avaliação I biologia molecular

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<p>15/11/2023, 22:36 Avaliação Individual A+ Alterar modo de visualização Peso da Avaliação 1,50 Prova 74655909 Qtd. de Questões 10 Acertos/Erros 9/1 Nota 9,00 1 A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) se refere à replicação in vitro de um fragmento de DNA. Sobre PCR, assinale a alternativa CORRETA: A A ligação dos primers à fita de DNA é denominado como desnaturação. B O processo de replicação in vitro, depende do uso de primers (oligonucleotídeos sintéticos), com sequências de 18 a 22 nucleotídeos, que seja complementar ao gene de interesse. C O processo do PCR não necessita da utilização de nucleotídeos. D A enzima DNA polimerase humana é uma das principais responsáveis pelo sucesso da técnica in vitro. 2 O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com seu objetivo de pesquisa, a PCR qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com essas duas técnicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra. ( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas relativas à quantidade de expressão de um gene. ( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A B C D 3 "A PCR pode ser precedida por uma reação de transcrição reversa (RT) para a obtenção de cDNA a partir de RNA (RT-PCR), representando, por exemplo, uma possibilidade de análise de expressão em células ou tecidos" (SANTOS, 2004, s.p.). Sobre os componentes essenciais para a realização da técnica de PCR e RT-PCR, analise as sentenças a seguir: about:blank 1/5</p><p>15/11/2023, 22:36 Avaliação I Individual I- Para processo de PCR convencional, utiliza-se a fita molde de DNA, os nucleotídeos ou dNTPs, os primers e a Taq DNA polimerase. Para processo de RT-PCR, é utilizada uma enzima denominada como termoestável, como a Taq DNA polimerase. III- Para processo de RT-PCR, utiliza-se a fita molde de mRNA, os nucleotídeos ou dNTPs, primers oligodT e enzima transcriptase reversa. Assinale a alternativa CORRETA: Fonte: SANTOS, Carlos Ferreira dos et al. Transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase: princípios e aplicações em odontologia. J. Appl. Oral Sci., V. 12. n. 1, p. .1-11, 2004. A Somente a sentença I está correta. B As sentenças I e II estão corretas. C As sentenças I e III estão corretas. D As sentenças II e III estão corretas. 4 [Laboratório Virtual Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo sumário da aula prática, as amostras contendo DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos "livres" de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ou 80 °C). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com processo de extração de DNA e RNA identificado na prática, associe os itens, utilizando código a seguir: I- Etapa de Lise. II Etapa de Ligação. Etapa de Lavagem. IV- Etapa de Eluição. Pipete 25 da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 da amostra de sangue no mesmo tubo e, por último, pipete 200 do tampão lise S no tubo. Tampe homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube Eppendorf por 15 min. ( ) Pipete 210 de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 do Eppendorf para tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. ( ) Retire Eppendorf da centrífuga, descarte tubo de coleta e coloque tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 do tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente. ( Retire Eppendorf da centrífuga, descarte tubo de coleta e coloque tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A II III IV I. B C I II IV III. D IV III II I. about:blank 2/5</p><p>15/11/2023, 22:36 Avaliação I Individual 5 As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo com essas enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas: ( ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar DNA em regiões específicas, permitindo a manipulação do DNA. ( ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e purificada a partir de colônias dessas bactérias. ( ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões de clivagem aleatórias de 4 a 8 nucleotídeos. Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA: A B C D 6 Com passar do tempo, as técnicas de sequenciamento ficaram mais sofisticadas e automatizadas. Sobre sequenciamento de segunda geração, analise as sentenças a seguir: I- O Next Generation Sequencing (NGS) não utiliza nucleotídeos terminadores de cadeira, permitindo a criação de plataformas mais eficientes e rápidas. II- Os métodos de segunda geração compreendem uso de plataformas portáteis com processamento rápido e eficiente, em plataformas do tamanho de um pen drive. Os métodos de segunda geração compreendem pirosequenciamento, sequenciamento por síntese, sequenciamento por terminação de cadeia reversível, sequenciamento por hibridização e ligação, dentre outros. Assinale a alternativa CORRETA: A As sentenças I e III estão corretas. B Somente a sentença II está correta. C As sentenças I e II estão corretas. D Somente a sentença I está correta. 7 A escolha do gel para a técnica de eletroforese deve-se dar através do tamanho da molécula a ser isolada e do objetivo do isolamento. Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida para a técnica de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir: I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base nitrogenada de diferença. A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um agrupamento de moléculas de tamanho semelhantes. about:blank 3/5</p><p>15/11/2023, 22:36 Avaliação Individual III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar, enquanto fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose. Assinale a alternativa CORRETA: A As sentenças I, II e III estão corretas. B Somente a sentença II está correta. C Somente a sentença III está correta. D Somente a sentença I está correta. 8 [Laboratório Virtual Hibridização] Segundo sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica que tem princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base (adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da espécie. Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA: A A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem uso de scanner. B O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação. C A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes. D Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho. 9 A transcrição reversa é uma reação que ocorre pela ação da enzima transcriptase reversa ou RT. Essa enzima é uma DNA polimerase dependente de RNA, ou seja, ela é capaz de sintetizar uma fita de DNA utilizando como molde a fita simples de RNA. Sua descoberta se deu a partir da observação de que, quando os retrovírus, cujo material genético é um RNA, infectam um hospedeiro, RNA viral é convertido em DNA. Sobre a avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas: Para processo de transcrição reversa são necessários Oligonucleotídeos sintéticos, os quatro dNTPs, a amostra de RNA e os cofatores enzimáticos. Ao invés da Taq DNA polimerase, essa técnica utiliza a enzima transcriptase reversa. PORQUE objetivo final da técnica é originar DNA complementar ou cDNA, que é formado por essa enzima. Assinale a alternativa CORRETA: A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I. B As asserções I e II são proposições falsas. C As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I. D A asserção I é uma proposição verdadeira, mas a II é uma proposição about:blank 4/5</p><p>15/11/2023, 22:36 Avaliação I Individual 10 A descoberta da estrutura do DNA, por James Watson, Francis Crick, Maurice Wilkins e Rosalind Franklin, em 1950, possibilitou entendimento a respeito da replicação e transmissão da informação genética de uma célula à outra. Sobre DNA, assinale a alternativa CORRETA: A O DNA é formado por duas fitas que não se complementam entre si. B O DNA é composto por cinco nucleotídeos, adenina, uracila, timina, guanina e citosina. O DNA é uma estrutura em dupla hélice, composta pela pentose, denominada desoxirribose, os nucleotídeos, adenina, timina, citocina e guanina, e fosfato. D O DNA é uma estrutura em fita simples, composta pelos nucleotídeos adenina, timina, citosina e guanina. Imprimir about:blank 5/5</p>