ALUNO(A): NOME: MONICA FRREIRA REGIS MATRÍCULA: 01075553 CURSO: BACHAREL EM FARMÁCIA POLO: UNINASSAU GRAÇAS PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): ORIENTAÇÕES GERAIS: • O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e • concisa; • O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema; • Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado); • Tamanho: 12; Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm; • Espaçamento entre linhas: simples; • Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). TEMA DE AULA: EXTRAÇÃO DE DNA RELATÓRIO: 1. Após realizar a atividade proposta pela professora, descrever detalhadamente o que ocorreu em cada etapa da extração de DNA do morango. Além de descrever o que está acontecendo visualmente, identificar o que acontece biologicamente com as células em cada uma das etapas. É obrigatório anexar pelo menos 1 foto de cada etapas do processo de extração. RESP. Preparação do morango: Nesta etapa, você deve lavar o morango e remover as sépalas (as folhinhas verdes). O morango é então colocado em um saco plástico resistente. Homogeneização: O morango é esmagado com o punho por pelo menos 2 minutos dentro do saco plástico. Isso quebra as células do morango, liberando o DNA. Adição da solução de extração: A solução de extração, que geralmente contém xampu ou detergente e sal, é adicionada ao conteúdo do saco. Esta solução RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ ajuda a romper as membranas celulares e nucleares, liberando ainda mais o DNA. Filtragem: O conteúdo do saco é filtrado para remover os sólidos maiores. O filtrado contém o DNA junto com outras moléculas menores. Precipitação do DNA: Álcool etílico gelado é adicionado ao filtrado. O DNA não é solúvel em álcool, então ele se precipita e pode ser visto como uma substância gelatinosa. Biologicamente, o que está acontecendo: 1. Durante a homogeneização, as células do morango são fisicamente quebradas, liberando o conteúdo celular, incluindo o DNA. 2. A solução de extração ajuda a romper as membranas lipídicas das células e do núcleo, liberando o DNA no líquido. 3. A filtragem remove os sólidos maiores, mas permite que o DNA e outras moléculas menores passem. 4. Finalmente, a adição de álcool faz com que o DNA se precipite, pois o DNA não é solúvel em álcool. VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS REAGENTES E OUTROS MATERIAIS 3 – Béqueres (ou recipiente semelhante) Gaze ou filtro de papel 1 – Pipeta ou conta gotas Água 1 – Colher de sopa ou café Detergente (sem cor) 1 – Saco plástico Álcool etílico (gelado) 1 – Bastão de vidro Sal de cozinha 1 – Funil 2 – Morangos maduros 1 – Tubo de ensaio 1 – Faca RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ FOTOS DE CADA ETAPA DO PROCESSO DA EXTRAÇÃO DO MORANGO: Imagens de autoria da aluna, retirado em sala de aula. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ TEMA DE AULA: ELETROFORESE 1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese RESP. Equipamentos: Cuba de Eletroforese: É um recipiente onde o gel é colocado durante a corrida eletroforética. Reagentes: Gel de Agarose: Usado principalmente para separar ácidos nucleicos, como DNA e RNA. O gel de agarose tem poros grandes, permitindo a separação de moléculas grandes. Gel de Poliacrilamida (SDS-PAGE): Usado para separar proteínas. O SDS (dodecil sulfato de sódio) é um detergente que denatura as proteínas, conferindo-lhes uma carga negativa uniforme e permitindo que sejam separadas por tamanho. Eletroforese Capilar: Uma técnica mais avançada onde as moléculas são separadas em um capilar cheio de um polímero líquido, em vez de um gel sólido. É muito eficiente para separar pequenas quantidades de amostras complexas. Lembre-se, a eletroforese é uma técnica de laboratório utilizada para separar moléculas com base em seu tamanho e carga elétrica. Ela é amplamente utilizada em biologia molecular e bioquímica para análise de DNA, RNA e proteínas, auxiliando no diagnóstico de doenças, pesquisa genética, e no desenvolvimento de biotecnologia. 2. Descrever cada etapa dessa metodologia RESP. Preparação do Gel: O gel de agarose é preparado dissolvendo-se agarose em água fervente e deixando-a esfriar para formar um gel sólido1. O gel é uma matriz de moléculas de agarose que são mantidas unidas por ligações de hidrogênio e formam micro poros. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ Carregamento das Amostras: As amostras de DNA são carregadas nos poços (cavidades) localizados numa das extremidades de um gel. Aplicação da Corrente Elétrica: Uma corrente elétrica é aplicada através do gel. Como o DNA é negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo positivo. Separação das Moléculas: Para chegar ao eletrodo positivo, o DNA deve migrar através do gel de agarose1. Os fragmentos de DNA menores podem migrar através de um gel de agarose mais rapidamente que os fragmentos de DNA maiores. A velocidade de migração de fragmentos de DNA lineares através da agarose é inversamente proporcional ao log10 de seus pesos moleculares. Visualização dos Resultados: Após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluorece (torna-se visível) vivamente em contato com a luz ultravioleta. Dessa forma pode-se localizar as bandas que correspondem ao DNA. Isolamento e Purificação: Os fragmentos de DNA podem, então, ser isolados e purificados a partir dos géis de agarose. Imagens de autoria da aluna, retirado em sala de aula. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ 3. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. RESP. Resolução: Géis de poliacrilamida têm maior capacidade de resolução, podendo separar fragmentos de DNA que diferem por apenas par de base (pb). Eles são mais efetivos para separar pequenos fragmentos de DNA (5-500 pb – pares de base). Extensão de Separação: Géis de agarose têm uma menor capacidade de resolução comparada ao gel de acrilamida, mas possuem uma maior extensão de separação. Fragmentos de DNA (50-20.000 pb) podem ser separados em géis com diferentes concentrações. Faixa de Separação: A concentração de agarose determina a faixa de separação. Por exemplo, um gel de agarose de 0,3% pode separar moléculas lineares de DNA de 5-60 kilobases (kb), enquanto um gel de 2,0% pode separar moléculas de 0,1-2 kb. Migração do DNA: O tamanho da molécula de DNA, a concentração da agarose, a voltagem aplicada, o tipo de agarose e o tampão são alguns dos fatores que influenciam a migração do DNA no gel de agarose. De acordo, com a concentração do gel é ajustada de acordo com o tamanho das moléculas que se deseja separar. Géis de baixa concentração são melhores para separar moléculas maiores, enquanto géis de alta concentração são usados para separar moléculas menores. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: _10 / 07 / 2024_ REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGOhttps://www.manualdabiologia.com.br/2016/08/extracao-de-dna-de-morango.html Extraindo DNA do morango: o que aprendemos? https://pontobiologia.com.br/extraindo-dna-do-morango/#google_vignette DNA de morango https://www.invivo.fiocruz.br/experimente/dna-de-morango/ Eletroforese https://www.infoescola.com/bioquimica/eletroforese/ Eletroforese: o que é, para que serve e como é feita https://www.tuasaude.com/eletroforese/ Eletroforese em gel https://pt.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and- regulation/biotechnology/a/gel-electrophoresis Separando fragmentos de DNA: eletroforese em gel https://www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/eletroforese.php Para separar, identificar e purificar fragmentos de DNA. https://biologia.ifsc.usp.br/biomolcel1/roteiros/eletroforese.pdf