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<p>Microbiologia Geral</p><p>Diluição da Unidade Analítica</p><p>Professora: Virlane Kelly Lima</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Unidade analítica</p><p>Número de unidade analítica</p><p>a) Unidade analítica para os ensaios de presença/ausência com</p><p>enriquecimento em caldo específico.</p><p>Uma unidade analítica para cada ensaio</p><p>Salmonella</p><p>Listeria monocytogenes</p><p>Yersinia enterocolítica</p><p>Escherichia coli</p><p>Vibrio cholareae</p><p>Vibrio parahaemolyticus</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>b) Unidades analíticas para os ensaios com tratamento diferenciado</p><p>da amostra</p><p>Uma unidade analítica para cada ensaio</p><p>Esterilidade comercial</p><p>Contagem de esporos de bactérias</p><p>Contagem de bolores termorresistente.</p><p>c) Unidade analítica para ensaios gerais de quantificação</p><p>Ensaios feitos com a mesma unidade analítica</p><p>Contagem total de aeróbios mesófilos ou psicrófilos</p><p>Contagem de bactérias láticas</p><p>Contagem de enterococos</p><p>Contagem de S. aureus</p><p>Contagem de B. cereus</p><p>Contagem C. perfringens.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Procedimento para a homogeneização e retirada de unidade</p><p>analítica de produtos líquidos</p><p>Embalagem suficiente para homogeneização.</p><p>Inverter a embalagem 25 vezes.</p><p>Se não houver espaço para agitação, utilizar um segundo frasco.</p><p>Se houver formação de espuma esperar que a espuma disperse.</p><p>Se a amostra for gaseificada: agitar em shaker.</p><p>Retirada com pipeta: profundidade não maior que 2,5 cm abaixo</p><p>da superfície.</p><p>Espaço entre homogeneização e retirada da amostra:3minutos.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Procedimento para a homogeneização e retirada de unidade analítica</p><p>de produtos sólidos ou líquidos concentrados.</p><p>Produtos em pó: homogeneizar invertendo a embalagem</p><p>com as mãos.</p><p>Iogurtes com pedaços de frutas: liquidificador</p><p>Queijos:macerar todo o conteúdo e retirar a unidade</p><p>analítica.</p><p>Amostra congelada: descongelar sob refrigeração(0 a 4°C)</p><p>por não mais de 24h na embalagem original.</p><p>Grande peças de carnes: usar furadeira elétrica.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Procedimento para a homogeneização e retirada de unidade analítica</p><p>de produtos sólidos ou líquidos concentrados.</p><p>Amostra heterogênea: porções com diferentes camadas</p><p>ou liquidificar.</p><p>Quantidade de amostra menor que a unidade analítica</p><p>requerida: metade da análise, guardar a contra prova.</p><p>Homogeneização em liquidificador: diluente cobrir as</p><p>facas do aparelho.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Procedimento para retirada da unidade analítica pela técnica do</p><p>esfregaço da superfície.</p><p>Alimentos com contaminação superficial</p><p>Ex:carcaças de bovinos, suínos, aves e peixes.</p><p>Análise de equipamentos, mesas, utensílios e</p><p>embalagens.</p><p>Esfregaço: swabs estéreis, esponjas, tampões de algodão</p><p>estéreis.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Procedimento para retirada da unidade analítica pela técnica da</p><p>lavagem superficial.</p><p>Alimentos com contaminação superficial</p><p>Ex:carcaças de aves inteiras, peixes,cascas de ovos, grãos,</p><p>sementes, castanhas, amendoins</p><p>Mergulhar em diluente adequado contido em bolsa</p><p>estéril.</p><p>Aplica-se a análise de embalagens.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Guarda de contra-amostra</p><p>Guarda de material remanescente nas mesmas condições</p><p>de análise.</p><p>Amostras perecíveis: congeladas</p><p>Unidade amostral swab ou lavagem: congelar parte não</p><p>utilizada do diluente.</p><p>Tempo de guardar contra prova: até obtenção dos</p><p>resultados, ou a critério do laboratório.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Preparo da 1° diluição da unidade analítica</p><p>Variam em função do tipo de amostra e do tipo de ensaio.</p><p>a) Diluentes para ensaio de presença/ausência</p><p>Diluição e homogeneização diretamente no caldo de</p><p>enriquecimento.</p><p>b) Diluente para ensaios gerais de quantificação</p><p>O Compendium recomenda água peptonada 0,1%, ou tampão</p><p>fosfato pH7,2.</p><p>A ISO 6887-1 recomenda água salina peptonada e água</p><p>peptonada tamponada.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Preparo da 1° diluição da unidade analítica</p><p>Há casos que o diluente recomendado é diferente.</p><p>Exemplos: amostras líquidas de baixa contaminação.</p><p>chocolate em barra: pré-aquecer o diluente a 40°C.</p><p>Amostras líquidas de baixa contaminação: inocular a alíquota</p><p>diretamente no meio de cultura</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Como obter uma diluição inicial de 1:10 (10-1)</p><p>m gramas ou mL da amostra para 9xm mL do diluente</p><p>Ex: 25g de amostra, adicionar (9x25)mL de diluente=225mL</p><p>Como obter uma diluição inicial diferente de 1:10</p><p>Para definir o volume de diluente necessário para obter uma</p><p>determinada diluição 1:k da amostra, usar a relação</p><p>v=[(k.m)-m]</p><p>Exemplo: Diluição 1:50 de uma unidade analítica de 10g</p><p>V=[(50x10)-10]=490mL de diluente</p><p>Diluição 1:50 de uma unidade analítica de 20g</p><p>V=[(50x20)-20]= 980mL de diluente</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Diluição decimal seriada da amostra</p><p>É requerida para ensaios quantitativos</p><p>Reduzir o número de microrganismos por unidade de volume,</p><p>permitindo a contagem.</p><p>Diluição decimal para facilitar os cálculos.</p><p>Número de diluições depende do nível de contaminação.</p><p>Permita a contagem em placas: número de colônia de 25 a 250, para</p><p>bolores e leveduras de 15 a 150,</p><p>Contagem por NMP tubos positivos nas menores diluições e negativos</p><p>nas maiores.</p><p>2° diluição logo após a 1°.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Diluição decimal seriada da amostra</p><p>Incerteza de 5%.</p><p>Pipetas com capacidade no máximo 10 vezes superior ao volume que</p><p>vai ser coletado.</p><p>Pipeta tocar qualquer superfície não estéril descartar e substituir.</p><p>Não flambar as pipetas.</p><p>Encher completamente e descarregar.</p><p>Esvaziar com a ponta encostada na superfície interna do tubo ou</p><p>fraco.</p><p>Líquido escorra pela parede.</p><p>Homogeneização da amostra e retirada da unidade</p><p>analítica</p><p>Como obter a segunda diluição (10-2)</p><p>Transferir 1 mL da primeira diluição(10-1) para 9mL de diluente.</p><p>Agitar se não houver partículas em suspensão.</p><p>Como obter as diluições subseqüentes</p><p>Proceder de maneira similar, transferindo 1 mL da amostra da diluição</p><p>anterior para 9mL de diluente.</p><p>Agitar o tubo 25 vezes ou agitador “vortex”.</p><p>Diluições seriadas</p><p>Diluições seriadas</p><p>Diluições seriadas</p>